SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在小尾寒羊卵巢活动中的功能分析

为探究SMAD基因家族重要成员SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在小尾寒羊繁殖活动中的生物学功能,利用生物信息学技术对SMAD2、SMAD3和SMAD4基因的蛋白理化性质、亲疏水性和亚细胞定位进行分析,并对其二级结构、蛋白互作进行预测及GO(gene ontology)和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)的富集分析;然后以小尾寒羊为研究对象,通过免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)确定SMAD2、SMAD3和SMAD4蛋白在卵巢组织中的表达,利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(western blot,WB)方法测定SMAD2、SMAD3和SMAD4基因mRNA及其编码蛋白在不同生理阶段卵巢组织和不同直径卵泡中表达水平。结果显示,SMAD2、SMAD3和SMAD4蛋白为亲水性蛋白,理论等电点分别为6.67、6.73和6.50,在不同生理阶段卵巢组织中的阳性表达主要位于卵母细胞、卵泡膜细胞和颗粒细胞,且二级结构中α螺旋和无规则卷曲的占比较高,其蛋白与FOXH1、ACVR1B、SMAD1、TGFβR1、TGFβR2、ZFYVE9、SKI、SKIL、TGIF1和ENSOARP0000001869蛋白存在互作关系。SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在TGF-β受体信号通路、TGF-β受体结合、TGF-β激活受体活性中发挥生物学功能,且在TGF-β信号通路富集。SMAD2和SMAD4蛋白在撤栓后42 h卵巢组织中的表达量显著高于撤栓后18 h,其mRNA表达趋势及其编码蛋白表达趋势总体一致;而SMAD3基因mRNA及其编码蛋白的表达量在不同生理阶段卵巢组织中差异不显著。SMAD3基因mRNA及其编码蛋白在中卵泡中的表达量显著高于大卵泡;SMAD2和SMAD4基因表达量在不同直径卵泡中差异不显著。综上所述,SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在小尾寒羊卵巢周期性活动中的生物学功能存在差异,SMAD2和SMAD4基因参与小尾寒羊发情初期至排卵前的卵巢生理变化,但不参与卵泡发育;而SMAD3参与卵泡发育。以上研究结果为进一步探索SMAD基因家族在小尾寒羊卵巢活动中的分子机理提供理论参考。

藏绵羊不同部位骨骼肌的品质及脂肪酸组成特点分析

为了比较藏绵羊不同部位骨骼肌的品质及脂肪酸组成差异,本研究选取繁育在青海省海晏县的3岁成年藏绵羊母羊,分析其臂三头肌、冈上肌、股四头肌、背最长肌、腰大肌、胸斜方肌和腓肠肌7个部位肉品质及脂肪酸组成。肉品质分析结果表明,宰后45 min藏绵羊冈上肌的红度值(a^(*), redness)最高,背最长肌的亮度值(L^(*), lightness)最接近中间值,胸斜方肌宰后45 min和24 h肌肉的亮度、红度和黄度值均显著低于其他部位肌肉(P <0.05);胸斜方肌的pH显著高于除背最长肌和腰大肌外的其他部位肌肉(P <0.05);背最长肌失水率显著低于臂三头肌、冈上肌、胸斜方肌及腓肠肌(P <0.05);背最长肌剪切力值最小,显著低于臂三头肌、胸斜方肌和腓肠肌(P <0.05)。脂肪酸测定结果表明,藏绵羊7个部位共检测到30种脂肪酸,且所有部位中的饱和脂肪酸(SFA)>单不饱和脂肪酸(MUFA)>多不饱和脂肪酸(PUFA),背最长肌和胸斜方肌SFA含量显著高于除腰大肌之外的其余各部位肌肉(P <0.05),胸斜方肌中的肉豆蔻酸(C14:0)含量最高;背最长肌中的棕榈酸(C16:0)含量高于臂三头肌和腓肠肌(P <0.05);腓肠肌中PUFA含量显著高于胸斜方肌和冈上肌(P <0.05);腓肠肌PUFA/SFA值显著高于冈上肌、背最长肌和胸斜方肌(P <0.05);背最长肌n-6/n-3 PUFA的比值更接近最佳比值(1.0或2.0)。综合分析,藏绵羊背最长肌的品质最优,其与腓肠肌的脂肪酸组成和含量更符合人类健康膳食标准,而胸斜方肌中不利于人体健康的肉豆蔻酸含量最高。

子午岭黑山羊与辽宁绒山羊产肉性能、肉品质、肌肉营养成分和脂肪酸含量比较

1990年,甘肃省庆阳市开始引入辽宁绒山羊对子午岭黑山羊进行杂交改良,但目前尚不清楚2个品种在脂肪酸含量、肌肉营养成分等方面的差异,影响了杂交改良效果。试验旨在分析两个绒山羊品种的产肉性能、肉品质、肌肉营养成分和脂肪酸含量差异,为绒山羊的杂交改良提供理论依据。本研究选取相同饲养管理条件下、9月龄的子午岭黑山羊和辽宁绒山羊公羊各5只,测定其屠宰性能以及背最长肌、前腿肌和后腿肌处的肉品质、脂肪酸含量和肌肉营养成分。结果表明:子午岭黑山羊的胴体重、屠宰率、净肉重、净肉率、眼肌面积、GR值、剪切力和滴水损失低于辽宁绒山羊(P<0.05),但其肌肉的平均亮度值、色度值、pH1和pH24高于辽宁绒山羊(P<0.01)。营养成分测定结果表明,子午岭黑山羊肌肉的水分和粗灰分含量高于辽宁绒山羊(P<0.05),但肌内脂肪和粗蛋白含量低于辽宁绒山羊。在2个山羊品种的肌肉中均检测到11种饱和脂肪酸(SFA,以棕榈酸和硬脂酸为主)、10种多不饱和脂肪酸(PUFA,以亚油酸和顺-11,14-二十碳二烯酸为主)和6种单不饱和脂肪酸(MUFA,以油酸为主),子午岭黑山羊肉中的SFA、PUFA、n-3 PUFA、n-6 PUFA含量和PUFA/SFA值均高于辽宁绒山羊(P<0.01),但MUFA含量低于辽宁绒山羊(P<0.01)。结果表明,辽宁绒山羊有更高的产肉力,但子午岭黑山羊肌肉品质和营养成分更佳,脂肪酸组成和含量更符合人类健康膳食标准。

小尾寒羊泌乳性状重要lncRNAs的筛选、鉴定及功能分析

【目的】长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一类长度大于200 nt的非编码RNA分子,它对奶牛和奶山羊的乳腺发育和泌乳过程发挥了重要调控作用,然而在绵羊上研究甚少。为此开展lncRNAs对绵羊泌乳性能的调控作用研究,为解析绵羊泌乳性能的分子机理提供理论基础。【方法】选取高泌乳性能(高泌乳量、高乳脂率)和低泌乳性能(低泌乳量、低乳脂率)小尾寒羊各3只,采集泌乳期乳腺组织,用RNA-Seq构建lncRNAs表达谱,研究差异表达lncRNAs靶基因的GO和KEGG富集通路,最后用实时荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative PCR, RT-qPCR)对16个差异表达lncRNAs进行验证。【结果】在小尾寒羊乳腺组织中共鉴定出7 239个表达的lncRNAs,包括2 262个已知lncRNAs和4977个新的lncRNAs,大部分lncRNAs呈低丰度表达。在两组小尾寒羊中发现120个差异表达lncRNAs,其中68个lncRNAs在高泌乳性能小尾寒羊中上调表达,52个lncRNAs下调表达。差异表达lncRNAs的靶基因显著富集在硫化物代谢过程、硫酯生物合成过程、酰基辅酶A生物合成过程、Rap1信号通路、粘附连接等通路上。LncRNA-miRNA网络分析发现,MSTRG.125242.6、MSTRG.59580.8等6个最显著差异表达lncRNAs的靶向miRNAs海绵体在家畜乳腺发育和泌乳过程中发挥了重要作用。RT-qPCR结果表明,16个lncRNAs的表达趋势与RNA-Seq结果完全吻合,证实了RNA-Seq测序结果的准确性和真实性。【结论】筛选的差异表达lncRNAs参与了绵羊乳腺发育及泌乳性能的调控,该结果将为解析绵羊泌乳性状的分子遗传机制提供理论参考。

性别、年龄和生长部位对辽宁绒山羊羊绒性状的影响

【目的】探讨非遗传因素对辽宁绒山羊羊绒性状的影响。【方法】以144只辽宁绒山羊为试验对象,现场测定了产绒量和抓绒后体质量,并采集羊绒样本,测定了羊绒的平均纤维曲率、平均纤维直径、纤维直径标准差、平均纤维长度、粗毛数和纤维直径变异系数。最后分析了性别、年龄及生长部位3个非遗传因素对这些性状的影响。【结果】辽宁绒山羊公羊的产绒量、抓绒后体质量、平均纤维直径、粗毛数、平均纤维长度和纤维直径标准差,分别比母羊高366.31 g、15.98 kg、1.59μm、0.83、5.16 mm和0.43μm;4周岁辽宁绒山羊的产绒量、抓绒后体质量、平均纤维直径、粗毛数、纤维直径标准差和纤维直径变异系数分别是810.65 g、51.45 kg、16.26μm、1.96、3.62μm和22.16%,这些性状均高于1~3周岁的辽宁绒山羊(P<0.01)。1周岁辽宁绒山羊的平均纤维曲率为84.52o/mm,极显著高于2~4周岁辽宁绒山羊的平均纤维曲率(P<0.01)。肩胛部羊绒的平均纤维直径(15.52μm)和平均纤维长度(51.58 mm)最大,它的平均纤维直径较股部和体侧部分别高0.04μm和0.12μm,平均纤维长度较股部和体侧部高1.68 mm和0.98 mm。体侧部的纤维直径标准差(3.13μm)和纤维直径变异系数最小(20.28%)。【结论】性别和年龄显著影响了辽宁绒山羊的部分羊绒性状,不同部位间的羊绒纤维品质也有一定的差异。

性成熟期辽宁绒山羊与子午岭黑山羊睾丸发育比较

本研究旨在探究性成熟期辽宁绒山羊与子午岭黑山羊睾丸发育是否存在差异,并对两品种繁殖性能进行比较。选取性成熟期健康的辽宁绒山羊和子午岭黑山羊各5只,采集睾丸组织,通过大体解剖和苏木精-伊红(HE)染色石蜡切片,比较两品种山羊睾丸组织发育及形态学差异;ELISA检测雄激素浓度;实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)检测两品种山羊睾丸组织中死盒多肽4(DEAD box polypeptide 4,DDX 4)和类无精症缺失基因(deleted in azoospermia-like gene,DAZL)的表达情况。结果显示,辽宁绒山羊睾丸总重和睾丸长周径极显著高于子午岭黑山羊(P<0.01),而睾丸短周径、睾丸脏体比和睾丸胴体比均差异不显著(P>0.05);辽宁绒山羊生精上皮厚度显著高于子午岭黑山羊(P<0.05),而两者精细管面积、直径和单位面积内精细管数量均无显著差异(P>0.05);两品种山羊睾丸中雄激素分泌无显著差异(P>0.05);辽宁绒山羊DDX4 mRNA及蛋白表达量均显著高于子午岭黑山羊(P<0.01或P<0.05),DAZL mRNA表达量极显著高于子午岭黑山羊(P<0.01),而蛋白表达量差异不显著(P>0.05)。以上结果表明,性成熟期辽宁绒山羊性腺发育程度与子午岭黑山羊一致,但生精上皮较子午岭黑山羊厚,生殖标记基因表达量存在差异,推测可能会影响两品种的生精能力。

陇东绒山羊KRTAP2-1基因鉴定及其对羊绒性状影响的研究

角蛋白关联蛋白(KAPs)是羊绒纤维的主要结构成分,但尚未在山羊基因组中鉴定出KRTAP2-1基因,本研究以人类KRTAP2-1基因为模板,在山羊基因组中进行同源性搜索,在19号染色体上发现了一个399 bp的开放阅读框。采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法,在249只陇东山羊上检测到7条不同的序列(A-G)。进化树结果表明,这7条序列与人类和绵羊的KAP2-1序列有较高的同源性,表明该序列是山羊KRTAP2-1的7个等位基因。测序结果表明,KRTAP2-1基因中存在12个单核苷酸多态性(SNPs)(5个SNPs位于编码区,7个SNPs位于非编码区),以及c.-61-63delCTC和c.9395delCCG两个碱基缺失,其中c.9395delCCG引起了第32位精氨酸的移码缺失。山羊KAP2-1蛋白含有丰富的半胱氨酸、脯氨酸、苏氨酸和丝氨酸。相关性分析表明,等位基因C的存在与较小的羊绒纤维直径相关(存在:13.4±0.05μm;缺失:13.6±0.03μm;P=0.010)。本研究表明,山羊KRTAP2-1基因有丰富的多态性,可作为陇东绒山羊羊绒纤维直径选育的分子标记用于生产实践。

藏绵羊不同部位骨骼肌营养成分、肌纤维特性及与相关基因表达的关联分析

旨在比较藏绵羊母羊7个部位肌肉(臂三头肌、冈上肌、股四头肌、背最长肌、腰大肌、胸斜方肌和小腿肌)的营养成分、肌纤维特性及其与产肉性能相关基因(AKT1、mTOR和FABP3)表达水平的相关性。结果表明,藏绵羊不同部位肌肉含水量均在75%左右;小腿肌的蛋白含量最高,其次是背最长肌(P>0.05),腰大肌的蛋白含量低于小腿肌(P<0.01);背最长肌肌内脂肪(IMF)含量高于除腰大肌外的其他部位(P<0.05),而小腿肌IMF含量最低(1.15%)。肌纤维横截面积大小为冈上肌>股四头肌>臂三头肌>小腿肌>胸斜方肌>腰大肌>背最长肌;肌纤维直径是股四头肌>冈上肌>小腿肌>臂三头肌>腰大肌>胸斜方肌>背最长肌;背最长肌密度最大,高于冈上肌(P<0.05);肌纤维面积、直径与肌内脂肪含量均呈负相关,而肌纤维密度与IMF含量呈正相关;肌纤维面积与肌纤维直径呈极显著正相关(r=0.842),而肌纤维面积和肌纤维直径与肌纤维密度呈极显著负相关(r=-0.906、-0.831)。AKT1基因在小腿肌中的相对表达量高于其他部位(P<0.05),而mTOR基因在股四头肌中的相对表达量高于小腿肌、背最长肌(P>0.05),显著高于臂三头肌、冈上肌及腰大肌(P<0.05),与胸斜方肌差异极显著(P<0.01);FABP3基因在小腿肌中的相对表达量低于除冈上肌外的其他部位(P<0.05)。AKT1和mTOR基因表达量与肌肉蛋白含量均呈正相关,其中AKT1基因与蛋白含量呈极显著正相关(r=0.601);FABP3基因表达量与IMF含量呈极显著正相关(r=0.728)。综合分析可知,藏绵羊小腿肌更符合人们对高蛋白、低脂肪羊肉特点的要求,而背最长肌相比于其他部位嫩度更好;AKT1和mTOR基因表达量与藏绵羊不同部位肌肉蛋白质合成呈正相关,FABP3基因表达量与藏绵羊不同部位肌肉IMF沉积呈正相关。

KRTAP1-4基因多态性对陇东绒山羊羊绒性状的影响

【目的】研究角蛋白关联蛋白1-4基因(KRTAP1-4)多态性对陇东绒山羊羊绒性状的影响。【方法】以382只1岁龄陇东绒山羊为研究对象,测定其产绒量、绒层高度和绒纤维的平均直径。采集试羊皮肤、肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏组织及血样,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测KRTAP1-4基因在6个组织中的表达谱;采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)检测KRTAP1-4基因的多态性,分析3个羊绒表型性状间的Pearson相关性及KRTAP1-4基因型与羊绒性状间的相关性。【结果】RT-PCR发现,KRTAP1-4基因只在陇东绒山羊的皮肤中表达。在陇东绒山羊KRTAP1-4基因上检测到A、B、C、D 4个等位基因和AA、AB、AC、AD、BB 5种基因型。测序结果表明,山羊KRTAP1-4基因上有1个插入/缺失位点(c.223_252insTGCCAACCGATCTCCATCCAGAC-CAGCTGC)、2个同义突变的单核苷酸多态性(c.333T>C和c.573C>T),以及1个Chi序列(c.14-c.21,5′-CCACCAGC-3′)和2个Chi-like序列(c.46-c.53,5′-ACTGGTGG-3′;c.392-c.399,5′-GCACCAGC-3′)。Pearson相关性系数显示,产绒量与平均纤维直径(r=0.324,P<0.001)及绒层高度(r=0.465,P<0.001)呈中等正相关,平均纤维直径与绒层高度呈弱的正相关(r=0.201,P<0.001)。相关性分析结果表明,AA、AB和AC型山羊个体的产绒量和绒层高度极显著低于BB型个体(P<0.01)。【结论】KRTAP1-4基因可以作为产绒量和绒层高度的分子标记用于陇东绒山羊的育种实践中。

小尾寒羊不同乳腺发育时期7种激素分泌规律

【目的】激素调控了奶牛和奶山羊的乳腺生长发育和泌乳,但目前在绵羊中的研究还不够全面和系统。【方法】以小尾寒羊为研究对象,在空怀期、妊娠早期、妊娠中期、妊娠末期、泌乳早期和泌乳中后期6个乳腺发育时期,采用酶联免疫吸附法测定血液中雌激素、孕酮、催乳素、生长激素、糖皮质激素,胰岛素和胰岛素样生长因子I的浓度,分析激素对绵羊乳腺发育的调控作用。【结果】雌激素和孕酮浓度呈先上升后下降的总体趋势,它们在妊娠末期的浓度最高(分别为73.01 pg/mL和530.48 pmol/L),在空怀期的浓度最低(分别为35.69 pg/mL和485.46 pmol/L);从空怀期开始,催乳素浓度持续升高,在泌乳早期达到最大值,其在泌乳早期的浓度分别比妊娠中期、泌乳中后期、妊娠早期和空怀期高12.47%、16.17%、46.15%和59.66%(P<0.05);妊娠末期的糖皮质激素浓度最大(495.28 pg/mL),较妊娠早期和空怀期分别高14.36%和12.42%(P<0.05);胰岛素含量由大到小依次为妊娠早期(36.22 mIU/L)>妊娠末期(36.10 mIU/L)>泌乳早期(35.98 mIU/L)>妊娠中期(35.49 mIU/L)>空怀期(33.78 mIU/L)>泌乳中后期(32.22 mIU/L),空怀期、泌乳中后期与其它时期的胰岛素含量差异显著(P<0.05)。然而,生长激素和胰岛素样生长因子I的浓度在6个时期之间无显著差异(P>0.05)。【结论】在绵羊6个乳腺发育时期,雌激素、孕酮、催乳素、糖皮质激素和胰岛素这5种激素的浓度有显著差异(P<0.05),说明它们可能影响了绵羊乳腺的生长发育和泌乳功能。

绵羊IRS1基因CDS区克隆、序列分析及其组织表达研究

【目的】克隆绵羊IRS1基因CDS区,并研究其序列特征和组织表达。【方法】选择健康、3岁、处于第4胎的泌乳高峰期(产后第3周)小尾寒羊和空怀期小尾寒羊母羊各3只作为研究对象,利用克隆测序技术获得绵羊IRS1基因的CDS序列,用生物信息学分析其编码的氨基酸序列特征,用RT-qPCR检测IRS1基因在肝脏、心脏、背最长肌、脾脏、肺脏、卵巢、肾脏和乳腺组织中的表达模式。【结果】绵羊IRS1基因的CDS全长为3708 bp,编码1235个氨基酸,蛋白分子量为130462.80,等电点为8.99,不稳定指数为73.55,预测该蛋白为不稳定、碱性亲水性蛋白。蛋白互作分析表明,绵羊IRS1可以与胰岛素样生长因子1受体(IGFR1)、磷酸肌醇-3-激酶调节亚基1(PIK3R1)、丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、丝裂原活化蛋白激酶10(MAPK10)和生长因子受体结合蛋白2(GRB2)相互作用,KEGG分析发现IRS1主要参与了PI3K/AKT和MAPK 2个信号通路。RT-qPCR分析表明,IRS1基因在小尾寒羊各组织中均表达,并且表现出明显的组织特异性,它在背最长肌中的表达量最高,其次是肝脏和心脏,在肺脏、肾脏、卵巢和乳腺组织中表达量较低,在脾脏中弱表达。同时,绵羊IRS1基因也表现出明显的时序表达性,在泌乳高峰期小尾寒羊中,IRS1基因在乳腺组织中的表达量是空怀期乳腺组织中表达量的2.77倍(P<0.05)。但在除乳腺和脾脏外的其他6个组织中,该基因在空怀期中的表达量均显著高于泌乳高峰期中的表达量(P<0.05)。【结论】克隆得到绵羊IRS1基因完整的CDS序列,它全长3708 bp,编码1235个氨基酸。IRS1在小尾寒羊各组织中广泛表达,并且表达出明显的组织特异性和时序特异性。

不同泌乳时期甘肃高山细毛羊与小尾寒羊的泌乳量、乳成分和脂肪酸含量比较

在相同饲养管理条件下,以小尾寒羊和甘肃高山细毛羊母羊作为研究对象,测定产后30d的泌乳量,分析常乳和初乳中6种乳成分的含量,以及饱和脂肪酸(Saturated fatty acid,SFA)、单不饱和脂肪酸(Monounsaturated fatty acid,MUFA)和多不饱和脂肪酸的含量(Polyunsaturated fatty acids,PUFA)。结果表明,小尾寒羊产后30d的泌乳量为40.7kg,极显著高于甘肃高山细毛羊的25.6kg(P<0.01)。在初乳和常乳中,小尾寒羊的乳蛋白质、酪蛋白和可溶固形物含量都高于甘肃高山细毛羊(P<0.05)。在2个品种中,初乳中的乳蛋白质、酪蛋白和可溶固形物含量也高于常乳(P<0.05)。在小尾寒羊初乳、小尾寒羊常乳、甘肃高山细毛羊初乳和甘肃高山细毛羊常乳中分别检测到16、17、13和14种SFA、6种MUFA,以及8、8、7和6种PUFA,棕榈酸、油酸、肉豆蔻酸、硬脂酸是其中的主要成分。上述4种乳样中的SFA/MUFA/PUFA值分别为13.66/6.89/1.00、16.08/9.16/1.00、10.16/7.89/1.00和22.28/8.61/1.00。在不同品种以及泌乳期之间,乳中部分脂肪酸的含量表现出明显差异。说明,小尾寒羊泌乳能力更强,乳中乳蛋白、酪蛋白、可溶固形物及部分有益脂肪酸的含量更高,更有利于羔羊的存活和生长发育。同时,在2个品种中,初乳中均有更高含量的乳蛋白质、酪蛋白质、可溶固形物以及部分有益的MUFA和PUFA。

东佛里生羊杂交改良湖羊生长性能分析

【目的】探讨东佛里生羊对湖羊生长性能的杂交改良效果。【方法】在相同饲养管理条件下,选择出生年龄相近的东佛里生羊、湖羊、东佛里生羊(♂)×湖羊(♀)杂交F1代羊(简称F1代)、东佛里生羊(♂)×湖羊(♀)级进杂交F2代羊(简称F2代)以及横交固定组5个试验组,观测其初生至6月龄阶段的体重和体尺,并分析性别、胎次、出生等级和母羊年龄对羔羊生长性能的影响以及各生长性状间的相关性。【结果】横交固定组和F2代的3月龄重、6月龄重、断奶-6月龄平均日增重和3月龄胸围大于湖羊(P<0.05)。横交固定组的出生-6月龄平均日增重最大(211.53g),其次为F2代(206.27g),湖羊的最小(165.70g)。湖羊的6月龄体高、胸围和管围均显著小于其他群体(P<0.05)。这表明东佛里生对湖羊生长性能有显著的杂交改良效果;公羔的3月龄体长、胸围和管围显著大于母羔(P<0.05),它的6月龄各项体尺性状均极显著大于母羔(P<0.01);第4胎羔羊的初生重和断奶重显著大于前3胎羔羊(P<0.05);单羔和双羔个体的初生重显著大于3羔和4羔个体;3岁和4岁母羊所产羔羊的6月龄重显著大于初产母羊所产羔羊(P<0.05)。胎次、出生等级和母羊年龄对羔羊体尺无显著影响(P>0.05)。相关性分析结果发现,羔羊在断奶、3月龄和6月龄时的体重与体尺指标间呈明显的正相关。【结论】东佛里生羊与湖羊杂交后,横交固定组与F2代羔羊的生长性能最优。

绵羊EGFR基因的克隆、表达及序列分析

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)是酪氨酸激酶受体家族成员之一,不仅参与细胞增殖、生长和凋亡等多种生命活动,也可调节哺乳动物的乳腺发育及泌乳维持,但对绵羊EGFR基因的序列特征及组织表达情况鲜有报道。本试验以高泌乳量的小尾寒羊(泌乳高峰期和空怀期)及低泌乳量的甘肃高山细毛羊(泌乳高峰期)母羊为研究对象,利用RT-PCR、克隆及测序技术获得绵羊EGFR基因完整的CDS区,分析了EGFR蛋白的结构特征及理化性质,利用RT-qPCR技术研究了基因的组织表达情况。结果表明,绵羊EGFR基因CDS区全长为3 627 bp,编码1 208个氨基酸。绵羊EGFR的氨基酸序列在各物种间较保守,与黄牛EGFR的氨基酸序列同源性最高。EGFR为跨膜蛋白,包含111个磷酸化位点,二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主。网络互作分析表明EGFR蛋白与肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)、表皮调节素(EREG)、双调蛋白(AREG)及生长因子受体结合蛋白2 (GRB2)结合发挥作用。EGFR主要参与MAPK,PI3K/AKT,JAK/STAT及Wnt信号通路,从而参与了动物的乳腺发育及泌乳功能的调节。RT-qPCR结果表明,绵羊EGFR基因的表达具有组织特异性、时空特异性和品种特异性。该基因在所研究的8个组织中均表达,但在肾脏、卵巢、肝脏、乳腺和肺脏组织中的表达量较高;在小尾寒羊的乳腺组织中,该基因在空怀期的表达量显著高于泌乳高峰期的(P<0.05);在泌乳高峰期的乳腺组织中,该基因在小尾寒羊中的表达量高于甘肃高山细毛羊的。本试验为深入研究绵羊EGFR基因的泌乳生物学功能提供了基础数据。

KRTAP36-1基因在子午岭黑山羊中的鉴定及其与羊绒性状的关联分析

为鉴定子午岭黑山羊KRTAP36-1基因,并分析其与羊绒性状的相关性,以绵羊KRTAP36-1基因编码区序列为模板,利用GenBank的BLAST功能,在山羊染色体上进行同源性搜索,用聚合酶链反应-单链构象多态性(Polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)和测序方法,检测342只子午岭黑山羊上的核苷酸序列变异,最后用一般线性混合效应模型分析序列变异与羊绒性状的相关性。结果表明,在342只子午岭黑山羊上检测到3条不同的核苷酸序列(命名为A、B和C),进化树发现这3条序列与绵羊KRTAP36-1序列有最高的同源性,表明这些序列来自于山羊KRTAP36-1基因。测定结果表明,山羊KRTAP36-1基因有2个SNPs,其中一个(c.119A/G)为错义突变,导致p.Tyr40Cys的氨基酸改变。相关性分析表明,KRTAP36-1核苷酸序列A的存在与子午岭黑山羊较小的产绒量相关(P<0.001),B的存在与较大的产绒量相关(P=0.004),BB型个体的产绒量高于AB型和AA型个体(P<0.001)。KRTAP36-1的核苷酸序列变异对子午岭黑山羊的羊绒平均纤维直径和绒层高度无影响(P>0.05)。综上,KRTAP36-1基因可以作为子午岭黑山羊羊绒性状的分子标记,用于提高该群体的产绒量。