特异标记生血内皮的诱导性多能干细胞系的构建

目的:拟将造血干细胞生血内皮特异的Neurl3-EGFP荧光报告小鼠来源的胚胎成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞。方法:通过导入3个经典转录因子(Oct4、Sox2和Klf4),利用iCD1无血清培养液高效完成Neurl3-EGFP荧光报告小鼠胚胎成纤维细胞的重编程,并完成各项多能性鉴定。结果:Neurl3-EGFP荧光报告小鼠胚胎成纤维细胞来源的诱导性多能干细胞在细胞形态学与多能性基因的表达方面均与小鼠胚胎干细胞类似。结论:利用Oct4、Sox2和Klf43个转录因子的共感染,将Neurl3-EGFP荧光报告小鼠的胚胎成纤维细胞成功重编程为具有全能性的可特异标记生血内皮的诱导性多能干细胞。

子午流注穴位按摩联合果胶治疗肠内营养相关性腹泻临床研究

目的:观察子午流注穴位按摩联合果胶治疗肠内营养相关性腹泻的临床疗效。方法:选取80例重症监护室(ICU)行肠内营养治疗患者,按随机数字表法分为治疗组和对照组,每组40例。对照组肠内营养前经胃管注入为舒能果胶,治疗组在对照组基础上予以子午流注穴位按摩,2组均治疗7 d。比较2组临床疗效、止泻时间、肠内营养治疗时间及ICU住院时间;比较2组治疗第1天及治疗后肠内营养耐受性评分;比较2组治疗前后24 h大便半定量评分(Hart评分)、腹泻症状积分及胃肠道生活质量指数(GIQLI)。结果:治疗组总有效率为95.00%,高于对照组的80.00%(P<0.05)。治疗组止泻时间短于对照组(P<0.05)。治疗后,2组肠内营养耐受性评分均较治疗第1天降低,Hart评分均较治疗前降低(P<0.05);治疗组肠内营养耐受性评分、Hart评分均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组腹泻症状积分均较治疗前降低(P<0.05),GIQLI评分均较治疗前升高(P<0.05);治疗组腹泻症状积分低于对照组(P<0.05),GIQLI评分高于对照组(P<0.05)。结论:子午流注穴位按摩联合果胶能够显著改善ICU肠内营养相关性腹泻患者的临床症状,缩短止泻时间,提高其肠内营养耐受性及生活质量。

体外诱导小鼠胚胎干细胞产生T谱系潜能造血祖细胞的关键步骤

目的:探索体外诱导小鼠胚胎干细胞(mESC)产生具有T淋巴谱系潜能造血祖细胞的关键步骤和操作技巧,进一步明晰及优化诱导策略,提高功能性血液细胞的体外再生效率。方法:将Runx1和Hoxa9串联重组质粒转染mESC产生iR9-mESC,体外依次诱导可先后产生拟胚体(EB)、诱导性生血内皮细胞(iHEC)、诱导性造血祖细胞(iHPC),随后移植免疫缺陷鼠可检测到受体小鼠中枢和周围淋巴器官中供体来源的T淋巴细胞。其中,在体外培养mESC,电转获得同源重组iR9-mESC,诱导分化形成EB、iHEC及其分选、流式检测和移植等步骤设置不同操作方法对照组。结果:体外培养iR9-mESC时,培养在小鼠胚胎成纤维细胞上比在明胶上更能维持mESC的多能性状态;电转时细胞量为1.2×10^6能保证电转后培养过程中单个克隆不融合,便于筛选鉴定目的克隆;用巴氏吸管轻柔吹打收集EB保证球状EB的完整性,可以提高诱导分化过程中形成iHEC的比例;分选前免疫磁珠富集CD31^+细胞,能提高目的细胞纯度,缩短分选时间,增加细胞活性;尾静脉移植可增加移植成功率和移植细胞数目的准确性。结论:mESC体外诱导分化产生T谱系潜能的造血祖细胞过程中,细胞培养浓度、操作方法细节、工具的使用、分选和移植方法的选择都会影响诱导过程中iHEC和造血祖细胞的含量和谱系特异性,需要针对各分化步骤和时间节点精准操作。