大鼠骨髓源性内皮祖细胞的分离培养与鉴定

背景:内皮祖细胞因其分离与培养的方法各不相同,在实验中难以重复。目的:探讨大量获取骨髓源性内皮祖细胞分离与培养的方法。方法:通过密度梯度离心法从4周龄SD大鼠骨髓中分离单个核细胞,使用EGM-2 MV培养基进行诱导培养,采用形态学特征观察、摄取Dil-Ac-LDL与结合FITC-UEA-1实验、免疫荧光化学鉴定其表面抗原CD133与VEGFR2等方法对其进行鉴定,并通过管腔形成实验观察形成管腔的能力。结果与结论:①形态学观察:分离的骨髓单个核细胞经诱导培养后,在生长的早期(8d左右)、晚期(15d左右)其细胞形态有一定差异,早期以纺锤形、三角形、圆形细胞多见,晚期以圆形、短梭形细胞多见。②摄取Dil-Ac-LDL与结合FITC-UEA-1实验:显示8,21d的细胞均为阳性。③免疫荧光化学染色:8d的细胞表达CD133、VEGFR2。④管腔形成实验:在Matrigel基质上15h左右能够生成血管样结构。结果表明:利用密度梯度离心法分离大鼠骨髓单个核细胞后以EGM-2MV进行诱导培养,经过鉴定证明获得的细胞符合内皮祖细胞的特征。这种方法能够简单、快速、可靠、大量地获取内皮祖细胞。

电针血清对大鼠骨髓源性内皮祖细胞增殖、迁移、黏附功能的影响

目的:探讨大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)的培养与鉴定方法,以及电针血清对其增殖、迁移、黏附等功能的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组,后两组制造脑缺血再灌注模型后分别不治疗和采用电针治疗,48h后获取各组血清。将不同处理组的血清加至体外分离、培养、鉴定过的SD大鼠骨髓来源的EPCs,设对照组,分别采用MTT法、迁移实验、黏附实验观察电针血清对EPCs增殖、迁移、黏附能力的影响。结果:电针组EPCs在增殖能力方面OD值为(0.380±0.052),迁移细胞数为(46.00±1.32),黏附细胞数为(44.67±1.53)。与对照组相比,正常组、模型组、电针组增值、迁移、黏附能力均明显增强(P<0.05,P<0.01);与正常组相比,电针组与模型组增殖、迁移、黏附能力均显著增强(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,电针组在增殖能力方面无明显差异,但迁移、黏附能力显著增强(P<0.01)。结论:电针血清能明显提高EPCs的增殖、迁移、黏附能力。