BMP7修饰的骨髓基质干细胞修复羊股骨缺损的实验研究

目的观察用BMP7修饰前后的骨髓基质干细胞修复羊股骨缺损效果的差异,探讨用组织工程与基因工程相结合的方法修复长骨缺损,为临床研究打下基础。方法分别用含有地塞米松(10～8M,Sigma)、β-磷酸甘油钠(10mM,Sigma)的DMEM培养的骨髓基质干细胞(组1,n=7)和Adeno-BMP7转染的骨髓基质干细胞(组2,n=7)与珊瑚复合,再分别用于修复股骨缺损,通过不同时间点的X线观察、组织学观察和灰度分析来评价骨缺损的程度。结果组1X片显示4月前新生骨密度逐渐增高;八月时,骨缺损处新生骨转化为新生皮质骨。组2X片显示在3月前就有大量新生骨形成,新生皮质骨形成时间明显早于组1。由于组2新生骨形成的体积较大,X片灰度分析与组1相比并没有显著性差异。结论两种方法都能修复羊股骨缺损。BMP7局部基因转染的方法有利于骨组织再生。

复合胶原酶消化法制备高纯度小鼠雪旺细胞

目的建立高效、快速获得大量高纯度雪旺细胞的方法,为组织工程神经构建提供优质、足量的种子细胞。方法取新生6-7 d的小鼠.在解剖显微镜下分离双侧坐骨神经,0.25%复合胶原酶37%消化90 min,然后将细胞悬液接种于预先用层粘蛋白铺盘的培养瓶.贴壁培养48 h后,0.05%复合胶原酶37℃消化30 min,振荡分离雪旺细胞与成纤维细胞。经过两次纯化后.运用免疫细胞化学和流式细胞仪检测所得的雪旺细胞的纯度。结果经过两次纯化后,P75^(NTR)免疫细胞化学及流式细胞仪检测证实.通过本方法可获得纯度为99%以上的雪旺细胞,每个25 cm^2培养瓶可获得(102.8±5.9)×10~4个细胞。结论复合胶原酶差速消化法是一种高效、快捷的雪旺细胞纯化方法,仅需5 d即可制备高纯度的雪旺细胞。