基于串联质谱标签技术结合IPA生物信息学平台的弱精子症患者精子蛋白质组学研究

目的应用串联质谱标签(TMT)标记技术结合IPA生物信息分析平台开展弱精子症患者精子蛋白质组学研究,为进一步研究弱精子症发病机制提供新的思路和依据。方法随机选取30例男性健康体检者和弱精子症患者的精子标本,通过TMT技术进行蛋白质组学分析。以P<0.05且表达倍数>1.7或<0.588为标准,构建候选差异蛋白质体系,利用IPA生物信息学分析平台对候选差异蛋白质进行生物信息学分析。结果通过蛋白质组学技术获得89种弱精子症患者精子候选差异蛋白质,73种蛋白质表达上调,16种蛋白质表达下调。通过IPA分析发现弱精子症患者精子候选差异蛋白质中有4种蛋白质与凋亡相关,2种蛋白质与自噬相关,1种蛋白质与雄激素相关,10种蛋白质与免疫相关,2种蛋白质与炎症有关。差异表达的蛋白质参与的主要生物学过程为蛋白质的内质网定位和核转录的mRNA分解等过程,涉及的典型信号通路为Sirtuins、蛋白激酶A和mTOR信号通路等,并获取4种与弱精子症疾病相关的候选标志物。结论弱精子症的发生与凋亡、自噬、雄激素异常、免疫及炎症等改变密切相关,但需在验证的基础上进一步研究,同时弱精子症患者精子差异蛋白质涉及复杂的生物学过程、分子功能和信号通路,为开展其发病机制研究奠定了基础。

寒证ED大鼠模型动脉差异表达蛋白质的TMT技术筛查与生物信息学分析

目的筛查寒证勃起功能障碍(ED)大鼠模型动脉差异表达蛋白质,并进行生物信息学分析,为研究寒证ED发病机制提供新的思路与实验依据。方法将100只雄性性成熟SD大鼠随机分为正常对照组(N组,15只)、寒证造模组(M组,85只),分别在正常环境(22±2)℃及冷环境(4±0.5)℃饲养,干预24周并建立稳定的寒证模型后,通过APO勃起实验筛选出ED大鼠并分为寒证ED组(ED组)和寒证ED干预组(用于其它研究),剩余大鼠为寒证证候组(S组)。采用TMT技术筛查并鉴定寒证ED大鼠动脉差异表达蛋白质,并进行功能富集分析和KEGG通路富集分析。结果(1)模型的建立:1)生物学表征结果为:与N组相比,M组大鼠反应迟钝,舌苔苍白,大便湿软,小便色淡,体重增长显著减缓(P<0.05),饮食量、饮水量显著升高(P<0.05);2)APO实验结果为:与N组相比,M组大鼠勃起潜伏期显著延长,勃起次数显著减少(P<0.05),ED成模率为47.95%;(2)蛋白质组学:通过TMT技术共鉴定出差异蛋白质364种,其中上调蛋白281种,下调蛋白83种。GO分析显示差异蛋白质主要参与小分子代谢,氧化还原过程,在线粒体和线粒体外膜均有分布,且具有催化活性、氧化还原酶活性等。KEGG信号通路分析发现差异蛋白质涉及氧化磷酸化通路、PPAR信号通路、铁死亡通路等152条信号通路。结论(1)长期冷刺激可成功诱导建立寒证ED证候与病证结合大鼠模型,其生物学表征符合中医临床证候特点;(2)寒证ED大鼠动脉差异表达蛋白质涉及到复杂的生物学过程、分子功能与信号通路,为进一步基于动脉病理改变层面开展寒证ED发病机制研究奠定了基础。

缓激肽受体B1R对SD大鼠阴茎勃起功能影响的实验研究

目的:研究缓激肽受体B1R对大鼠阴茎勃起功能的影响。方法:通过腹腔注射B1受体激动剂[Des-Arg9]-Bradykinin与B1受体抑制剂Lys-(des-Arg9,Leu8)-Bradykinin,观察各组大鼠阴茎勃起功能,通过HE染色和Masson染色观察大鼠阴茎组织形态变化及纤维化水平的变化,通过Western-blot检测大鼠阴茎组织TGF-β1、TNF-α与IL-6等炎症因子的表达情况。结果:(1)B1受体激动剂显著抑制大鼠阴茎勃起功能,并升高阴茎胶原纤维/肌原纤维比值;而B1受体抑制剂显著提升大鼠阴茎勃起功能,并降低阴茎胶原纤维/肌原纤维比值;(2)B1受体激动剂显著升高大鼠阴茎TGF-β1、TNF-α与IL-6蛋白表达水平,而B1受体抑制剂降低大鼠阴茎TGF-β1、TNF-α与IL-6蛋白表达水平。结论:B1受体可能通过炎症因子、阴茎组织纤维化影响阴茎勃起功能。