细胞培养液乳酸脱氢酶漏出率的比色测定及其应用

采用乳酸脱氢酶比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶的漏出率是一个稳定而实用的指标。本法既可客观衡量细胞的受损程度,也可进行药物干预的正确评价,也是进行药物筛选的一种有效方法。

新生大鼠大脑皮层神经细胞的体外原代培养

本文探讨了新生大鼠出生２４ｈ内大脑皮层神经细胞原代培养的方法，建立了稳定的神经细胞培养模型。通过光镜和细胞Ｎｉｓｓｌ染色、ＡＣｈＥ染色，对培养各阶段的神经细胞进行了观察，系统地描述了它们的生长发育过程和形态特征。本方法扩大了大脑皮层神经细胞培养材料的来源。另外，对培养方法的特点进行了讨论。

天麻素对体外模拟脑缺血损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用

目的:观察中药天麻素对培养的正常及缺血大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)的影响,以探讨天麻素对BMEC的作用。方法:采用体外培养的BMEC,模拟脑缺血损伤,观察天麻素对其活性、生存率和一氧化氮(NO)的影响。结果:缺血损伤模型BMEC活性及生存率较正常对照组明显降低;不同剂量天麻素对正常对照组BMEC活性、生存率及NO含量有升高趋势;正常对照组不同剂量天麻素BMEC活性较缺血损伤模型组活性有明显升高(P<0.05);天麻素高剂量可明显提高缺血损伤BMEC NO含量(P<0.05)。结论:天麻素各实验剂量可增强缺血损伤BMEC活力,提高受损内皮细胞(EC)的生存率;促使EC NO分泌增加。提示天麻素对体外培养的大鼠BMEC缺血损伤具有一定的保护作用。

鹌鹑高尿酸血症模型建立及菊苣提取物对其影响的实验研究

目的 :塑造与人类代谢类似的高尿酸血症动物模型 ,观察中药菊苣提取物对其影响。方法 :选择鹌鹑作为模型动物 ,以酵母食饵为造模剂 ,塑造高尿酸血症模型 ,动态检测鹌鹑血清尿酸等生化指标 ,观察菊苣提取物对该模型动物血清尿酸水平等的影响。结果 :饲酵母食饵 (15 g/kg) 7天 ,鹌鹑血清尿酸水平明显升高 ,持续 5周。菊苣提取物小剂量给药 7天可明显降低酵母诱发的鹌鹑血尿酸升高和对抗其一过性血糖的增高 ,给药 14天其作用优于阳性对照药苯溴马龙。结论 :(1)该模型是筛选防治高尿酸血症中药及研究其机制较理想的动物模型。 (2 )菊苣提取物有明显的降尿酸作用。 (3)造模机制和药物作用机理有待进一步深入研究。

糖皮质激素诱发的大鼠骨质疏松与骨中微量元素的关系

骨质疏松症是老年人常见的骨病之一，严重危害老年人的身体健康。钙、磷代谢与骨质疏松的关系已为大家所熟知，但骨中其他无机元素与骨质疏松的关系国内报导尚少。为了探讨骨中微量元素与骨质疏松的关系，我们建立了糖皮质激素性骨质疏松动物模型，观察了大鼠骨及血清中钙、磷及微量元素的变化。骨质疏松症大鼠骨中钙、磷含量较对照组明显降低（Ｐ＜０．０５），铜、钼、铬、硫等元素含量也有明显减少。骨中锰含量显著减少，骨盐的动员可能与锰的丢失密切相关，有学者认为锰在内分泌、神经、酶系统中发挥的作用与中医“肾”的功能类似，是中医“肾”的物质基础。骨质疏松症属中医“肾萎”的范畴，其病因为肾虚，本研究观察到的骨中钙、磷与锰的变化进一步证实了这一学说。

大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液对皮层神经元活性的影响以及通络救脑注射液的干预作用

目的:探讨脑微血管内皮细胞条件培养液对神经元活性的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法:制备正常、正常用药、拟缺血损伤、拟缺血损伤用药4种脑微血管内皮细胞条件培养液(N-CM、NT-CM、I-CM、IT-CM),分别作用于培养的皮层正常神经元和拟缺血损伤神经元,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率检测分析各个条件培养液对神经元活性的影响特征。结果:①N-CM对正常神经元无明显影响,但对拟缺血损伤的神经元表现出一定的保护作用,尤其是NT-CM可明显提高受损的神经元活性;②I-CM可降低正常神经元活性,对已受损的神经元则进一步加重损伤,IT-CM可明显改善这种损伤状态。结论:脑微血管内皮细胞的旁分泌作用可能在中枢系统缺血性损伤中起重要作用,有可能是不能透过血脑屏障的中药成分发挥治疗作用的靶点。

不同内皮细胞条件培养液对皮层神经元线粒体功能的影响及通络救脑注射液的保护作用

目的探讨脑微血管内皮细胞条件培养液对损伤神经元线粒体功能的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法制备(1)正常内皮细胞条件培养液(N-CM):正常培养的内皮细胞不作任何处理;(2)正常用药内皮细胞条件培养液(NT-CM):通络救脑注射液按1μl/ml浓度作用10h;(3)缺氧损伤内皮细胞条件培养液(I-CM);(4)缺氧损伤用药内皮细胞条件培养液(IT-CM):于损伤前4h,加入通络救脑注射液1μl/ml;分别作用于糖氧剥夺损伤的神经元模型,通过测定神经元线粒体活性、线粒体膜电位(MMP)及细胞色素C(CytC),分析各个条件培养液对损伤神经元线粒体功能的影响。结果(1)与模型组比较,N-CM组与NT-CM组(P<0.05)均可阻抑损伤神经元线粒体活性的下降,尤其是NT-CM保护作用更为明显。(2)与正常组比较,模型组MMP明显下降;I-CM使受损神经元的线粒体功能进一步下降;I-CM组可进一步降低受损神经元MMP,IT-CM可逆转神经元MMP下降,明显改善这种损伤状态。(3)N-CM组与NT-CM组均可降低损伤神经元的CytC释放,分别与模型组、I-CM组比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论脑微血管内皮细胞的旁分泌功能对损伤神经元的存活有重要的调节作用,该作用的实现可能与维持神经元线粒体功能有关,通络救脑注射液可促进该作用的发挥。

鹌鹑高血尿酸高甘油三酯血症模型塑造

目的和方法 :建立一种与人类代谢途径相似的高血尿酸并高甘油三酯血症动物模型。鹌鹑随机分为 3组 ,除空白对照组外 ,模型Ⅰ组以 15g·kg-1·d-1的酵母食饵喂饲鹌鹑 ,Ⅱ组以 10g·kg-1·d-1的酵母食饵喂饲鹌鹑 ,动态检测血清尿酸 (UA)、甘油三酯 (TG)、胆固醇 (TC)、尿素氮 (BUN)、血糖 (GLU)、黄嘌呤氧化酶 (XOD)含量。结果 :模型Ⅰ组 7d后血尿酸水平开始升高 ,第 2、3、4、5周血UA水平显著高于空白对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 5 ,P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;第 3周血TG水平显著高于空白对照组 ,持续至 5周 ,血BUN含量与空白对照组比差异不显著 ;GLU及TC可见一过性升高。模型Ⅱ组动物血UA水平亦于第 2周升高 ;TG于第 4周显著高于空白对照组 ,但持续时间短 ;血BUN于第 2周和第 3周显著高于空白组 (P <0 0 5 )。结论 :以 15g/kg酵母喂饲鹌鹑 ,可建立高血尿酸高甘油三酯模型 ,以进行尿酸与血脂代谢交互紊乱的药理与病理研究。

济川煎及其拆方对STC模型大鼠血清SP VIP水平的影响

目的:观察济川煎对慢传输型便秘模型大鼠血清SP、VIP水平的影响,探讨该方温肾润肠的作用机制及其组方配伍规律。方法:复制大鼠慢传输型便秘模型,检测济川煎及其拆方对模型大鼠粪便干、湿重和血清SP、VIP水平的影响。结果:与模型组相比,温肾润肠组粪便干湿比显著升高(P<0.01),其余各药物治疗组粪便干湿比显著降低(P<0.01)。济川煎及拆方各组血清SP升高,而VIP水平均显著低于模型对照组(P<0.01)。结论:济川煎及拆方各组可改善STC模型动物粪便性状,其作用机理与血清SP水平升高,以及异常升高的VIP的降低有关。

半夏泻心汤药物血清对ICC线粒体膜电位与[Ca^(2+)]i的影响

目的:观察半夏泻心汤对小鼠Cajal间质细胞(Interstitial Cells of Cajal,ICC)线粒体膜电位与细胞内Ca2+浓度的影响。方法:制备大鼠含半夏泻心汤药物血清,体外分离培养ICC,用药物血清处理ICC,作用24h后,采用ICC特异的c-kit抗体进行免疫荧光测定,利用激光共聚焦显微扫描技术和特异性荧光探针标记线粒体膜电位及[Ca2+]i。结果:半夏泻心汤药物血清能提高ICC线粒体膜电位,降低ICC[Ca2+]i。结论:半夏泻心汤可能通过提高ICC线粒体膜电位,降低ICC[Ca2+]i以促进胃肠运动。

脑卒中后抑郁状态模型大鼠学习和记忆水平的Morris水迷宫测定

目的:观察脑卒中后抑郁状态模型大鼠学习和记忆水平的变化。方法:实验于2004-01/04在北京中医药大学基础医学院科研中心实验室进行。取雄性Wistar大鼠36只随机分为正常组、脑卒中组、抑郁组各12只。正常组大鼠不干预,脑卒中组大鼠首先制造局灶脑缺血,抑郁组大鼠在局灶脑缺血模型基础上复制大鼠脑卒中后抑郁状态模型。以蔗糖水消耗量进行行为学评价,以OPEN-FIELD测定直立活动和水平活动得分,以Morris水迷宫测试评价各组大鼠其学习和记忆水平。结果:36只大鼠均进入结果分析。①蔗糖水消耗量:脑卒中组大鼠[(23.51±3.42)g]低于正常组[(26.13±3.80)g],但差异无统计学意义(P>0.05);抑郁组[(19.85±3.06)g]低于正常组,差异有非常显著性意义(F=10.10,P<0.01)。②水平和直立活动得分:抑郁组较脑卒中组得分显著降低[(12.25±3.60,7.08±1.73)比(26.00±6.78,15.83±4.37),P<0.01]。③Morris水迷宫学习成绩:随着学习时间的延长,各组平均逃避潜伏期均显著下降,但抑郁组下降趋势较正常组和脑卒中组缓慢。第3,4天抑郁组平均逃避潜伏期[(13.78±4.45),(10.49±4.99)s]较正常组[(8.09±5.40),(6.18±2.90)s]和脑卒中组显著延长[(7.53±4.42),(7.37±2.41)s,P<0.01,P<0.05]。

金属硫蛋白对培养神经细胞迟发性损伤的作用和一氧化氮的表达

本文以新生大鼠原代培养皮质神经元为实验材料，造成迟发性神经元损伤模型．在不同时程内，测试培养液中的细胞乳酸脱氢酶漏出量和用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核着苷酸脱氢酶染色反应，观察培养细胞中一氧化氮合酶的表达水平．结果表明，缺血组在缺血与再灌流中，细胞乳酸脱氢酶漏出量明显高于对照组，差异显著（Ｐ＜０．００１）．一氧化氮合酶阳性神经元数量在缺血组的缺血时即明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），再灌流后一氧化氮合酶表达仍然强烈，与对照组相比有显著差异（Ｐ＜０．０１）．当损伤细胞再灌流时，同时加入金属硫蛋白后，显示一氧化氮合酶表达减弱，和缺血组相比有显著差异（Ｐ＜０．０５～０．００１），细胞乳酸脱氢酶漏出量在再灌流后的早期近似于对照组．结合文献和本实验结果提示：在迟发性神经元损伤形成过程中一氧化氮起着重要作用；金属硫蛋白对脑缺血后迟发性神经元损伤有一定保护作用，是一种细胞保护剂，可望用于临床，控制缺血再灌流损伤。

抗呆I号对体外模拟脑缺血再灌注损伤星形胶质细胞的影响

目的:观察体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞在模拟脑缺血再灌注损伤中的活性、存活率和无血清条件培养液蛋白含量的变化以及中药抗呆Ⅰ号的影响。方法:先对分离纯化培养的星形胶质细胞进行体外模拟脑缺血再灌注损伤模型的建立,然后采用MTT法对星形胶质细胞的活性和存活率进行测定以及用Bradform法对星形胶质细胞条件培养液中蛋白质含量进行测定。结果:体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞在体外模拟脑缺血再灌注损伤中的活性、存活率、无血清条件培养液蛋白含量的变化具有一定的规律性,可分细胞损伤期、功能代偿期、功能低下期和功能恢复期。抗呆Ⅰ号可使受损的星形胶质细胞的活性明显增强(与模型组相比多数时间点比较(t=2.074,P<0.05)。存活率显著提高(与模型组相比多数时间点P<0.05,t>2.219),使其条件培养液中的蛋白含量迅速增高(与模型组相比多数时间点,t>5.087,P<0.001)。结论:抗呆Ⅰ号可能通过保护星形胶质细胞免受损伤或使其分泌功能增强,从而间接地发挥星形胶质细胞对神经元的保护和修复作用。

电针血清对体外培养小胶质细胞活性的影响

目的:观察电针血清对体外培养的小胶质细胞活性和一氧化氮释放量的影响,探讨电针治疗帕金森病的机制。方法:采用高频电针针刺正常大鼠,2周后制备电针血清;体外培养的小胶质细胞分别加入正常血清(正常组)、正常血清加入LPS(对照组)和电针血清加入LPS(电针组)培养;通过免疫组化、MTT和Griess法分别观测8～48h不同时间小胶质细胞形态、活性及NO释放量。结果:1μg/ml LPS可激活小胶质细胞,表现为细胞体积增大,OX-42表达上调,电针组12h小胶质细胞的活性低于对照组,并且12～48 h NO释放量均显著低于对照组,增加电针血清浓度可显著减少NO的释放量。结论:电针血清可能通过抑制激活的小胶质细胞释放NO,从而保护多巴胺神经元。

9602对脑缺血再灌大鼠海马CA1区诱发电位与形态学改变的影响

目的 :探讨脑缺血再灌注后海马CA1区诱发群峰电位的变化与形态学改变的关系及中药 96 0 2的影响。方法 :在整体脑缺血再灌注后不同时间制备的海马脑片上 ,记录CA1区诱发群峰电位 (PS)的变化。采用TUNEL ,Nissl染色法进行形态学检测。结果 :脑缺血再灌组诱发PS的阈强度明显大于假手术组 ,波幅显著减小 ;加条件刺激后PS增幅显著低于假手术组 ,持续时间缩短。上述变化始于脑缺血再灌后 8h ,随再灌时间的延长而加重。海马CA1区再灌后 8h起TUNEL阳性细胞明显增多 ,2 4h达高峰 ,异常细胞 8h最多 ,随后降低并在低水平持续到 7d ,细胞总数随再灌时间的延长逐渐减少。中药 96 0 2明显降低缺血再灌脑片PS阈强度 ,增大PS波幅 ;加大条件刺激后PS增幅并延长持续时间 ;明显减少海马CA1区的TUNEL阳性细胞数 ,阻止CA1区细胞数的减少。结论 :脑缺血再灌后海马CA1区神经细胞兴奋性和反应性降低 ,与脑缺血再灌后迟发性神经元死亡 (DND)有关 ,细胞凋亡起重要作用。 96 0 2明显改善CA1区神经细胞的兴奋性和反应性 ,可能与其抑制脑缺血再灌诱导的细胞凋亡 ,减轻DND的发生有关。

三七总皂甙促进离体胎鼠皮层神经干细胞增殖、分化的实验研究

目的 :研究三七总皂甙对胎鼠皮层神经干细胞增殖、分化、自我更新及BDNF、bFGF表达的作用。方法 :选取E17胎鼠皮层细胞 ,通过原代细胞培养、传代、单细胞克隆和免疫细胞化学方法。结果 :给药组原代、P1、P2细胞都能够形成较多的神经球 ;给药组P1细胞的单细胞克隆能够形成神经球 ;与对照组比较 ,给药组原代细胞培养 4dNestin、PCNA、Tuj - 1、NF、Vimentin、GFAP、bFGF、BDNF阳性细胞数均明显增多 ,阳性细胞能够形成明显的团状。结论 :体外三七总皂甙可能通过促进胎鼠皮层神经干细胞或前体细胞bFGF、BDNF自身合成增加 ,通过自分泌或旁分泌作用 ,促进其存活、增殖、分化和自我更新。