猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种烈性传染病。PRRSV的非结构蛋白2(NSP2)编码一个多功能蛋白,具有广泛生物学作用。本文对NSP2遗传变异分析,与自身病毒蛋白互作,与宿主蛋白互作,影响PRRSV复制、毒力、细胞噬性,调节宿主免疫以及在疫苗应用等相关研究进行综述,为深入研究PRRSV致病机理和疫苗设计提供重要理论基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC 30株的NSP 1分析

研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30株的NSP 1基因的生物信息。NSP 1基因全长1149 bp。NSP 1基因编码的蛋白质具有383个氨基酸,分子质量为43.2 kDa,等电点(pI)为8.95,属于疏水性蛋白,不稳定系数为51.21,属于不稳定蛋白,没有信号肽和跨膜螺旋结构。NSP 1基因编码的蛋白质具有多个强抗原性位点,亚细胞定位预测表明抗原性位点可能位于细胞质中。遗传进化分析显示,基因编码蛋白序列相对保守,没有发生氨基酸插入或缺失。NADC30株与SD-A19株的遗传距离较近,但与CHsx1401株的遗传距离较远。

猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的一种高度接触性传染病。PRRSV编码NSP4具有3C样丝氨酸蛋白酶(3C-like serine proteinase,3CLSP)活性,以保守氨基酸His39-Asp64-Ser118为催化三联体,将pp1a和pp1ab水解成多个非结构蛋白(NSP3~NSP12)。NSP4在调控PRRSV复制、抑制干扰素(interferon,IFN)、早期感染诊断以及诱导细胞凋亡等方面具有重要作用。对NSP4进行综述,为防控PRRS及开发新疫苗提供理论基础。

猪TRIM3基因克隆、生物信息学及组织表达分析

【目的】克隆大白猪三基序结合蛋白3(tripartite motif-containing 3,TRIM3)基因,并对其进行生物信息学和组织表达分析。【方法】采用PCR技术扩增并克隆大白猪TRIM3基因CDS全长序列,连接pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,通过蓝白斑筛选阳性克隆,菌液PCR鉴定后测序,与不同物种TRIM3基因序列比对并构建系统进化树;应用多种在线软件对其编码蛋白进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR方法检测TRIM3基因在大白猪不同组织中的相对表达量。【结果】大白猪TRIM3基因CDS序列全长2235 bp,编码744个氨基酸。相似性和遗传进化分析结果显示,大白猪与野猪的相似性最高,达99.7%,与鸭的相似性最低,为75.1%;大白猪TRIM3基因与野猪先聚为一类,与牛和山羊亲缘关系较近。生物信息学分析显示,大白猪TRIM3蛋白分子质量为80.58 ku,理论等电点(pI)为8.32,不稳定系数为40.85,为亲水性蛋白,但不是分泌蛋白,无糖基化位点,预测其有60个磷酸化位点,主要存在于细胞质内;在TRIM3蛋白二级结构中以无规则卷曲为主,占41.67%,三级结构模型预测结果与二级结构一致。组织表达分析表明,大白猪TRIM3基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、气管、结肠中均有分布,肺脏中表达量最多且显著高于其他组织(P<0.05)。【结论】本研究成功克隆大白猪TRIM3基因CDS全长序列,并进行了生物信息学和组织表达分析,为进一步研究大白猪TRIM3蛋白的免疫学功能提供理论依据,对探究大白猪TRIM3基因参与先天性免疫和抗病毒感染分子机制具有重要意义。

PRRSV-2 NSP7间接ELISA检测方法的建立

为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒-2(PRRSV-2)抗体检测方法,试验采用原核表达猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP7蛋白,并以该蛋白为基础建立间接ELISA方法,对该方法的特异性、重复性、敏感性以及与爱德士商品化试剂盒符合率进行比较。试验结果表明,PRRSV-2 NSP7蛋白表达良好,可获得可溶蛋白,建立NSP7间接ELISA方法特异性、重复性、敏感性良好,与爱德士商品化试剂盒的符合率96.2%,说明PRRSV-2 NSP7间接ELISA检测方法建立成功。

猪OASL2基因克隆与序列分析

克隆猪OASL2基因并对其进行序列分析。采用PCR技术扩增猪OASL2基因,连接至pCE2 TA/Blunt-Zero载体并将其转化至DH5α化学感受态细胞,测序获得猪OASL2基因CDS全长,对其进行生物学功能预测以及构建系统进化树。结果显示,猪OASL2基因全长为633 bp,编码211个氨基酸,蛋白分子质量为23.94 ku,理论等电点为8.16。与猪OASL1相似性为98.1%,氨基酸相似性为97.6%,与其它物种OASL相似性为52.3%~72.0%,氨基酸相似性为9.8%~58.1%。系统进化树表明猪OASL2与猪OASL1位于同一分支,与牛OASL位于同一亚分支,亲缘关系较近。氨基酸序列比对结果表明猪OASL2包含P-loop、D-box以及保守位点LLRL。