内源性大麻素对缺氧缺糖视网膜神经节细胞损伤的保护作用

背景急性视网膜缺血缺氧性损伤在眼科较为常见,如青光眼急性发作、视网膜中央动脉阻塞、缺血性视神经病变等,可引起视网膜的缺血缺氧损伤,并可致视网膜神经节细胞（RGCs）的死亡。内源性大麻素（CB）及其受体（CBR）参与中枢神经系统外伤、缺血、炎症及中毒等多种生理病理过程。目的探讨视网膜神经节细胞（RGCs）在缺氧缺糖损伤中内源性CB的作用及意义。方法取6周龄正常C57BL/6J小鼠眼球,制备小鼠视网膜垂直冰冻切片,采用免疫荧光染色法检测和验证CB1R和CB2R在RGCs中的表达。10只C57BL/6J新生鼠浸入75%乙醇消毒后取眼球,在冰上预冷的DMEM培养基中分离视网膜进行RGCs原代培养,采用免疫荧光技术检测培养细胞中RGCs标志物Brn3a的阳性表达并确定培养细胞中CB1R和CB2R的表达。将原代培养14 d的RGCs分为正常对照组和氧糖剥夺（OGD）组,分别用完整培养基+体积分数95%空气+体积分数5%CO2和无糖培养基+体积分数95%N2+4%CO2+体积分数1%O2条件下培养20 h。采用JC-1染色法检测细胞中线粒体结构变化和RGCs的形态变化。各组细胞分别给予1μmol/L CB1R拮抗剂SR141716A、1μmol/L CB2R拮抗剂SR144528以及5μmol/L、10μmol/L CB1R和CB2R激活剂WIN 55212-2,采用MTT法比较各组RGCs存活率。结果正常C57BL/6J小鼠视网膜全层均可见CBR的表达。正常对照组培养的RGCs大小均匀,多呈多角形,细胞间轴突细长并形成网络,细胞中Brn-3a表达阳性;OGD组培养的细胞皱缩或形成碎片,多数细胞轴突消失,Brn-3a表达荧光强度明显减弱。正常对照组RGCs中JC-1染色显示,线粒体的黄色荧光明显强于OGD组,表明OGD组线粒体膜电位明显下降。MTT法检测显示,正常对照组RGCs存活率为（100.00±13.87）%,明显高于OGD组的（89.52±18.16）%,差异均有统计学意义（q=8.065,P=0.008）;SR141716A和SR144528作用后OGD组细胞存活率分别为（116.63±22.21）%和（112.61±19.02）%均明显高于同组的无药物处理细胞的存活率（89.52±18.16）%,差异均有统计学意义（q=29.780、17.391,均P<0.01）,而SR141716A和SR144528作用后正常对照组细胞存活率的变化差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论细胞缺氧缺糖时上调CB在细胞中的表达和激活CB活性。在缺氧缺糖条件下,抑制细胞中CBR的激活过程对RGCs有保护作用。

大麻素对人和小鼠视网膜神经节细胞GABA电流的调控差异

目的比较人和小鼠视网膜内源性大麻素类受体1(cannabinoid receptor,CB1)的表达差异,观察大麻素受体激动剂WIN55212-2对不同种属视网膜神经节细胞GABA电流的调控作用。方法采用冰冻切片免疫荧光染色,观察CB1受体在视网膜中的表达。制备视网膜薄片,行全细胞膜片钳记录。在神经节细胞上给予100μmol/L GABA快速加药诱导出电流IGABA,而后观察孵育大麻素受体激动剂WIN55212-2时GABA诱导的IGABA及同时孵育WIN 55212-2和大麻素受体拮抗剂SR141716A的电流IGABA。结果人和小鼠视网膜CB1受体的分布有所不同,人的内核层、外核层、神经节细胞层有显著的CB1表达,但小鼠CB1受体主要表达在内网状层、外网状层上;膜片钳结果显示不管是在人还是在小鼠的视网膜上,孵育WIN55212-2后的GABA诱导电流幅度均有显著减小。不同的是,在人视网膜神经节细胞上,WIN55212-2明显减慢了GABA电流的反应速度,表现在电流达峰时间明显延长,恢复时间缩短(P<0.05)。WIN55212-2对小鼠视网膜神经节细胞GABA的反应速度无明显差别(P>0.05)。结论CB1受体在人和小鼠视网膜中有差异性分布,对神经节细胞的GABA电流影响也不同。孵育WIN55212-2可抑制人和小鼠神经节细胞GABA电流幅度,但仅对人的神经节细胞的GABA电流的动力学速度有影响。

转录因子Sox2对视网膜发育和功能的影响及作用

转录因子Sox2在胚胎发育和细胞分化的多个时期均有表达,对未分化的胚胎干细胞、神经干细胞的再生功能及干细胞的多能性至关重要,单独或与其他转录因子共同作用可通过直接或间接调控不同下游基因的表达影响眼部、大脑、垂体、消化系统及生殖系统的发育。转录因子Sox2是视网膜发育的关键转录因子,Sox2基因突变或表达水平改变会导致视网膜发育不良和一系列眼部疾病。全面认识Sox2的结构与功能及其对视网膜发育的影响,有助于眼科医师和科研工作者研究与其相关视网膜疾病的发生和病理机制,为其防治提供新的思路和方向。

关于高分子混凝土泵管润滑剂的应用

本文通过新型材料高分子混凝土泵管润滑剂与润泵砂浆在现实工程建设的运用对比，发现新型材料高分子混凝土泵管润滑剂具有提高工程质量、营造绿色施工环境、节约工程成本优点，有很高的经济价值和推广价值。

光遗传学技术及其在视网膜变性性疾病治疗中的应用

光遗传学技术是一种将光学和遗传学技术相结合的新兴技术。其主要原理是应用遗传学方法将特异的视蛋白导入目标神经元，再用相应波长或频率的光刺激视蛋白，使神经元兴奋或抑制，进而控制特定神经环路的活动，最终起到调控实验动物生理活动和行为的作用。在视网膜色素变性、老年性黄斑变性等视网膜变性性疾病中，应用光遗传学技术玻璃体腔或视网膜下注射视蛋白基因，由外界给予相应的光照激活视蛋白，模拟并代替视网膜光感受器功能，可在一定程度上恢复患者视力。但其存在病毒转染有潜在风险、目标细胞的准确选择难以把握、治疗后视力分辨率能否恢复正常尚不确定等局限性。随着光敏感度更高、更易被激发的新型视蛋白和具有更高转染效率的病毒载体不断研发，相信光遗传学技术将会应用在更多眼科领域。

雌激素受体GPR30介导的小鼠视网膜神经节细胞保护作用

目的:通过玻璃体腔注射N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)建立小鼠青光眼模型,研究G蛋白偶联受体30(GPR30)对受损的视网膜神经节细胞的保护作用。方法:选取7-9周龄C57雄性小鼠,利用荧光染色技术,观察GPR30受体在正常雄鼠视网膜内分布。将健康雄鼠随机分为4组:1对照组;2NMDA模型组;3GPR30受体激动剂(G-1)组;4雌激素和GPR30受体拮抗剂(G-15)组。通过全视网膜铺片Brn3a免疫荧光染色、视网膜冰冻切片免疫荧光染色和神经节细胞计数,观察玻璃体腔注射NMDA后各组小鼠视网膜神经节细胞和视网膜胶质细胞的变化。结果:在正常雄鼠视网膜中,GPR30受体主要表达在内核层和神经节细胞层。光镜下观察雌激素组和G-1组中Brn3a特异性标记的神经节细胞较NMDA模型组神经节细胞密度增高,GFAP标记的胶质细胞较NMDA模型组则明显减少;神经节细胞计数显示:雌激素组和GPR30受体激动剂(G-1)组均较NMDA模型组神经节细胞数量明显增高(P<0.05)。结论:雌激素主要通过激活GPR30受体保护视网膜神经节细胞,在NMDA损伤的视网膜神经节细胞模型中,GPR30受体的激活可减少视网膜胶质细胞的增生。

全细胞膜片钳结合单细胞RT-PCR技术在NMDA诱导的小鼠青光眼模型视网膜双极细胞G蛋白通路研究中的应用

目的：介绍一种视网膜全细胞膜片钳联合单细胞逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术在视网膜单细胞信号成分分析中的应用，并研究N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）对ON型双极细胞中G蛋白相关mRNA表达的影响。方法：实验研究。3～5周龄C57BL／6J／小鼠20只随机分为2组，每组各10只，分别玻璃体腔注射3μlNMDA（30nmol／L）构建青光眼模型，3μl PBS（10nmol／L）作为对照组，24h后取视网膜，膜片钳下钳取单个ON型双极细胞，并做RT-PCR观察几种目的mRNA的表达差异。2组间各参数比较采用Mann．Whitney检验。结果：RT-PCR结果显示蛋白激酶Cα亚基（PKca）、瞬时感受电位离子通道1（TRPM1）、G蛋白α亚单位（Gα0）的表达在NMDA青光眼模型构建后分别为0．536±0．339、0．337±0．271、4．36±1．83，构建前后差异有统计学意义（U=O，P=-O．001；U=O，P=O．002；U=36，P=O．002o结论：NMDA诱导的青光眼模型可影响视网膜ON型双极细胞G蛋白耦联通道的信号传导。

我心中的苦恼

“小小少年，很多烦恼……”最近总是哼起这首曲子，因为我心中装着一个很大的苦恼。 这烦恼说来话长。“罪魁祸首”就是教体育的李老师。四年级上学期时，李老师叫我去参加篮球队，我在体育馆训练了五天，一直都是练习拍篮球。第六天早上，我想去了也是练习拍篮球，

眼保健操的N种姿势

你观察过同学们做眼睛操的表现吗？我由于担任班级的眼睛操监督员，荣幸地欣赏了我班同学做眼睛操的“多姿多彩”表现。