C57BL/6J小鼠慢性束缚应激抑郁症模型的建立

目的通过慢性束缚应激（CRS）建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。方法 C57BL/6J小鼠经体重、糖水偏好、旷场实验初筛后从中选择20只小鼠并随机分为正常对照（NC）组和CRS组2组,每组10只。对CRS组小鼠进行连续21 d,每天4 h的束缚刺激,并最终进行糖水偏好检测和强迫游泳检测。结果 CRS组小鼠在水中不动的时间为（131.70±21.65）s,明显长于NC组的（68.88±8.43）s（P=0.0304）。CRS组小鼠0～24 h和0～48 h的糖水偏好百分比分别为（66.21±3.24）%和（73.25±1.50）%,均明显低于NC组的（79.46±3.85）%（P=0.0196）和（80.20±2.26）%（P=0.0248）。结论通过慢性束缚应激成功建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。

β-catenin在内侧颞叶癫痫发病机制中的作用

目的探讨β-catenin与内侧颞叶癫痫发病机制之间的关系。方法以海人酸诱导建立内侧颞叶癫痫小鼠模型,采用Western blot检测正常鼠和模型鼠海马中β-catenin表达是否存在差异,免疫组织化学和免疫荧光技术检测非海马硬化内侧颞叶癫痫与海马硬化颞叶癫痫患者海马中β-catenin表达量是否存在差异。结果模型鼠海马硬化与内侧颞叶癫痫海马硬化相似,模型建立成功。Western blot检测结果显示,正常鼠与模型鼠海马的β-catenin表达无差异。免疫组织化学和免疫荧光检测结果发现,海马硬化患者的星型胶质细胞明显增多,β-catenin的表达量在非海马硬化颞叶癫痫和海马硬化颞叶癫痫患者间不存在差异。结论β-catenin可能未参与内侧颞叶癫痫海马硬化的形成过程。

生长相关蛋白-43在内侧颞叶癫痫小鼠模型海马中的表达

目的研究癫痫发生不同时期生长相关蛋白-43(GAP-43)及其磷酸化形式(p-GAP-43)在海马齿状回中表达的时空分布情况。方法构建海人酸(KA)诱导的内侧颞叶癫痫(MTLE)模型小鼠,采用免疫组织化学、Western blot技术检测GAP-43与p-GAP-43在模型鼠癫痫发生不同时期(5d,2、5周)海马齿状回中的表达变化。结果 GAP-43在正常对照鼠及模型鼠的齿状回、门区和海马内分子层均有较高表达。与对照组相比,p-GAP-43在KA诱导癫痫发作后的5d,2、5周3个时间点的表达水平逐步下降。结论活性形式磷酸化的GAP-43在齿状回颗粒细胞中的表达水平随着癫痫发作时间的推移逐步降低,可能与硬化海马的轴树突异常重组过程相关。

构建海人酸诱导的内侧颞叶癫痫小鼠模型

目的建立C57BL/6颞叶癫痫小鼠模型,观察其在行为学和病理学上的变化。方法将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、0.9%氯化钠注射组(35μL/g)和海人酸注射组(12 mg/kg),进行单侧海马注射。注射5 d或5周后,取小鼠脑进行HE染色,观察海马病理结构改变;检测海马组织中mTOR通路标志物P-S6蛋白质表达量的改变。结果 (1)海人酸注射小鼠发生面部抽搐、双侧前肢痉挛等急性期癫痫持续发作和慢性期自发发作;(2)海马注射侧CA1、CA3神经元明显丢失,慢性期小鼠模型出现中齿状回颗粒细胞散布,符合海马硬化特征性病理改变;(3)小鼠海马组织中P-S6蛋白质的表达量在急性期(P<0.05)和慢性期(P<0.01)均上调。结论单侧海马注射海人酸可成功建立C57BL/6小鼠内侧颞叶癫痫模型,可观察到与内侧颞叶癫痫临床表现类似的行为学、组织病理学上的改变。

CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白与钙联蛋白在内侧颞叶癫痫模型小鼠海马中的表达

目的观察CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及钙联蛋白(CNX)在内侧颞叶癫痫小鼠海马区域中表达的时间和空间分布。方法采用海人酸(KA)诱导内侧颞叶癫痫小鼠模型,免疫印迹和免疫荧光技术检测CHOP和CNX在急性期(12、24 h)小鼠海马CA3区的表达量及分布差异,并与注射PBS的正常小鼠进行对照。结果免疫印迹检测结果显示,KA注射后12 h小鼠海马中的CHOP(F=1.136,P=0.4069)和CNX表达量(F=2.378,P=0.2087)与对照组差异没有统计学意义,KA注射后24 h注射侧海马中的CHOP(F=8.510,P=0.0362)和CNX表达量(F=6.968,P=0.0497)明显高于对照组。免疫荧光结果显示,KA注射后12 h CHOP的表达主要集中于CA3区,注射后24 h在CA1和CA3区表达水平均升高;KA注射后24 h CHOP蛋白(F=24.480,P=0.0057)和CNX蛋白(F=7.149,P=0.0478)的表达量显著高于对照组。结论伴随着癫痫发作的产生,CHOP蛋白表达量上升,提示神经元内质网应激水平不断增加,可能需要更多CNX作为分子伴侣帮助更多未折叠蛋白完成折叠过程。

小RNA分子研究进展

在过去很长的一段时间内,RNA始终没有得到科学家足够的重视,直到非编码性小RNA(non-coding small RNA)的出现,使得研究者对RNA功能的传统观念发生了惊人的改变。生命体内存在着大量的miRNA、siRNA与piRNA,它们在不同水平上调节着基因的表达,影响生命活动。另外一些较长的非编码RNA广泛地参与到细胞内不同的生化过程中,发挥重要作用。随着小分子RNA的发现至今,RNA的研究领域进入炙手可热的状态,RNAi的机制在一步步被完善与深化,更多新类型的小分子RNA被发现。在应用方面,siRNA已经成为分子生物学实验中一种简单而有效的基因沉默工具,并且在人类疾病治疗方面初有成效。

散发型克雅病脑脊液tau蛋白的改变

目的探索脑脊液标志物,尤其是总tau蛋白(T-tau)及磷酸化tau蛋白(P-tau)对Creutzfeldt-Jakob病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD)的诊断与鉴别诊断价值。方法按2009年Brain标准及2018年Neurology改良版标准选取2018—2019年北京协和医院脑脊液生物标志物研究队列中的散发性CJD(sporadic CJD,sCJD)患者。按2011年美国国立老化研究所与阿尔茨海默病(AD)协会标准选择年龄、性别相对匹配的AD患者以及认知功能正常的其他神经系统疾病患者作为对照病例,应用其脑脊液标本进行分组对照研究。共收集了12例sCJD患者入组,同时收集49例AD患者以及14名认知正常者入对照组。所有脑脊液标本均为腰椎穿刺时直接滴落收集,-80℃保存,由专门实验室及指定实验员进行T-tau蛋白、P-tau蛋白测定。同时收集sCJD患者影像学及脑电图资料,并按规定将sCJD病例报送中国疾病预防控制中心,检测14-3-3蛋白及相关的基因。结果通过非参数秩和检验对比3组人群脑脊液tau蛋白含量,结果显示sCJD组T-tau水平达1211(448,2227)pg/ml,AD组T-tau水平达549(314,1078)pg/ml,均显著高于对照组[127(79,192)pg/ml,U=20、73,P<0.01]。sCJD组的T-tau蛋白水平升高更明显,显著高于AD患者(U=178,P=0.0349)。在AD患者中,P-tau水平达72(58,109)pg/ml,较对照组[27(15,42)pg/ml]显著升高(U=82,P<0.01),但在sCJD患者[32(24,47)pg/ml]无明显升高。sCJD患者的T-tau/P-tau比值[29.77(20.01,54.53)]高于AD[7.45(4.79,10.43);U=87,P<0.01]。12例sCJD头颅MRI均存在"花边征",5例存在脑电图三相波改变。9例sCJD患者被上报至中国疾病防治中心,其中4例14-3-3蛋白阳性;9例朊蛋白PRNP基因均无突变,129位密码子均为M/M型,219位密码子均为E/E型。结论sCJD患者脑脊液tau蛋白、T-tau/P-tau显著增高,对于sCJD的诊断及鉴别具有一定价值。

以失用症为突出表现的克雅病一例

分析1例2020年8月在中国医学科学院北京协和医院神经科住院的克雅病患者的临床表现和检查结果,并对其进行全面的神经心理学评估和失用相关评估。该患者为65岁男性,隐匿起病,症状逐渐进展,临床表现为失用症、快速进展的痴呆和锥体外系症状,头颅磁共振成像提示双侧大脑半球"花边征",脑脊液14-3-3蛋白阳性,符合很可能克雅病的诊断标准,其失用症为典型的观念运动性失用。经复习文献,发现失用也可以是克雅病的主要神经心理损害表现,临床诊治中需要重视失用症的规范和正确评价、及时识别。