HPLC-MS法测定氯吡格雷酸人体尿药浓度及氯吡格雷酸经尿排泄研究

目的:建立测定氯吡格雷酸人体尿药浓度的高效液相色谱-质谱联用方法,并通过监测硫酸氢氯吡格雷片经健康受试者口服后其主要Ⅰ相代谢物氯吡格雷酸尿药浓度的经时变化过程,考察氯吡格雷酸经尿排泄特征。方法:色谱采用Lichrospher C18柱(150 mm×2.1 mm,5μm),以甲醇-10 mmol.L-1醋酸铵水溶液(含0.1%甲酸)(42∶58)为流动相。质谱采用电喷雾离子源四级杆质谱,以选择性离子监测方式进行正离子检测。6名健康受试者单次口服硫酸氢氯吡格雷片75 mg后,定时收集尿样。采用甲醇直接稀释法处理尿样后,评价氯吡格雷酸经尿排泄特征。结果:氯吡格雷酸在4.780～9 559μg.L-1质量浓度范围内线性关系良好,平均回收率大于93.4%。受试者服药后0～2小时间,氯吡格雷酸经尿排泄速率最大;36小时内有(1.1±0.5)%的氯吡格雷以氯吡格雷酸形式从尿中排出。结论:该测定方法符合生物样品分析要求;氯吡格雷在体内以氯吡格雷酸形式经尿排泄迅速,24小时内基本排泄完全。

川续断皂苷Ⅵ及其活性代谢物在大鼠体内的药代动力学研究

研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponin VI,A-VI)及其活性代谢产物常春藤皂苷元(hederagenin,M1)在大鼠体内的药代动力学、排泄特征和A-VI的大鼠血浆蛋白结合率。采用已建立的LC-MS/MS法测定大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中A-VI和M1浓度,计算药代动力学参数,并用平衡透析法测定大鼠血浆中A-VI的血浆蛋白结合率。大鼠以低、中、高(0.03,0.09,0.27g.kg-1)3个剂量分别单次灌胃给予A-VI后,A-VI的血药浓度-时间曲线出现双峰现象,Cmax1和Cmax2分别为(28.88±49.78)和(4.480±1.872)μg.L-1,(35.19±23.53)和(22.11±16.15)μg.L-1,(73.37±37.28)和(132.2±160.7)μg.L-1;AUC0-t分别为(43.21±37.32),(133.9±102.5),(779.6±876.9)μg.h.L-1;t1/2分别为(3.3±0.8),(3.2±2.3),(4.5±1.2)h。代谢产物M1相应的Cmax分别为(16.03±9.336),(26.41±11.95),(28.71±5.874)μg.L-1;AUC0-t分别为(105.6±73.60),(260.0±153.9),(323.1±107.9)μg.h.L-1;t1/2分别为(4.1±3.4),(4.4±2.3),(3.9±0.9)h。A-VI和M1在大鼠体内药动学特征不存在性别差异,按0.09 g.kg-1剂量多次灌胃A-VI后A-VI和M1在体内均无蓄积。灌胃A-VI后,A-Ⅵ的胆汁和尿液排泄速率-时间曲线也出现双峰现象,灌胃A-Ⅵ 6 h以后可以在大鼠粪便中检测到M1。A-Ⅵ在大鼠血浆中的平均血浆蛋白结合率为92.9%。

苯环喹溴铵对大鼠肝脏CYP450酶诱导作用的研究

目的研究苯环喹溴铵对大鼠肝脏CYP450酶是否有诱导作用。方法将SD大鼠,分为空白溶剂组、阳性对照组和苯环喹溴铵低中高剂量给药组(分别鼻腔给予苯环喹溴铵生理盐水溶液1,3或9 mg·kg-1),分别于连续给药后处死,取肝称重并制备微粒体。计算大鼠肝脏脏器系数;测定大鼠肝脏微粒体CYP450蛋白含量;通过HPLC-MS/MS测定大鼠肝微粒体温孵体系中6β-羟基睾酮和对乙酰氨基酚的浓度;应用底物法测定大鼠肝微粒体CYP1A1/2和CYP3A1/2酶的活性。结果阳性对照组与空白溶剂组相比,在大鼠肝脏脏器系数、CYP450蛋白含量及CYP1A1/2和CYP3A1/2酶活性上均有增加,且具有显著性差异(P<0.05)。苯环喹溴铵低中高剂量给药组与空白溶剂组在肝脏脏器系数、CYP450蛋白含量和CYP1A1/2酶活性上均无显著性差异(P>0.05);苯环喹溴铵低中高剂量给药组大鼠肝脏CYP3A1/2酶的活性未高于空白溶剂组。结论阳性对照组对大鼠肝脏CYP450酶有诱导作用,所建立的实验体系可用于诱导作用的评价;苯环喹溴铵低中高3个剂量组对大鼠肝脏CYP450酶均无诱导作用。