羊常见病的诊断治疗及综合防控措施研究

随着新疆畜牧业振兴行动的实施,伊犁河谷地区的羊饲养数量不断增加,如何有效做好羊常见病的综合防控已经成为制约当地畜牧业高质量发展的重要因素之一。特别是在农牧区,养羊业起到了重要的支撑、带动作用,推进畜牧业高质量发展是促进农牧民增收致富的关键。但养殖户受到如密度、环境、营养、应激等诸多因素的影响,极易导致羊病的发生,不仅威胁羊只健康,而且严重的会死亡,进而给养殖户造成巨大经济损失,因此做好羊病诊治及防控工作意义重大。基于此,本文着重对规模化羊场羊常见病的诊治方法及综合防控措施展开了深入研究,为促进伊犁州畜牧业的高质量发展提供参考。

马腺疫链球菌fneB基因LAMP检测方法的建立及应用

为了建立快速简便的fneB-LAMP检测法用于马腺疫病原马链球菌马亚种(S.equi)的检测,本试验采用恒温水浴进行LAMP扩增,建立可视化fneB-LAMP检测方法。结果显示:对大肠埃希菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球、蜡状芽孢杆菌和克雷伯杆菌5种菌与标准S.equi菌株检测,只能够检测出标准阳性菌株;对新疆昭苏县3个马场临床检查疑似马腺疫的鼻拭子和脓汁共40份样品进行fneB-LAMP检测,其中有7株分离菌呈阳性;与普通PCR检测方法相比,LAMP检测方法灵敏度为8×10^(-6)μg/μL,较普通PCR方法高;该方法在粗提模板的情况下只需简单的恒温仪器反应1 h可得到可视化的检测结果。本试验成功建立了马腺疫病原靶向fneB基因LAMP检测的方法,能够快速准确的检测出S.equi,为今后快速诊断马腺疫疾病提供参考。

中草药泰山磐石散加减方对小鼠肠道微生物菌群的影响

为了解中草药泰山磐石散加减方对小鼠肠道微生物菌群的影响,本试验选取45只SPF级昆明小鼠,分为对照A组、试验B组和试验C组。试验B组和C组小鼠分别用0.86 g/mL的中草药泰山磐石散方灌胃0.3和0.4 mL,对照A组灌胃蒸馏水0.4 mL,每天灌胃2次,间隔8 h,连续7 d。第8天采集对照组和试验组小鼠直肠部位粪便样品,从每份样品中提取微生物基因组总DNA,采用Illumina HiSeq测序技术检测样品微生物群落多样性。结果显示,中草药泰山磐石散对小鼠粪便中微生物α多样性指数(Chao1和Shannon)呈波动性变化,试验B和C组与对照A组的Chao1指数差异极显著(P<0.01);通过检测小鼠对照组与试验组粪便中的微生物,在门水平上,有9大优势菌门,其中与对照A组相比,试验组肠道微生物Proteobacteria、Verrucomicrobia丰度显著降低(P<0.05);而Saccharibacteria、Tenericutes丰度显著或极显著增加(P<0.05;P<0.01);在科水平上,有19大优势菌科,其中与对照组相比,试验组肠道微生物Lactobacillaceae、Desulfovibrionaceae、Coriobacteriaceae、Porphyromonadaceae、Family_XIII和Bifidobacteriaceae丰度显著降低(P<0.05);在属水平上,有18大优势菌属,其中与对照A组相比,试验B、C组肠道微生物Lactobacillus、Desulfovibrio和Enterorhabdus丰度显著降低(P<0.05),而试验C组的肠道微生物Alloprevotella、Bacteroides、Lachnospiraceae_UCG-006和Faecalibaculum丰度显著增加(P<0.05)。本试验中草药泰山磐石散加减方能够有选择性的促进小鼠肠道内Bacteroidetes的生长,从而抑制Proteobacteria有害菌的生长,增强糖和脂肪代谢,最终通过改善肠道微生物多样性的结构,使整个肠道微生物多样性达到一个新的平衡。

马源人乳头瘤病毒23型E2基因的遗传变异分析

为调查马源人乳头瘤病毒(HPV)23型(HPV-23)在马群中的流行及遗传变异情况,本研究对413份马流产胎儿组织和20份马场工人鼻拭子样品经PCR检测,结果显示,在纯血马和伊犁马流产胎儿组织样品中均检出HPV-23,阳性率分别为4.3%(2/46)和9.3%(34/367),表明马流产胎儿携带HPV-23,该病毒可能导致马的流产;在马场工人鼻拭子样品中也检出HPV-23,阳性率为60%(12/20)。将其中12份检测为HPV-23阳性的样品进行E2基因的PCR扩增测序后,采用MegAlign7.1.0软件分析本研究获得的HPV-23 E2基因与GenBank中相关病毒参考株E2基因的同源性,并采用MEGA7.0.26软件构建人源与马源HPV-23 E2基因的进化树,分析其遗传进化特征。同源性分析结果显示,本研究测序的8株马源及4株人源HPV-23 E2基因与氨基酸序列的同源性均为100%,与国外2株人源HPV-23 E2基因序列的同源性为98.9%~99.2%,提示马源HPV-23可能来源于人。遗传进化分析显示,本研究鉴定的马源及人源HPV-23与国外人源HPV-23形成独立进化分支,且同处于β进化分支,与马乳头瘤病毒处于不同分支,进一步表明马源HPV-23可能来源于人。本研究首次在马流产胎儿组织中检测到HPV-23,提示该病毒可能导致马的流产,可能是人源HPV-23感染马,该结果为动物源HPV-23的流行病学研究提供了参考依据。

新疆伊犁地区不同马场马腺疫病原菌的分离及鉴定

本文通过对新疆伊犁地区3个马场中疑似马腺疫病例进行病料采集、培养、生化实验及同源性分析,进一步确定伊犁地区不同马场马腺疫病原菌的种属差异。根据患病马匹临床症状对疑似马腺疫病例进行实验室细菌学检查及血常规检查。结果表明,采集的40份样品中检测出7株疑似马链球菌,通过fneB基因扩增后发现其中6株菌的核苷酸同源性达90%~99%,确诊为马链球菌马亚种;而另1株菌其氨基酸同源性为76%~85%,推测可能为马链球菌兽疫亚种。血常规结果表明,患病马白细胞总数极显著升高(P<0.01),粒细胞数和淋巴细胞数显著升高(P<0.05)。本研究结果提示,新疆伊犁地区马场可能有兽疫亚种与马亚种混合感染的病例,为今后临床防控马腺疫疾病提供参考依据。