基于《中华医典》文献挖掘中医治疗积聚的用药规律研究

目的:探讨《中华医典》中治疗积聚方剂的用药特点及其规律。方法:检索《中华医典》治疗积聚的方剂,按照纳入和排除标准筛选治疗积聚的方剂,建立Excel数据库,进行用药频次、性味、归经分析。并使用R语言arules包及arulesViz包对筛选处方中的药物进行关联规则分析及可视化,使用IBM SPSS Modeler 18.0对药物进行复杂网络分析,采用SPSS Statistics 26.0对聚类方剂进行分析。结果:筛选后共纳入方剂426首,包含中药303种,总用药频次4075次;四气9种,总频次3214次;五味8种,总频次5490次;十二经总频次11936次。治疗积聚应用频次较高的药物前3位为木香、肉桂、当归;关联性药对以三棱、木香出现频次最高。复杂网络分析,木香-肉桂、木香-三棱之间的关联性较强。聚类图谱显示,皮尔逊相关性为20时,高频药物可聚为5类。结论:历代医家在积聚治疗时,所用药物药性以温性为主,药味以辛味和苦味为主,归经侧重于脾胃经,功效以理气药、温里药、补益药为主。通过对《中华医典》中治疗积聚的用药规律研究,为临床实践中药治疗积聚相关疾病提供参考。

基于数据挖掘的《中华医典》中胁痛的组方用药规律研究

目的探析《中华医典》所载的治疗胁痛处方的用药规律。方法收集《中华医典》中治疗胁痛的处方,利用Excel(Microsoft Office 2019)录入处方数据及药物信息,对药物功效、四气五味、归经等进行频次统计。用SPSS Modeler 18.0及Cytoscape 3.9.1统计药物共现频次并进行可视化网络展示。用R语言arules包及arules Viz包对筛选处方中的药物进行关联规则分析及可视化,使用SPSS Statistics 19.0对高频药物进行聚类分析。结果共筛选出359首有效处方,使用中药240味,总用药频次3032次,核心药物有当归、甘草、白芍、柴胡、青皮、陈皮等,主要以补虚、理气、活血化瘀药三类药物为主。药物四气以温性为主,药物五味偏辛、苦、甘味,归经主要以脾、肝、肺、胃、心经为主。关联规则分析得到药物关联规则15组,以半夏,生姜与甘草的置信度最高,15组药物关联规则组合功效主要以补气、养血、行气、化瘀、除湿热为主。高频药物可以聚为5类,以疏肝解郁、清热燥湿、行气止痛、活血化瘀为主。结论《中华医典》记载治疗胁痛处方呈现以疏肝行气、活血化瘀、柔肝止痛、化痰燥湿、扶正补虚为主的组方规律,与胁痛的核心病机相符,为临床中医治疗胁痛提供参考。

基于网络药理学研究一贯煎治疗肝纤维化的有效成分及作用机制

背景中药复方具有多成分综合调节的特点,在肝纤维化防治中显示出独特的优势.一贯煎始载于魏之琇所著《续名医类案》,是滋阴疏肝的著名方剂,能够改善肝纤维化症状,研究其抗肝纤维化机制有助于药物开发和推广.目的通过网络药理学探究一贯煎治疗肝纤维化的机制并实验验证.方法利用文献和TCMSP数据库收集一贯煎成分及靶点,GeneCard、OMIM数据库收集肝纤维化疾病靶点.通过STRING数据库构建一贯煎-肝纤维化蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI)子网络,应用重启随机游走算法获得关键基因,通过DAVID数据库进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析及京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析.动物实验验证,18只SD大鼠随机分为正常组、模型组、一贯煎组.模型组、一贯煎组大鼠采用腹腔注射50%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))橄榄油溶液造模6周,正常组注射等量橄榄油.造模结束后一贯煎组每天灌胃一贯煎溶液(6.67 g/kg)共4 wk,其他组灌胃等量蒸馏水,取血和肝脏.全自动生化仪检测血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST).HE、Masoon染色观察肝脏病理学变化.Western blot法和qRT-PCR法检测肝脏关键蛋白表达水平和mRNA转录水平.结果筛选得到一贯煎成分52个,潜在作用靶点186个,肝纤维化疾病靶点1080个,得到一贯煎治疗肝纤维化的关键基因,其中亲和度前10的基因为STAT6、SRC、MAPK3、STX1A、EP300、STAT3、PLG、CTNNB1、CDKN1B、CANX,亲和度前50的基因KEGG富集得到PI3K-Akt信号通路、FoxO信号通路等134条.动物实验结果发现,一贯煎能够改善CCL4肝纤维化大鼠肝功能和减轻纤维化,降低α-肌动蛋白表达,促进信号转导和转录激活因子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)磷酸化,提高过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator activated receptor-γ,PPAR-γ)、白细胞分化抗原163(cluster of differentiation 163,CD163)蛋白表达和精氨酸酶1、白细胞分化抗原206、CD163mRNA转录水平,降低白细胞介素6的mRNA转录水平.结论一贯煎治疗肝纤维化作用涉及多个成分、多条信号通路,其中包括STAT6/PPAR-γ通路.

脂肪因子visfatin的调节与功能多样性

内脏脂肪素(visfatin)是一种由内脏脂肪细胞分泌的分子质量为52ku的蛋白质细胞因子.基因序列分析显示其cDNA编码序列与前B细胞集落增强因子(PBEF)同源且在进化中高度保守.Visfatin被发现具有多种迥然不同的生物活性:通过与胰岛素受体相互作用,在不同的情况下visfatin可表现出类胰岛素或抗胰岛素样作用;在细胞质中,visfatin具有烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)活性,能够催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的生物合成;作为分泌型的细胞因子,visfatin还可以诱导多种炎性因子的表达,如TNFα、IL-1β和IL-6.Visfatin与一些代谢疾病和急、慢性炎性疾病的关系日益受到重视,如糖尿病、肥胖、急性肺损伤、类风湿性关节炎、败血症、心肌梗塞和炎性肠病等.最近,对visfatin的启动子区及其单核苷酸多态性(SNP)的研究,进一步深化了人们对其在疾病发病机制中作用的认识.重点讨论visfatin的结构、功能多态性以及它与多种疾病的关系.

嗜铬颗粒蛋白B-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建小鼠嗜铬颗粒蛋白B(chromogranin B,CgB)重组原核表达载体。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出CgB基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中进行表达。结果表达产物经Western Blot分析,在140处有一明显特异带,与预期结果相符。结论构建重组融合表达载体pGEX-CgB,在原核细胞中成功表达出小鼠CgB-GST融合蛋白。

嗜铬颗粒蛋白B与热休克同源蛋白70相互作用的研究

目的分离和鉴别在肾上腺髓质嗜铬颗粒细胞分泌囊泡中,与嗜铬颗粒蛋白B(CgB)相互作用的蛋白质。方法采用蛋白质捕获、免疫共沉淀和质谱等技术进行研究。结果在嗜铬颗粒细胞内,CgB与热休克同源蛋白70(Hsc70)相互作用。一个Hsc70结合序列定位在CgB的羧基末端区(Ser586-Arg602,SR-17),而且SR-17内的Ser595磷酸化可增强其与Hsc70结合。磷酸化修饰的SR-17可从ATP-Sepharose上洗脱Hsc70。用免疫印迹和免疫组化方法可证实CgB和Hsc70均存在于嗜铬颗粒细胞的胞质和细胞核中。结论Hsc70可能参与CgB的细胞核转位过程。

HSP70-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建小鼠热休克蛋白70(HSP70)重组原核表达质粒,获取小鼠HSP70-GST融合蛋白。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出HSP70基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD—Tvector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1 中进行表达。结果表达产物经Western Blot分析,在109 KD处有一明显特异带,与预期结果相符。结论构建重组融合表达载体pGEX—HSP70,用基因工程的方法在原核细胞中成功表达出小鼠 HSP70-GST融合蛋白。

基于云计算的医学教育模式的探讨

现在医学的教育模式仍然是以教师为中心的传统教育模式,学生被动的学习知识,学生们的思维受到很大限制,教学效果不太乐观。但是云计算的出现将会改变这种情形。根据云计算原理和特点,探讨了云计算下的医学教育模式。云计算将以学生为学习的主体,极大的调动学生学习的积极性,摆脱应试教育的枷锁。

心钠素及内皮素对心肌细胞肥大及心脏成纤维细胞增殖的影响

目的观察心钠素(ANP)、内皮素-1(ET-1)对心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖的调节作用。方法采用体外乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞培养,一定浓度的ET-1、ANP单独或联合作用细胞24h,以3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法测定细胞DNA、蛋白合成,Brad-ford法测细胞总蛋白含量,RT-PCR法测心肌细胞心钠素ANPmRNA的表达,评价ET-1、ANP对心肌细胞和成纤维细胞的作用。结果对于心肌细胞,ET-1显著促进3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,呈剂量依赖性,ANPmRNA表达明显增加;对于心脏成纤维细胞,ET-1促进3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,以上作用可被ANP明显抑制。结论ET-1促进ANP分泌的同时也促进心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖,ANP反之抑制ET-1的促心肌肥厚作用。

一贯煎促进骨髓间充质干细胞逆转肝纤维化的实验研究

目的该研究观察骨髓间充质干细胞对肝纤维化的逆转作用,了解一贯煎对该过程的作用,阐释一贯煎逆转肝纤维化的机制。方法 60只雄性Sprague-Dawlay大鼠随机分为5组,即正常对照组、模型组、阳性对照组、骨髓间充质干细胞组、一贯煎加骨髓间充质干细胞组,每组12只。除正常对照组外,均建立肝纤维化恢复模型,分离、培养和标记骨髓间充质干细胞,在CCl4停止注射后3天,骨髓间充质干细胞组每只动物经尾静脉注射5×106mmol/L浓度1 mol骨髓间充质干细胞;一贯煎加骨髓间充质干细胞组每只大鼠尾静脉注射等量的骨髓间充质干细胞外,给予一贯煎浓缩液2 ml/200 g灌胃,每天1次。阳性对照组给予秋水仙碱灌胃,0.25 mg/kg,每天1次。正常对照组和模型组按相同方法灌服等量生理盐水。阳性对照组、正常对照组和模型组经尾静脉注射等量生理盐水。4周后,检测各组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶等肝功能指标;通过HE染色评价肝脏炎症活动度(G)和纤维化程度(S);荧光显微镜下示踪肝组织中骨髓间充质干细胞。结果 (1)骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组较模型组和阳性组在改善肝功能、减轻炎症、逆转肝纤维化的作用较好,P<0.05。一贯煎加骨髓间充质干细胞组较骨髓间充质干细胞组在改善肝功能、逆转纤维化的作用更明显,P<0.05。(2)骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组骨髓间充质干细胞在肝脏分布面积较模型组增大,P<0.05;一贯煎加骨髓间充质干细胞组较其他组差异显著,P<0.05。结论骨髓间充质干细胞具有逆转肝纤维化的作用,一贯煎对该过程具有促进作用;一贯煎能够促进骨髓间充质干细胞募集到肝脏,从而发挥逆转肝纤维化的作用。

肝纤维化大鼠阴虚证表征的观察及一贯煎的干预作用

目的检测肝纤维化大鼠的阴虚证表征,观察滋补肝肾中药一贯煎对阴虚证表征的影响。方法将48只雄性Sprague-Dawlay大鼠随机分为4组,正常对照组、模型组、阳性对照组、一贯煎组,每组12只。除正常对照组外,均建立CCl4致肝纤维化大鼠模型,在CCl4停止注射后3 d,一贯煎组每只动物给予相应浓度的一贯煎浓缩液2 m L/200 g灌胃,1次/d。阳性对照组给予秋水仙碱灌胃,0.25 mg/kg,1次/d。正常对照组和模型组按相同方法灌服等量生理盐水。4周后,检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)等肝功能指标;通过HE染色评价肝脏炎症活动度(G)和纤维化程度(S);检测大鼠体重、舌面干湿度、舌面温度、舌微循环血流速度、饮水、大小便等阴虚证表征。结果 1一贯煎在改善肝功能、减轻炎症、抗肝纤维化方面作用较好:一贯煎组ALT[(41.66±3.72)U]较模型组[(61.00±0.00)U]降低,差异有统计学意义(P<0.05);一贯煎组AST[(146.03±46.41)U]较模型组[(218.90±12.56)U]降低,差异有统计学意义(P<0.05);一贯煎组炎症活动度[(1.00±0.00)]较模型组[(3.00±0.00)]降低,差异有统计学意义(P<0.05);一贯煎组纤维化程度[(1.00±0.00)]较模型组[(2.00±0.00)]降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2肝纤维化大鼠具有阴虚证的表征,一贯煎能够改善阴虚证的症状。体重:模型组的体重[(380.66±37.29)g]较正常对照组[(507.00±17.69)g]减少(P<0.05);一贯煎组体重[(473.66±13.86)g]较模型组增高(P<0.05)。舌面干湿度:模型组的舌面干湿度[(0.000 36±0.000 28)g]较正常对照组[(0.007 32±0.001 26)g]减少(P<0.05);一贯煎组舌面干湿度[(0.012 83±0.005 85)g]较模型组增高(P<0.05)。舌面温度:模型组的舌温度[(34.48±1.24)℃]较正常对照组[(30.63±0.80)℃]增高(P<0.05);一贯煎组舌温度[(31.40±2.10)℃]较模型组降低(P<0.05)。舌血流速度:模型组的舌血流速度[(69.78±21.44)AU]较正常对照组[(31.43±1.58)AU]增高(P<0.05);一贯煎组舌血流速度[(40.50±3.89)AU]较模型组降低(P<0.05)。饮水:模型组饮水量[(37.52±10.46)m L]较正常对照组[(59.65±6.05)m L]显著减少(P<0.05);一贯煎组饮水量[(53.69±8.74)m L]较模型组显著增多(P<0.05)。大便:模型组大便[(1.00±0.00)分]较正常对照组[(2.00±0.00)分]分值减少(P<0.05);一贯煎组大便[(2.00±0.00)分]较模型组分值增多(P<0.05)。小便:模型组小便[(2.00±0.00)分]较正常对照组[(1.00±0.00)分]分值增高(P<0.05);一贯煎组小便[(1.33±0.57)分]较模型组分值减少(P<0.05)。结论肝纤维化大鼠具有阴虚证的特点,滋补肝肾中药一贯煎不仅能改善肝纤维化大鼠的病理,还能改善阴虚证的症状。该研究为肝纤维化大鼠阴虚证的诊断和药理机制的研究提供了新的思路。

缺血后处置缓解离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的观察缺血后处置对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法复制离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型及缺血后处置模型。记录±dp/dtmax和LVEDP。用比色法检测灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot方法检测心脏eNOS及ERK1/2的表达,RT-PCR方法测定心脏细胞色素P4502J3(CYP2J3)mRNA表达。结果与缺血/再灌注组(IR)相比,缺血后处置组(IPo)±dp/dtmax均增高(P<0.01),而LVEDP、LDH降低(P<0.05);IR组MDA水平高于对照组(CON)及IPo组(P<0.01),SOD活性低于IPo组(P<0.01);IR组大鼠心肌eNOS及磷酸化ERK1/2的表达均高于CON组和IPo组;IPo组大鼠心脏CYP2J3 mRNA的表达明显高于CON组和IR组。结论缺血后处置可能通过提高再灌注心肌SOD活性,增加氧自由基清除,而改善缺血/再灌注引起的心功能障碍及细胞损伤;CYP2J3/EET系统有可能参与其保护作用。

四氯化碳性肝损伤小型猪肝脏微循环与舌色关系的研究

目的:研究四氯化碳性肝损伤小型猪肝脏微循环和舌色的关系,以阐释舌色在肝损伤疾病中的诊断意义。方法:6只中国实验用小型猪,雌雄各半,随机分为两组(每组3只):正常组、模型组,模型组动物按1mg/kg的剂量用CCl4原液一次性腹腔内注射,复制CCl4急性肝损伤模型。正常组动物给予等量生理盐水。动物禁食,但可自由饮水,20h后使用2.5%戊巴比妥钠9mL;速眠新3.0进行动物麻醉,拍摄舌象,使用激光多普勒血流仪进行舌和肝脏微血管血流检测,前腔静脉采血,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、天门冬氨酸氨基转移酶与丙氨酸氨基转移酶比值(AST/ALT)、总胆红素(Tbil)、直接胆红素(Dbil);HE染色观察肝组织病理变化。结果:四氯化碳性肝损伤小型猪符合急性肝损伤的病理特点。该模型舌色表现黯红色,其形成机制与微循环障碍有关。四氯化碳性肝损伤模型存在肝脏和舌的微循环障碍,通过舌色可间接了解肝脏微循环情况。结论:四氯化碳性肝损伤小型猪的舌色呈黯红色,其形成机制与微循环障碍有关,可间接反应该病肝脏微循环状况。

HBV转基因小鼠的舌色改变及血流变化

目的:研究HBV转基因小鼠的舌色表现和微血管血流变化.方法:10只C57BL/6J-HBV转基因小鼠和10只正常小鼠(C57BL/6J非转基因小鼠),均雌雄各半,采用小鼠舌象观察装置对小鼠舌色进行观察;使用激光多普勒血流仪进行舌和肝脏微血管血流检测;断头采血,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;HE染色观察肝和舌组织病理变化.结果:HBV转基因小鼠中,6只小鼠舌色呈紫色,4只舌色呈暗红色,而正常小鼠的舌色均为淡红色.HBV转基因小鼠舌色色调(H值)变深,有显著性差异(P<0.01);舌色亮度(V值)变弱,有极显著性差异(P<0.001).和正常鼠相比,紫舌HBV转基因小鼠微血管血流灌注量和血流速度显著降低(0.206±0.13vs0.794±0.13;0.479±0.07vs0.331±0.04,P<0.01,P<0.001),该模型肝脏微血管血流灌注量和血流速度显著降低,HBV转基因小鼠肝脏和舌存在明显的炎性改变.结论:HBV转基因小鼠舌色以紫色多见,其形成机制与微循环障碍有关.该模型存在肝脏和舌的炎症病理,提示炎性微环境是形成其肝脏和舌微循环障碍的重要原因.

pcDNA3.1(+)-CYP2J3真核表达载体的构建及在大鼠心肌细胞的表达

目的克隆大鼠CYP2J3基因,与pcDNA3.1(+)真核表达质粒载体连接,转染大鼠心肌细胞检测其表达。方法提取大鼠肝脏组织总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和重叠延伸聚合酶链式反应(OE-PCR)的方法扩增大鼠CYP2J3基因,与双酶切的pcDNA3.1(+)连接,构建pcDNA3.1(+)-CYP2J3真核表达载体。转染大鼠心肌细胞,用RT-PCR的方法鉴定其在大鼠心肌细胞的表达。结果得到CYP2J3基因全长序列和真核表达载体pcDNA3.1(+)-CYP2J3。RT-PCR结果显示,转染pcDNA3.1(+)-CYP2J3后的大鼠心肌细胞CYP2J3基因有稳定表达。结论克隆大鼠CYP2J3基因、pcDNA3.1(+)-CYP2J3真核表达载体构建及在大鼠心肌细胞的表达均获成功,为进一步研究CYP2J3基因在细胞中的功能奠定了基础。

基础专业课培养研究生科研创新能力探讨

创新能力培养是研究生科研能力培养的关键环节。文章旨在从研究生专业课教学课程改革入手,融入科研创新性培养内容,如进行科研课题综述、设计和解析高水平研究论文的创新点,使课堂呈现科研的创新氛围,以培养学生的创新意识。

一种抑制蛋白激酶CK_2活性的新多肽的分离和鉴别

从猪肾上腺髓质嗜铬细胞分泌颗粒裂解物中纯化出 3种新多肽 ,经N 末端降解分析和质谱测定 ,它们分别位于猪嗜铬颗粒蛋白A(CgA) 3 0 8— 3 2 4、3 0 8— 3 2 8及 3 0 8— 3 2 9肽段 ,具有相同N 端区 ,而C 端长度不同。合成的CgA 3 0 8— 3 2 4肽段 ,即GN 1 7在浓度低于 6μmol/L时即可竞争性抑制CK2 活性 ,IC50 为 5 0 μmol/L。

大鼠脑RC3基因的cDNA克隆及序列分析

目的 :为研究脑特异性基因 -RC3的功能 ,克隆该基因的cDNA。方法 :以大鼠脑为材料提取总RNA并分离纯化poly(A)+RNA ,用作模板以嵌套式逆转录PCR方法克隆RC3cDNA ,并将其重组入pUC18质粒 ,然后用双脱氧末端终止法进行碱基序列分析。结果 :大鼠脑RC3cDNA序列有一个碱基差别 ,但不涉及氨基酸的改变。结论 :为进一步研究RC3的功能提供了实验基础。

中医药专业医学分子生物学教学方法的探索与实践

医学分子生物学是一门基础医学理论课,根据中医药的学科特点和培养要求,优化教学内容,采取互动式教学激发学生自主学习能力,充分利用丰富教学资源,调动学生学习积极性,教学效果得到明显改善。