去甲斑蝥素对环磷酰胺诱导的白细胞减少症模型大鼠骨髓造血功能的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对环磷酰胺(CTX)诱导的白细胞减少症模型大鼠骨髓造血的影响及机制。方法:采用CTX腹腔注射法复制白细胞减少症模型,以NCTD干预模型大鼠,全自动血细胞分析仪检测外周血白细胞(WBC)数量,骨髓组织作切片HE染色观察病理改变,流式细胞术检测骨髓细胞增殖周期、凋亡率,免疫组织化学法检测骨髓组织中凋亡相关蛋白BCL-2、BAX的表达。结果:NCTD干预白细胞减少症模型后,外周血WBC显著升高;模型大鼠骨髓骨髓组织结构破坏,造血细胞明显减少,NCTD干预后促进骨髓组织细胞结构显著恢复;NCTD可促使白细胞减少症模型大鼠骨髓细胞增殖及周期的转化,显著抑制CTX所诱导的骨髓细胞凋亡与坏死,上调抑凋亡蛋白BCL-2表达,下调促凋亡蛋白BAX的表达。结论:NCTD可刺激CTX诱导的白细胞减少症模型大鼠骨髓造血,促进外周血白细胞水平的恢复,其机制可能与NCTD调控骨髓细胞周期、抑制细胞凋亡等有关。

去甲斑蝥素及其五种衍生物抗白血病细胞K562作用的实验研究

目的：探讨去甲斑蝥素（NCTD）及其五种衍生物抗白血病细胞K562的作用．方法：常规方法复苏、传代培养人慢性粒细胞性白血病K562细胞，待细胞进入对数生长期后用于实验．空白对照组行常规培养，药物处理包括去甲斑蝥素（NCTD）处理组和NCTD衍生物（QJ-2、QJ-3、QJ-13、BH052及BH091）处理组，分别设置各组药物终浓度0．001 mmol／L、0．005 mmol／L、0．05 mmol／L、0．1 mmol／L、0．5 mmol／L、1 mmol／L、5 mmol／L、10 mmol／L 处理，各组于处理24 h、48 h （NCTD）、72 h（NCTD）后收集细胞检测：①倒置相差显微镜观察细胞生长状况；②常规瑞氏染色后光学显微镜下观察细胞形态；③MTT比色法检测不同处理组细胞的活力和增殖能力．结果：①与空白对照组比较，NCTD及其衍生物处理后活细胞减少，并出现抱团生长、胞膜出泡、胞体破碎等现象，且变化程度随浓度升高更加明显；瑞氏染色观察 NCTD 作用后K562细胞，药物处理组细胞胞核染色质出现聚集、溶解、碎裂现象，胞浆出现空泡，空泡量且随NCTD浓度升高而增多；②MTT实验测定各药物对K562细胞的IC50值由大到小分别为QJ-3（1．88 mmol／L）、BH091（1．787 mmol／L）、QJ-13（0．621 mmol／L）、BH052（0．406 mmol／L ）、QJ-2（0．129 mmol／L ）、NCTD （0．083 mmol／L），NCTD对K562细胞的增殖抑制作用最强，且该抑制作用随药物剂量增加和作用时间延长而增强；在NCTD的五种衍生物中 QJ-2的抑制作用最强．结论：①NCTD对K562细胞生长有较强的抑制作用，且呈剂量-时间依赖性；②五种衍生物中QJ-2对K562细胞的作用最强．

HBV-DNA载量水平与血清学标志物分组模式及前S1抗原的关系

目的:探讨乙型肝炎病毒DNA(hepatitis B virus DNA,HBV-DNA)载量水平与血清学标志物(hepatitis B virus markers,HBVM)分组模式以及前S1抗原(Pre-S1 antigen,Pre-S1Ag)的关系。方法:收集2018年6月至2020年7月来院就诊的180例慢性乙肝患者的血清样本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测血清HBV-DNA载量水平;采用化学发光免疫分析法(CLIA)检测乙肝表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)、表面抗体(抗HBs)、e抗体(抗HBe)、核心抗体(抗HBc),并归纳受检样本的HBVM分组模式;采用ELISA法检测血清Pre-S1Ag。分析HBV-DNA载量水平、HBVM分组模式和Pre-S1Ag水平的关系。结果:180例血清样本,HBsAg^(+)/抗HBe^(+)/抗HBc^(+)模式85例(47.22%),HBsAg^(+)/HBeAg^(+)/抗HBc^(+)模式70例(38.89%),其他模式25例(13.89%)。HBsAg^(+)/HBeAg^(+)/抗HBc^(+)模式组HBV-DNA、Pre-S1Ag阳性率均明显高于HBsAg^(+)/抗HBe^(+)/抗HBc^(+)模式组及其他模式组,差异有统计学意义(χ^(2)=56.955、46.809,P<0.05)。将HBV-DNA阳性作为判断HBV复制的金标准,HBeAg的灵敏度为87.23%,特异度为65.12%,阳性预测值为73.21%,阴性预测值为82.35%;Pre-S1Ag的灵敏度为90.35%,特异度为86.36%,阳性预测值为91.96%,阴性预测值为83.82%。依据HBV-DNA载量检测水平,分成<10^(3) copies/mL、10^(3)~10^(5) copies/mL、10^(5)~10^(7) copies/mL、>10^(7)copies/mL的4个亚组。随着HBV-DNA载量水平升高,Pre-S1Ag阳性率逐渐升高,分别为41.18%、64.00%、77.78%、94.29%,差异具有统计学意义(χ^(2)=31.250,P<0.05)。结论:HBV血清学标志物和Pre-S1Ag均可用于辅助诊断是否感染HBV以及HBV复制水平,但尚不可取代HBV-DNA定量检测,三者联合检测能为临床诊断、病毒复制提供更全面的依据。

去甲斑蝥素对低白细胞模型大鼠骨髓GM-CSF表达的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对环磷酰胺(CTX)诱导的低白细胞模型大鼠骨髓粒-单集落刺激因子(GM-CSF)表达的影响。方法:将90只SD大鼠随机分为模型对照组、空白对照组、NCTD高剂量组、NCTD低剂量组和升白药物对照组;采用腹腔注射CTX(30mg/㎏)方法复制低白细胞大鼠模型后,各药物对照组及空白对照组分别以一定浓度药物、双蒸水灌胃,并于灌胃后第3、6、9天采集外周血及骨髓组织样本进行以下指标检测:(1)全自动血细胞分析仪检测外周血WBC数量;(2)酶联免疫双抗夹心法(ELISA)检测外周血GM-CSF含量;(3)采用免疫组化(IHC)方法检测骨髓组织细胞中GM-CSF的表达。结果:(1)与空白对照组比较,CTX处理后各实验组大鼠白细胞数量显著降低(P<0.05);(2)在CTX诱导的低白细胞模型大鼠中,NCTD高、低剂量组和升白药物对照组外周血WBC显著升高(P<0.05),且GM-CSF在骨髓组织细胞中的表达显著增高(P<0.05),其在外周血中的含量也有增加趋势。结论:NCTD可以显著升高CTX处理后SD大鼠外周血白细胞数量,其机制可能与NCTD上调GM-CSF的表达有关。