甲嘎松汤调控Nrf2,Bach1表达保护氧化应激肝细胞

目的:研究甲嘎松汤对氧化应激损伤L-02的影响,并从Nrf2/Bach1-ARE抗氧化酶途径研究其抗氧化的机制。方法:MTT法评价建立葡萄糖氧化酶肝损伤细胞模型的方法。实验共分9组,分别为空白组,模型组,20%甲嘎松汤含药血清组,5μmol·L-1全反式视黄酸(ATRA)组,80μmol·L-1染料木黄铜(Genstein)组,80μmol·L-1叔丁基对苯二酚(t-BHQ)组,t-BHQ+20%甲嘎松汤含药血清组,ATRA+20%甲嘎松汤含药血清组,Genstein+20%甲嘎松汤含药血清组,以正常培养液或含t-BHQ,ATRA,Genistein的培养液干预L-02细胞12 h,再用20%甲嘎松汤含药血清培养液预保护12 h,最后采用100 U·L-1葡萄糖氧化酶制备氧化损伤模型。MTT法测定细胞活性,测定培养上清的丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,丙二醛(MDA)含量,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,利用免疫荧光法和Western blot法观察细胞内核因子相关因子(Nrf2)和转录因子BTB-CNC异体同源体(Bach1)的分布及核内两者的表达量。结果:与空白组比较,模型组ALT,AST活性及MDA含量明显升高,GSH-Px活性明显降低(P<0.01),细胞核内Nrf2及Bach1的表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,甲嘎松汤能升高氧化损伤以及3种干预剂下的细胞活性和GSH-Px活性,降低ALT,AST活性及MDA含量(P<0.05,P<0.01);可协同t-BHQ升高核内Nrf2表达,抑制ATRA降低核内Nrf2表达,抑制Genistein升高核内Nrf2表达,均具有统计学差异(P<0.01);在3种干预剂作用下,甲嘎松汤可促进Bach1出核(P<0.01)。结论:甲嘎松汤可保护葡萄糖氧化酶诱导氧化应激损伤肝细胞,其抗氧化保肝作用与调节Nrf2与Bach1表位位置以及核内蛋白水平有关。