蛋白质组学技术筛选与鉴定DMP胁迫下蚯蚓表皮组织的差异蛋白

蚯蚓在DMP质量浓度为200mg/kg和600mg/kg的自然土壤中污染胁迫7,14,21d,采用蛋白质双向电泳技术筛选出表皮组织差异表达的140个蛋白质斑点,并用肽质量指纹图谱技术和数据库比对法初步鉴定出5种差异蛋白质,分别为假定蛋白(BRAFLDRAFT_58397),α微管蛋白,ATP合酶β亚基,β微管蛋白,假定蛋白(FAEPRAM212_03570),这些蛋白质可能参与邻苯二甲酸二甲酯代谢并与蚯蚓解毒功能有关,有望成为土壤生态毒性评价、监测和开展毒理学研究的生物标记物.

蚯蚓蛋白质组双向电泳技术体系的建立及条件优化

对赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)表皮组织的两种蛋白质提取方法进行了比较,并对双向电泳IPG胶条pH范围,上样量条件进行了优化,结果表明:裂解液提取法提取的蛋白质量浓度较低,蛋白种类缺失,采用TCA-丙酮沉淀法提取法,可显著提高提取液蛋白质提取效果,样品中蛋白质质量浓度可达12.49μg/μL.蚯蚓表皮组织蛋白质主要分布在pH范围4～7之间,适于选用24cmpH 4～7线性梯度IPG胶条,采用考马斯亮蓝染色法时最适上样量为600μg,所得电泳图谱可检测蛋白点达(629±20)个,且重复性实验匹配率较高.用TCA-丙酮沉淀法提取蚯蚓表皮组织蛋白质组,按优化的参数进行双向电泳分离,所得图谱分辨率高、重复性好,可用于蚯蚓蛋白质组学研究.