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重组人附睾特异表达蛋白ESC42及其生物学鉴定 被引量:4
1
作者 沈肖方 李建远 +5 位作者 王海燕 薛江南 曹奇志 连培文 陈辉 解美娜 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期106-111,共6页
 目的:利用基因工程技术合成出人附睾特异表达基因ESC42重组蛋白,为其功能研究提供材料。 方法: 从人附睾cDNA文库扩增出ESC42基因片段,构建原核表达载体,进行克隆、表达、蛋白质纯化及单克隆抗体制备; Western印迹鉴定纯化产物...  目的:利用基因工程技术合成出人附睾特异表达基因ESC42重组蛋白,为其功能研究提供材料。 方法: 从人附睾cDNA文库扩增出ESC42基因片段,构建原核表达载体,进行克隆、表达、蛋白质纯化及单克隆抗体制备; Western印迹鉴定纯化产物及其单克隆抗体的特异性;基质辅助激光解吸电离 飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴 定ESC42蛋白相对分子质量(Mr)和肽质量指纹,用MS Fit软件查询NCBI数据库。 结果:获得rhESC42融合蛋 白纯度为99%;Mr为11978.12,制备出抗rhESC42单克隆抗体;质谱分析的数据覆盖了所预测氨基酸序列的48%, 且符合率为100%。在Expasy数据库中进行结构域扫描,发现ESC42属于β defensin家族,具有抗菌活性。 结 论:获得了高纯度且具有生物效应的rhESC42重组蛋白质,并从蛋白质水平对预测氨基酸序列进行了证实,为以后 的功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 附睾 ESC42 重组 大肠埃希菌 生物学鉴定 人类
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利用废弃胚胎进行体外受精实验室质控的可行性探讨 被引量:3
2
作者 沈肖方 张玉花 +1 位作者 陈丽丽 郝翠芳 《生殖医学杂志》 CAS 2013年第2期97-100,共4页
目的探讨废弃胚胎作为体外受精(IVF)实验室质控的可行性。方法通过囊胚序贯培养将无原核(0PN)、单原核(1PN)、3原核(3PN)和发育迟缓或停滞的2原核(2PN)的废弃胚胎进行囊胚培养,比较不同来源胚胎的囊胚形成情况。结果共收集396个废弃胚胎... 目的探讨废弃胚胎作为体外受精(IVF)实验室质控的可行性。方法通过囊胚序贯培养将无原核(0PN)、单原核(1PN)、3原核(3PN)和发育迟缓或停滞的2原核(2PN)的废弃胚胎进行囊胚培养,比较不同来源胚胎的囊胚形成情况。结果共收集396个废弃胚胎,经序贯培养形成98个囊胚(24.75%),0PN、2PN、1PN、3PN的囊胚形成率分别为50.50%(51/101)、24.59%(30/122)、1 7.07%(7/41)、7.58%(10/132),其中0PN、停滞的2PN的胚胎有孵出,孵出率分别为47.06%(24/51)和33.33%(10/30);有囊胚形成与无囊胚形成患者的临床妊娠率分别为30.28%(43/142)、1 9.72%(28/142),两者相比有统计学差异(P<0.05);特别是0PN+2PN患者的临床妊娠率为23.24%(33/142),显著高于无囊胚形成者的9.15%(13/142)(P<0.01)。结论废弃胚胎有不同程度的发育潜能,可部分发育成囊胚,特别是0PN+2PN囊胚形成率超过35%,可以作为IVF实验室质控的一种辅助方法,并可作为临床妊娠结局预测的参考指标。 展开更多
关键词 废弃胚胎 囊胚 异常受精 质量控制
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体外受精失败后不同时间行补救性卵细胞浆单精子显微注射的对比分析 被引量:1
3
作者 沈肖方 周朋珍 +4 位作者 黄鑫 刘晓妍 单英华 张玉花 郝翠芳 《中国生育健康杂志》 2010年第6期332-334,共4页
目的 通过对常规体外授精(IVF)失败(未观察到第二极体)后不同时间行补救性卵细胞浆单精子显微注射(ICSI)的临床资料比较,探讨补救性ICSI的最佳时间. 方法 回顾性分析常规体外授精(IVF)失败后6 h(早期组)与22 h(传统组)行补救性ICSI的临... 目的 通过对常规体外授精(IVF)失败(未观察到第二极体)后不同时间行补救性卵细胞浆单精子显微注射(ICSI)的临床资料比较,探讨补救性ICSI的最佳时间. 方法 回顾性分析常规体外授精(IVF)失败后6 h(早期组)与22 h(传统组)行补救性ICSI的临床资料,比较两组的受精率、卵裂率、优胚率、种植率和妊娠率. 结果 早期组受精率、种植率、临床妊娠率分别为74.6%(56/75)、37.5%(9/24)、53.8%(7/13);传统组受精率为63.0%(29/46)、种植率和临床妊娠率均为0.早期组7例妊娠中4例单胎,3例流产;早期组和传统组受精率比较,差异无统计学意义,妊娠率和种植率比较,差异有统计学意义(P【0.05); 结论 早期补救性ICSI在受精率、种植率和临床妊娠率上可能优于传统补救性ICSI. 展开更多
关键词 受精 第二极体 补救性卵细胞浆单精子显微注射
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IL-2-preS融合蛋白表达质粒的基因枪DNA免疫研究
4
作者 沈肖方 马大龙 +2 位作者 白惠卿 李建远 陈章国 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期241-243,共3页
观察基因枪肌肉注射IL 2 preS融合蛋白表达质粒 (pCWIIP)的基因免疫效率 ,为乙型肝炎基因免疫研究提供基础。方法 :设基因枪肌肉注射组和正常肌肉注射组 ,分别用pCWIIP质粒及对照质粒pCIIP 2和pCI免疫Balb c小鼠 ,免疫后第 4天 ,取肌... 观察基因枪肌肉注射IL 2 preS融合蛋白表达质粒 (pCWIIP)的基因免疫效率 ,为乙型肝炎基因免疫研究提供基础。方法 :设基因枪肌肉注射组和正常肌肉注射组 ,分别用pCWIIP质粒及对照质粒pCIIP 2和pCI免疫Balb c小鼠 ,免疫后第 4天 ,取肌肉组织通过免疫组化观察IL 2 preS在肌肉中的表达 ;另设基因枪、正常肌肉、皮下注射组分别免疫pCWIIP及对照质粒 ,在 2、4、6、8w眼后腔取血 ,通过间接ELISA方法检测血清中抗preS的IgG抗体水平。结果 :免疫组化结果显示 :基因枪肌肉注射组其IL 2 preS在肌肉中的表达明显高于正常肌肉组。间接ELISA检测结果表明 :抗preS的IgG抗体水平为基因枪 >正常肌肉组 >皮下注射组。结论 :在IL 2 preS融合蛋白表达质粒的基因免疫中 ,基因枪肌肉注射的方式优于肌肉和皮下注射的方式 ,具有快速、经济和安全的特性 ,将为今后的临床广泛应用提供依据。 展开更多
关键词 IL-2-perS 基因枪 DNA免疫 抗体 基因治疗
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基因重组人附睾特异蛋白ESC42的抗菌谱研究
5
作者 沈肖方 王海燕 李建远 《中国生育健康杂志》 2010年第5期280-284,共5页
目的 利用基因工程技术合成人附睾特异蛋白ESC42进行抗菌谱的筛选,并探讨其作用机制.方法 用微量稀释法细菌敏感试验,观察该蛋白对大肠埃希氏菌ATCC25922,金黄色葡萄球菌ATCC29213,铜绿假单胞菌ATCC17853以及临床分离耐药菌株大肠埃希... 目的 利用基因工程技术合成人附睾特异蛋白ESC42进行抗菌谱的筛选,并探讨其作用机制.方法 用微量稀释法细菌敏感试验,观察该蛋白对大肠埃希氏菌ATCC25922,金黄色葡萄球菌ATCC29213,铜绿假单胞菌ATCC17853以及临床分离耐药菌株大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果;应用溶血实验检测ESC42蛋白对兔红细胞的毒性作用.结果 应用不同的蛋白浓度作用细菌,随着时间延长和蛋白浓度的增加其抑制率逐渐增加.对兔红细胞没有毒性作用.结论 rhESC42蛋白对细菌有一定的抑制作用,对真核细胞无害. 展开更多
关键词 附睾 ESC42 抗菌 真核细胞
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附睾功能基因的研究方法及进展 被引量:1
6
作者 沈肖方 李建远 《国外医学(泌尿系统分册)》 2005年第4期490-492,共3页
精子的成熟不是靠自身来完成,而是通过与附睾管腔中的微环境相互作用而取得。搞清精子成熟的机制和调控,将为新的男性避孕药、诊断和治疗男性不育症、性传播疾病的防治等方面提供一系列新的靶位点。本文分别从基因、蛋白、基因组与蛋白... 精子的成熟不是靠自身来完成,而是通过与附睾管腔中的微环境相互作用而取得。搞清精子成熟的机制和调控,将为新的男性避孕药、诊断和治疗男性不育症、性传播疾病的防治等方面提供一系列新的靶位点。本文分别从基因、蛋白、基因组与蛋白质组三个方面综述了附睾功能基因的研究方法及进展。 展开更多
关键词 附睾 基因
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MTT比色法在晚期恶性肿瘤化疗药物敏感试验中的应用
7
作者 沈肖方 靳韶华 沈肖俐 《菏泽医学专科学校学报》 2001年第2期5-7,共3页
目的 研究晚期恶性肿瘤体外药敏测定的临床意义。方法 用MTT法检测了 38例胸腹水标本对几种常用化疗药物的敏感性。结果 不同个体之间对药物的敏感率有显著性差异 (P <0 .0 1) ;单一药物的抑制率以DDP、ADM、EDR、CP、VP - 16较... 目的 研究晚期恶性肿瘤体外药敏测定的临床意义。方法 用MTT法检测了 38例胸腹水标本对几种常用化疗药物的敏感性。结果 不同个体之间对药物的敏感率有显著性差异 (P <0 .0 1) ;单一药物的抑制率以DDP、ADM、EDR、CP、VP - 16较高。结论 用MTT法快速药敏选药可使化疗个体化 ,提高恶性肿瘤的治疗效果 ,延长患者生存期。 展开更多
关键词 MTT比色法/诊断应用 恶性肿瘤/诊断 化疗药敏试验
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卵母细胞授精前剥除部分卵丘细胞对体外受精-胚胎移植结局的影响 被引量:3
8
作者 刘晓妍 张守信 +5 位作者 郝翠芳 沈肖方 黄鑫 单英华 陈丽丽 张玉花 《生殖医学杂志》 CAS 2013年第3期167-170,共4页
目的研究授精前剥除部分卵丘细胞的卵母细胞的受精、胚胎发育和临床结局。方法授精前用机械法剥除卵母细胞外包裹的部分卵丘细胞,每个卵母细胞采用微滴法单独受精(A组)。对照组(B组)采用常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)受精方式进行。比... 目的研究授精前剥除部分卵丘细胞的卵母细胞的受精、胚胎发育和临床结局。方法授精前用机械法剥除卵母细胞外包裹的部分卵丘细胞,每个卵母细胞采用微滴法单独受精(A组)。对照组(B组)采用常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)受精方式进行。比较两组受精率(2PN、1PN和3PN)、卵裂率(2PN、1PN和3PN)、优胚率、临床妊娠率、种植率和流产率。结果 A组和B组的受精率分别是76.51%和73.74%(2PN受精率分别是60.64%,61.62%;1PN受精率分别是1.61%,0.86%;3PN受精率分别是10.44%,9.69%)、卵裂率分别是98.95%和99.17%(2PN卵裂率分别是97.02,98.01%;1PN卵裂率分别是100%,85.71%;3PN卵裂率分别是100%,100%)、优质胚胎率分别是60.75%,62.68%、临床妊娠率分别是63.89%,61.76%、种植率分别是48.00%,38.78%、流产率分别是9.09%,11.90%。所有指标均无统计学意义。结论卵母细胞授精前剥除部分卵丘细胞不会影响IVF-ET的临床结局,为利用卵丘细胞进行非侵入性种植前遗传学诊断提供临床依据。 展开更多
关键词 卵丘细胞 体外授精-胚胎移植 受精率 优质胚胎率
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白介素-1β对小鼠着床窗口期子宫内膜上皮细胞分泌基质金属蛋白酶-9及细胞黏附分子-1的影响 被引量:2
9
作者 刘萍 郝翠芳 +2 位作者 沈肖方 王昕荣 王雄 《生殖医学杂志》 CAS 2010年第6期511-514,共4页
目的研究白介素-1β(IL-1β)对小鼠着床窗口期子宫内膜上皮细胞分泌金属蛋白酶-9(MMP-9)及细胞黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法离体培养着床窗口期小鼠子宫内膜上皮细胞,用IL-1β作为处理因素,通过免疫组织化学SP法对子宫内膜上皮细胞MM... 目的研究白介素-1β(IL-1β)对小鼠着床窗口期子宫内膜上皮细胞分泌金属蛋白酶-9(MMP-9)及细胞黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法离体培养着床窗口期小鼠子宫内膜上皮细胞,用IL-1β作为处理因素,通过免疫组织化学SP法对子宫内膜上皮细胞MMP-9、ICAM-1蛋白的表达进行检测。结果随着IL-1β浓度的增加,原代培养的子宫内膜上皮细胞分泌MMP-9及ICAM-1表达量均呈浓度依赖性升高(P<0.05)。结论一定水平的IL-1β可以促进子宫内膜上皮细胞MMP-9及ICAM-1的分泌,有利于胚胎着床。 展开更多
关键词 白介素-1Β 子宫内膜上皮细胞 免疫组化 金属蛋白酶-9 细胞黏附分子-1 小鼠
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白细胞介素-1β对人子宫内膜细胞间粘附分子-1和金属蛋白酶9的影响
10
作者 郎翠红 郝翠芳 +1 位作者 沈肖方 王昕荣 《中国生育健康杂志》 2011年第1期-,共4页
目的 探讨白介素-1β(il-1β)对分泌中期体外培养的子宫内膜细胞间粘附分子-1(icam-1)和金属蛋白酶9(mmp9)的影响.方法 建立子宫内膜体外培养模型,采用酶联免疫吸附检测(elisa)方法分别检测经不同浓度il-1β处理共培养模型后培养液中ica... 目的 探讨白介素-1β(il-1β)对分泌中期体外培养的子宫内膜细胞间粘附分子-1(icam-1)和金属蛋白酶9(mmp9)的影响.方法 建立子宫内膜体外培养模型,采用酶联免疫吸附检测(elisa)方法分别检测经不同浓度il-1β处理共培养模型后培养液中icam-1、mmp9的表达水平;采用免疫细胞化学方法检测子宫内膜中icam-1和mmp9的表达.结果 与对照组相比,经10.0μg/l il-1β干预后培养液中icam-1表达水平增加,经0.1、1.0μg/l il-1β干预后培养液中icam-1表达,差异无统计学意义;经1.0、10.0μg/l的il-1β干预后培养液中mmp9表达水平增加.经免疫细胞化学证实,icam-1主要在腺体细胞中表达,基质细胞仅有少量的表达,而mmp9在子宫内膜基质细胞和腺体细胞中均有表达.结论 在体外一定量的il-1β可以诱导子宫内膜细胞icam-1和mmp9表达增加. 展开更多
关键词 白细胞介素-1 细胞间粘附分子-1 金属蛋白酶9
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精子浓度在精子凋亡率及生精细胞脱落状态中的作用分析
11
作者 袁长巍 沈肖方 +2 位作者 袁晓立 谭双 曹兴午 《生殖医学杂志》 CAS 2023年第8期1244-1247,共4页
目的探讨不同精子浓度精液的精子凋亡率及各级生精细胞的脱落状态。方法收集2022年8~12月来北京美中宜和北三环妇儿医院生殖男科就诊的861例不育症患者为研究对象。根据不同精子浓度分为两组:精子浓度≥15×10^(6)个/ml的为正常精... 目的探讨不同精子浓度精液的精子凋亡率及各级生精细胞的脱落状态。方法收集2022年8~12月来北京美中宜和北三环妇儿医院生殖男科就诊的861例不育症患者为研究对象。根据不同精子浓度分为两组:精子浓度≥15×10^(6)个/ml的为正常精子浓度组(n=775),精子浓度<15×10^(6)个/ml的为低精子浓度组(n=86)。采用计算机辅助精子分析(CASA)系统,比较两组精液的精子活动率;采用Diff-Quik染色法,比较两组患者正常形态精子百分率、精子凋亡率及各级生精细胞的脱落数量。结果与正常精子浓度组比较,低精子浓度组的精子活动率、正常形态精子率均显著降低,而精子凋亡率显著升高(P均<0.05);正常精子浓度组精液中生精细胞检出率显著低于低精子浓度组(52.90%vs.88.37%)(P<0.05),在计数200个精子范围内,正常精子浓度组共检出995个生精细胞,平均每例精液标本检出1.28个生精细胞;低精子浓度组共检出440个生精细胞,平均每例精液标本检出5.12个生精细胞,其检出数量为正常精子浓度组的4倍;两组间各级生精细胞的占比情况无显著性差异(P>0.05)。结论Diff-Quik染色可作为精子凋亡率和生精细胞分析的有效方法;低精子浓度患者行精液生精细胞和精子凋亡率检查,对进一步了解睾丸生精障碍程度及精子异常染色质状态有着重要价值,临床应给予重视,并积极开展。 展开更多
关键词 精子浓度 精子形态 精子凋亡 生精细胞
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人骨髓间充质干细胞玻璃化冷冻复苏后的生物学活性 被引量:2
12
作者 王延伟 沈肖方 +1 位作者 王跃嗣 张玉花 《青岛大学医学院学报》 CAS 2013年第1期33-34,37,共3页
目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMSCs)玻璃化冷冻复苏后细胞的存活率和诱导分化能力。方法体外分离纯化人BMSCs,流式细胞仪检测其纯度。应用玻璃化冷冻方法进行冷冻保存,复苏后台盼蓝染色鉴定存活率。在DMEM/F12培养的BMSCs中加体积分数0... 目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMSCs)玻璃化冷冻复苏后细胞的存活率和诱导分化能力。方法体外分离纯化人BMSCs,流式细胞仪检测其纯度。应用玻璃化冷冻方法进行冷冻保存,复苏后台盼蓝染色鉴定存活率。在DMEM/F12培养的BMSCs中加体积分数0.10的胎牛血清和10μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子预诱导2d,再加0.1μmol/L全反式维甲酸和10μg/L胶质细胞系源性神经营养因子进行正式诱导3d,免疫荧光染色检测Nestin、微管相关蛋白(MAP2)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、胶质纤维蛋白(GFAP)的表达。结果 BMSCs强表达CD44和CD90,不表达CD34和CD45。玻璃化冷冻解冻后细胞存活率>95%。经诱导后,BMSCs强阳性表达MBP和GFAP,弱阳性表达Nestin和MAP2。结论玻璃化冷冻复苏后的人BMSCs存活率高并能成功诱导为神经胶质细胞。 展开更多
关键词 间质干细胞 骨髓 玻璃化冷冻 细胞分化 神经胶质
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hrIL-2治疗单疱病毒性角膜炎临床研究 被引量:6
13
作者 肖爱云 李建远 +2 位作者 李俊英 张秀华 沈肖方 《眼科研究》 CSCD 1998年第1期46-47,共2页
目的研究人重组白细胞介素Ⅱ(hrIL-2)与无环鸟苷联合治疗单纯疱疹病毒性角膜炎(herpessimplexker-atitis,HSK)疗效与预防复发。方法应用hrIL-2与0.1%无环鸟苷联合治疗HSK50例,对... 目的研究人重组白细胞介素Ⅱ(hrIL-2)与无环鸟苷联合治疗单纯疱疹病毒性角膜炎(herpessimplexker-atitis,HSK)疗效与预防复发。方法应用hrIL-2与0.1%无环鸟苷联合治疗HSK50例,对照组30例单用0.1%无环鸟苷治疗。结果联合用药治疗组疗效明显高于对照组。随访1a观察复发率明显低于对照组。结论应用hrIL-2与0.1%无环鸟苷联合治疗HSK疗效明显,复发率低,临床观察眼部无不良反应。 展开更多
关键词 单疱病毒性角膜炎 人重组白细胞介素2 治疗 HSK
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The Experimental Study on Treating Transgenic HBV Mice with Recombined IL-2-PreS DNA Vaccine
14
作者 李建远 王海燕 +4 位作者 沈肖方 王学波 靳绍华 刘芙君 刘运祥 《Journal of Microbiology and Immunology》 2004年第2期120-125,共6页
The aim of this study is to investigate the feasibility and mechanism of hIL-2-preS DNA vaccine as prevention and therapeutic approach against Hepatitis B. Eukaryon expression vector involving hIL-2 and preS gene was ... The aim of this study is to investigate the feasibility and mechanism of hIL-2-preS DNA vaccine as prevention and therapeutic approach against Hepatitis B. Eukaryon expression vector involving hIL-2 and preS gene was constructed with recombinant technique and transferred into normal BALB/c mice and HBV transgenic mice (Tg-Mice) respectively. Then a series of detection were performed: detection of anti-preS2, HBs antibody and HBsAg in BALB/c mice and Tg-mice with ELISA, quantification of HBV DNA copies in HBV Tg-mice serum with real-time PCR, determination of hepatitis degree with immunopathological HE staining and detection of liver function. Anti-preS1 can be detected at 4 th , 6 th and 10 th week in inoculated BALB/c mice. Injection with gene gun gained an advantage over muscular and subcutaneous injection since it acquired just 1/10 inoculation quantity (10 μg/mouse). Highest expression of IgG2a at 4 th week suggested Th1-mediated immune response, which facilitated HBV cleaning. Of all inoculated HBV Tg-mice, 80% of them showed anti-preS2, HBs antibody positive and HBV DNA decreased, and 20% showed negative for HBsAg. HE staining to hepatic tissue showed obvious infiltration of inflammatory cells, swelling and granular degeneration of hepatocytes. In our study, IL-2-preS DNA vaccine which can provoke the humoral and cellular immune response and break the immune tolerance supports the designation and construction of new vaccine against HBV and specific immune remedy for HBV continuous infection. 展开更多
关键词 疫苗接种 乙型肝炎病毒 病毒感染 hIL-2-preS DNA 小鼠 动物实验
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IL-2 preS DNA疫苗免疫正常小鼠和HBV转基因鼠的免疫应答研究 被引量:3
15
作者 沈肖方 李建远 +4 位作者 王海燕 王学波 靳绍华 刘芙君 刘运祥 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期914-918,共5页
目的 探讨IL 2preSDNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法应用基因重组技术 ,构建人白细胞介素 2 (hIL 2 )和前表面抗原 (preS)的真核表达载体 ,将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB c小鼠和HBV转基因小鼠 ,通过EL... 目的 探讨IL 2preSDNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法应用基因重组技术 ,构建人白细胞介素 2 (hIL 2 )和前表面抗原 (preS)的真核表达载体 ,将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB c小鼠和HBV转基因小鼠 ,通过ELISA方法检测BALB c小鼠和HBV转基因鼠的抗 preS2、HBsAg及抗 HBs抗体水平 ;荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBVDNA拷贝数 ,并用免疫病理HE染色观察小鼠肝组织炎症活动度 ,同时检测肝功能指标。结果 ①基因枪注射真核表达质粒免疫正常小鼠后 ,10 0 %小鼠能在第 4、6周检测到抗preS1抗体 ,持续时间长达10周。②用IL 2preS真核表达质粒基因枪肌肉注射方式优于正常肌肉注射和皮下注射的方式 ,且所需质粒量 (10 μg 只 )仅为后者 (10 0 μg 只 )的 1 10。③在第 4周高峰期检测IgG亚类 ,是诱导以TH1(IgG2a)细胞免疫为主的反应。④基因枪注射真核表达质粒 (1μg 只 )免疫转基因小鼠后 ,80 %的小鼠产生了抗体 ,HBVDNA量下降 ,其中 2 0 %的小鼠HBsAg转阴。⑤HE肝组织染色显示 :肝组织有明显的炎细胞浸润、肝细胞肿大、颗粒样变性、转氨酶升高。结论 IL 2preSDNA疫苗能刺激小鼠机体产生体液和细胞免疫 ,可部分打破小鼠机体的免疫耐受 。 展开更多
关键词 正常小鼠 HBV IL-2 DNA疫苗 注射 转基因鼠 正常 基因枪 真核表达质粒 BALB/c小鼠
原文传递
人附睾ESC42基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达
16
作者 沈肖方 连培文 +3 位作者 李芹 赵欣 王海燕 李建远 《国际泌尿系统杂志》 2008年第2期145-148,共4页
目的构建人附睾ESCA2(hESCA2)的真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达。方法从人附睾cDNA文库中PCR扩增hESCA2片段,通过DNA重组构建真核表达载体pEGFP—N1-hESCA2,瞬时转染COS-7细胞,应用RT—PCR、激光扫描共聚焦技术和Western... 目的构建人附睾ESCA2(hESCA2)的真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达。方法从人附睾cDNA文库中PCR扩增hESCA2片段,通过DNA重组构建真核表达载体pEGFP—N1-hESCA2,瞬时转染COS-7细胞,应用RT—PCR、激光扫描共聚焦技术和Western blot检测融合蛋白的表达。结果成功地构建了真核表达载体pEGFP-N1-hESCA2;以重组载体转染COS-7细胞后,RT—PCR结果显示hESCA2与EGFP在mRNA水平正确拼接;共聚焦证实有hESCA2融合蛋白的表达;转染细胞的培养上清浓缩后,进行SDS~PAGE及Western blot分析,可检出hESCA2融合蛋白的表达。结论成功地构建了hESCA2基因,并可在COS-7细胞中分泌表达,为其功能研究提供线索。 展开更多
关键词 附睾 遗传载体
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透明带形态异常卵母细胞在IVF完全受精失败后行补救ICSI的临床结局 被引量:7
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作者 刘晓妍 张守信 +5 位作者 郝翠芳 单英华 沈肖方 黄鑫 陈丽丽 张玉花 《生殖与避孕》 CAS CSCD 2012年第11期754-759,共6页
目的:研究透明带形态异常卵母细胞的受精、胚胎发育和临床结局。方法:以在IVF完全受精失败(TFF)周期中透明带形态异常的15名患者为研究组(A组),非透明带形态异常的完全受精失败周期的63例患者为对照组(B组),回顾性分析比较患者的一般临... 目的:研究透明带形态异常卵母细胞的受精、胚胎发育和临床结局。方法:以在IVF完全受精失败(TFF)周期中透明带形态异常的15名患者为研究组(A组),非透明带形态异常的完全受精失败周期的63例患者为对照组(B组),回顾性分析比较患者的一般临床情况、IVF结局及行补救ICSI(R-ICSI)的临床结局。结果:除受精率组间有显著性差异(65.52%vs 78.86%,P<0.01)外,其余各指标(年龄、不孕年限、不孕类型、不孕原因、基础内分泌水平、基础卵泡数、降调节天数、Gn使用天数、Gn使用总量、hCG注射日直径≥16 mm卵泡数、hCG注射日E2、P和LH水平、获卵数、MII卵数、行R-ICSI的受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率和流产率)组间均无统计学差异。结论:IVF完全受精失败周期透明带形态异常卵母细胞行R-ICSI虽受精率较低,但及早发现受精失败并行R-ICSI,可使65.52%的卵子受精,从而改善临床结局。 展开更多
关键词 透明带(ZP) 完全受精失败(TFF) 体外授精-胚胎移植(IVF-ET) 补救性ICSI(R-ICSI)
原文传递
移植未受精晚期卵裂胚胎妊娠2例 被引量:3
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作者 刘晓妍 郝翠芳 +3 位作者 张守信 沈肖方 单英华 黄鑫 《中华妇幼临床医学杂志(电子版)》 CAS 2012年第1期84-84,共1页
患者1 女性,28岁。因“结婚5年未采取避孕措施而未孕”,于2006-01—15在本中心就诊。病史采集:婚后第2年,孕龄2个月时自然流产1次(原因不详);婚后第3年宫外孕1次(保守治疗)。子宫输卵管X射线造影提示,双侧输卵管弥散局限。男... 患者1 女性,28岁。因“结婚5年未采取避孕措施而未孕”,于2006-01—15在本中心就诊。病史采集:婚后第2年,孕龄2个月时自然流产1次(原因不详);婚后第3年宫外孕1次(保守治疗)。子宫输卵管X射线造影提示,双侧输卵管弥散局限。男方精液检查提示,少弱畸形精子症。 展开更多
关键词 卵裂胚胎 少弱畸形精子症 妊娠 晚期 受精 移植 子宫输卵管 双侧输卵管
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常规体外受精失败后不同时间进行挽救性卵细胞质内单精子注射的结局比较 被引量:4
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作者 刘晓妍 郝翠芳 +3 位作者 沈肖方 张守信 单英华 黄鑫 《中华妇幼临床医学杂志(电子版)》 CAS 2012年第4期395-397,共3页
目的探讨常规体外受精(IVF)失败后6h和22h进行挽救性卵胞质内单精子显微注射(ICSI)的效果。方法选取2004年6月至2008年11月在本院进行的共31个完全受精失败的IVF周期为研究对象。其中2004年6月至2007年8月共计15个完全受精失败的IVF周期... 目的探讨常规体外受精(IVF)失败后6h和22h进行挽救性卵胞质内单精子显微注射(ICSI)的效果。方法选取2004年6月至2008年11月在本院进行的共31个完全受精失败的IVF周期为研究对象。其中2004年6月至2007年8月共计15个完全受精失败的IVF周期,对所有成熟二级卵母细胞(MⅡ卵子)在受精22h后进行挽救性ICSI(纳入22h组);2007年8月至2008年11月共计16个完全受精失败的IVF周期,对所有MⅡ卵子在受精6h后进行挽救性ICSI(纳入6h组)。对两组受精率、卵裂率、胚胎移植(ET)数和临床妊娠率进行比较(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会制定的伦理学标准,征得该委员会批准)。两组患者的年龄、不孕年限等比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结果 6h组的受精率(77.8%,70/90)显著高于22h组(47.5%,58/122),两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);6h组的卵裂率(98.6%,69/70)显著高于22h组(79.3%,46/58),两组比较,差异亦有统计学意义(P<0.01);6h组的临床妊娠率(43.8%,7/16)显著高于22h组(0,0/15),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论常规IVF失败6h后进行挽救性ICSI可获得更好的受精率、卵裂率和临床妊娠率。 展开更多
关键词 体外受精 受精失败 挽救性卵胞浆内单精子显微注射 第二极体
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对体外授精8 h后未受精卵母细胞行挽救性卵细胞质内单精子注射并妊娠1例 被引量:1
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作者 刘晓妍 郝翠芳 +2 位作者 张守信 沈肖方 单英华 《中华妇幼临床医学杂志(电子版)》 CAS 2008年第4期18-18,共1页
患者女性,37岁,未孕10年,于2007年8月在本中心要求行体外授精-胚胎移植(IVF—ET)治疗。病史采集:外院输卵管造影提示为慢性输卵管炎,曾行常规IVF—ET 1个周期(具体方案不详),获卵约10枚,自述有授精,但数目不详,因胚胎质量... 患者女性,37岁,未孕10年,于2007年8月在本中心要求行体外授精-胚胎移植(IVF—ET)治疗。病史采集:外院输卵管造影提示为慢性输卵管炎,曾行常规IVF—ET 1个周期(具体方案不详),获卵约10枚,自述有授精,但数目不详,因胚胎质量差放弃移植。常规检查示:基础促卵泡生成激素(FSH)为9.41mIU/mL, 展开更多
关键词 体外授精-胚胎移植 单精子注射 卵细胞质内 卵母细胞 促卵泡生成激素 妊娠 受精 慢性输卵管炎
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