幽门螺杆菌hpaA基因RFLP研究

用限制性片段长度多态性 (RFLP)的方法评价幽门螺杆菌不同菌株鞭毛粘附素基因(hpaA)的变异性。PCR扩增 9株幽门螺杆菌 710bp的hpaA基因 ,用HhaⅠ、HaeⅢ限制性内切酶对该基因片段进行酶切分析。hpaA基因HaeIII单酶切可见 4种带型 ,HhaI单酶切出现 5种带型。从临床分离的H pylori菌株hpaARFLP互有差异 ,且不同于国际标准菌株 ;临床分离株感染动物后分离得到的动物适应株其hpaA基因也发生了变异。不同H pylori菌株间hpaA基因表现出明显的多态性 ,为开展H

靶向整合素αvβ3受体isoDGR-2CY的^(131)I标记与生物活性评价

目的 131I标记αvβ3受体isoDGR-2CY模序,研究其在荷VX2肿瘤裸鼠体内的生物分布及显像。方法 (1)合成isoDGR-2CY模序并用131I标记。(2)20只荷VX2肿瘤裸鼠随机分成4组,每组5只,经尾静脉注射7.4 MBq(0.2 ml)131IisoDGR-2CY,分别于注射后2、5、12、24 h按组将裸鼠处死;另取5只荷瘤裸鼠作为竞争性抑制组,注射131I-isoDGR-2CY前1 h,先注射未标记的isoDGR-2CY,并于注射131I-isoDGR-2CY后12 h处死。各组取血及主要脏器,称取脏器质量并测量放射性计数,经衰减校正后计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)。(3)取6只荷VX2肿瘤裸鼠,实验前7 d在饮用水中加入0.1%碘化钾封闭甲状腺后,经尾静脉注射7.4 MBq的131I-isoDGR-2CY。4只作为显像组,另2只作为竞争性抑制组[注射131I-isoDGR-2CY前1 h,先注射未标记的isoDGR-2CY(isoDGR-2CY与131I-isoDGR-2CY摩尔比为10∶1)],分别于注射后2、4、8、12、24 h进行SPECT静态显像。结果合成的isoDGR-2CY模序纯度为97.06%,可以满足实验要求;131I-isoDGR-2CY标记率为(89.03±0.18)%,放化纯度(95.89±0.12)%,其在血清中具有良好的稳定性;131I-isoDGR-2CY主要通过肾脏排泄,肿瘤的靶向性明显,12 h靶/肌肉比值(T/M)为2.39;SPECT显示注射标记物1 h肿瘤即可见显影,12 h显影清晰,该显像可被未标记的isoDGR-2CY抑制。结论 isoDGR-2CY可被131I成功标记,肿瘤组织能特异性摄取131I-isoDGR-2CY,并通过SPECT清晰显像。

骨转移癌的放射性核素治疗

目的:探讨核素内照射控制骨转移癌引起骨痛的作用。方法:骨转移癌患者117例,均经病理证实为恶性肿瘤,其中前列腺癌55例、肺癌39例、乳腺癌8例、结肠癌8例、胃癌2例、鼻咽癌2例、宫颈癌1例、肾癌1例、淋巴瘤1例。显像示有一处以上骨转移灶。静脉注射89Sr,剂量为4 mCi/人。结果:疼痛缓解的总有效率为71.8%(84/117),其中显效率和部分有效率分别为31.6%(37/117)、40.2%(47/117),无效率为28.2%(10/35)。来源于前列腺癌和乳腺癌的骨转移癌疼痛控制有效率达79.4%(50/63)。98例复查骨显像的患者,81例骨转移灶代谢减低、缩小或消失,占82.7%;16例原有病灶部分消失、缩小,放射性摄取减低,但有新病灶出现,占16.3%;1例较治疗前加重,占1.0%。结论:在确诊骨转移癌的病人中掌握好核素内照射治疗适应证,并与其他疗法配合可获得良好的疗效。

幽门螺杆菌粘附素基因hpaA研究

目的 克隆表达幽门螺杆菌鞭毛粘附素基因hpaA,筛选Hp疫苗有效抗原成分。方法采用PCR技术从幽门螺杆菌基因组中扩增hpaA基因,克隆至表达载体pET-28a(+)中,IPTG诱导表达重组蛋白HpaA(rHpaA),鉴定rHpaA蛋白的表达形式。结果 pPHA重组菌以包涵体形式表达rH-paA,表达量约占全菌的35％。纯化后的rHpaA免疫家兔获得了高效价的兔抗HpaA抗血清,且该抗血清能够与不同Hp菌株中相应分子量条带发生抗原抗体反应,并能在一定程度上抑制由Hp引起的RBC凝集现象。结论 Hp鞭毛粘附素HpaA在重组大肠杆菌中能够高效表达,且具有良好的免疫反应性。

偏头痛患者血浆和脑脊液β-内啡肽含量的变化

为探讨偏头痛与β内啡肽(βEP) 的关系,本文用放射免疫分析法(RIA) 测定30 例偏头痛患者血浆和脑脊液βEP 的含量变化,发现典型偏头痛和普通型偏头痛以及偏头痛各期βEP含量均明显降低,提示βEP 减少是偏头痛的发病机理之一。认为两型偏头痛发病机理相同,间隙期存在鸦片肽功能紊乱,当βEP

白细胞介素-10基因多拷贝表达盒的构建及在毕赤酵母中的表达

目的构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平。方法体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamHⅠ和BglⅡ双酶切获得目的基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到BglⅡ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815。从质粒pPIC9K上用NdeⅠ和SalⅠ双酶切获得Kan抗性基因,重组到多拷贝表达载体n(AOX-αIL-10)/pAO815上。重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815电转化毕赤酵母,PCR筛选含有IL-10基因的酵母转化子,甲醇诱导表达,对表达量高的转化子再次经重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan电转化,高浓度G418抗性筛选二次酵母转化子,使用甲醇诱导表达。ELISA测定IL-10含量,MC/9细胞测定IL-10活性。结果所构建的8拷贝表达盒的重组载体8(AOX-αIL-10)/pAO815和4拷贝表达盒4(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan,转化子分泌表达IL-10水平最高,为(8.25±1.65)mg/L,比活性为1.465×105U/mg。结论已成功构建了高拷贝表达盒,并提高了IL-10在毕赤酵母中的表达水平。

^(18)F-FDG和^(18)F-FLT PET/CT在肺部良恶性肿瘤鉴别诊断中的价值

目的:分析18F-FDG(18F-脱氧葡萄糖)和18F-FLT(18F-胸腺嘧啶)两种显像剂的PET/CT检查在肺部肿瘤中的不同影像学表现,提高PET/CT在肺部良恶性肿瘤鉴别诊断中价值,从而为临床治疗方案的选择提供可靠依据。方法:收集肺肿瘤患者55例为研究对象,其中男性33例,女性22例,年龄17～82岁,28例为肺内孤立肿块,其余为2～3个肿块,肿块大小0.6～11.0cm,所有患者均行肺部18 F-FDG和18 F-FLT PET/CT检查,分析18 F-FDG和18 F-FLT标准摄取值(SUV)与肺肿瘤患者的年龄、肿块大小及病理类型等相互关系和统计学意义。结果:18 F-FDG和18 F-FLT PET/CT的SUV与肺肿瘤患者的年龄、肿块大小均无统计学差异(P>0.05),18 F-FDG PET/CT的SUV与患者的病理类型亦无统计学差异(P>0.05),而18F-FLT PET/CT的SUV与患者的病理类型有统计学差异(P<0.05)。结论:肺肿瘤患者的肿块病理类型是影响18F-FLT PET/CT的SUV的重要因素,18F-FLT PET/CT的SUV在肺部良恶性肿瘤鉴别诊断中具有重要的价值。

幽门螺杆菌粘附素与大肠杆菌LtB融合疫苗的口服免疫与预防试验

目的 观察幽门螺杆菌粘附素HpaA与大肠杆菌LtB融合蛋白质经口服免疫BALB/c小鼠后机体产生的免疫应答和蒙古沙鼠免疫预防作用。方法 用PCR方法扩增HpaA和LtB目的基因片段 ,将LtB与 pPIM质粒连接后 ,再与HpaA基因连接 ,转化大肠杆菌DH5α ,经酶切获得含有ltB -hpaA的pPIM -ltB/hpaA融合质粒。将重组质粒转化E coliBL2 1(DE3) ,筛选获得重组工程菌 ,经发酵、包涵体提取 ,复性 ,纯化获得LtB -HpaA。BABL/c小鼠设正常对照组、单独rHpaA对照组、CT +HpaA实验组、融合蛋白LtB -HpaA组和rLtB +rHpaA实验组 ,免疫 4周后检测血清抗原特异性IgG、IgA和胃冲洗液、肠冲洗液中sIgA。蒙古沙鼠分 3个实验组 ,正常对照 (PBS)组 ,单独HpaA免疫组和LtB -HpaA组 ,免疫 4周 ,于末次免疫后 14天灌活力良好的H pyloriSS1活菌 ,1个月处死动物 ,采集标本 ,用细菌培养和病理切片检查评价蒙古沙鼠的免疫保护作用。结果 融合蛋白LtB -HpaA组及将CT和LtB作为外粘膜佐剂的CT +HpaA组和LtB +HpaA组中血清IgA和IgG、胃冲洗液和肠冲洗液中sIgA含量明显高于单独HpaA组和对照组 ,差异非常显著 (P <0 0 0 1)。蒙古沙鼠融合蛋白rLtB-HpaA组比单纯rHpaA组效果明显 (rLtB -HpaA组保护率为 80 % ,单独rHpaA为 2 0 % )。

^(18)F-FDG PET-CT对妇科肿瘤定性诊断的准确性

目的通过与传统的影像学、血清学和组织学检查比较,评估18F-FDG PET-CT在妇科肿瘤诊断中的准确性。方法 63例妇科肿瘤中,卵巢肿瘤29例,宫颈肿瘤17例,子宫内膜肿瘤12例,阴道肿瘤5例。全部患者进行全身18F-FDGPET-CT扫描,51例进行了放射学检测(CT/MRI/超声),15例进行了血清学分析,40例进行了组织学或细胞学诊断。采用PET-CT扫描仪,经肘静脉注射5.5 MBq/kg 18 F-FDG后45～50 min,采集、重组图像。结果 18 F-FDG PET-CT诊断准确率为84.2%,其中58.8%为真阳性,25.4%为真阴性。18 F-FDG PET-CT对肿瘤原发灶(卵巢、宫颈、子宫内膜、阴道)的诊断准确率分别为82.8%、82.3%、91.7%和80%;而18F-FDG PET-CT仅显示了15.8%的错误结果,包括6.3%的假阳性和9.5%的假阴性。而且假阳性结果与18F-FDG摄取区周围有炎性细胞的存在有关;假阴性结果与肿瘤的分级低(2例)、正在化疗(2例)和技术问题(1例)有关;还有1例假阴性结果仅与血清学指标的轻度升高有关,但没有细胞学和组织学支持。放射学检测的51例中,21例18F-FDG PET-CT发现转移灶,而放射学检测却没有提示。18F-FDG PET-CT的阳性预测值为84.6%(22/26),阴性预测值为76.9%(10/13)。结论 18F-FDG PET-CT能早期准确诊断妇科肿瘤的复发或肿瘤活性组织的残留;但在化疗中的肿瘤和恶性程度低的肿瘤中,会出现假阴性结果;想得到有意义的结论还需要更多数据的支持。

人性化护理在核医学科的运用

临床核医学是一门利用开放型放射性核素诊断和治疗疾病的学科。随着核医学在医学领域的广泛应用,我国大多数的大中型医院均设有核医学科,部分科室组建了核医学病房。

CAT为报告基因的铜绿假单胞菌启动子文库的建立及初步鉴定

以CAT（chloramphenicol acetyltransferase,CAT）为报告基因,构建p CAT2启动子探针载体从绿脓杆菌基因文库中筛选启动子。Sau3AⅠ酶切铜绿假单胞菌的基因组,回收（500-1 500 bp）片段并与p CAT2载体连接构建铜绿假单胞菌的基因组文库,PCR鉴定文库的多样性,利用氯霉素（10μg/m L）和卡那霉素（50μg/m L）双抗平板筛选了16株阳性菌株,并用PCR、测序、NCBI比对进行鉴定。构建的基因文库的库容量可达50 000个,覆盖基因全长的3.5倍,插入率达90%,具有较强的随机性。采用双抗平板进行启动子的筛选,筛选效率高达96%。获得了绿脓杆菌基因组中的9个启动子,同源性达99%以上,并对其活性进行初步鉴定,为铜绿假单胞菌基因表达调控的进一步研究奠定基础。

组成型表达人呼吸道合胞病毒F_(212-489)蛋白乳酸乳球菌的构建

目的构建能表达呼吸道合胞病毒截短F1蛋白(F212-489)的乳酸乳球菌,并检测表达蛋白的免疫反应性,以评估此重组菌作为口服活菌疫苗的可行性。方法 PCR扩增绿色荧光基因egfp以及截短f1基因(f212-489),经TA克隆测序后,将目的片段构建至pMG36e载体,电转化至乳酸乳球菌中鉴定并表达,通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白EGFP的表达,通过SDS-PAGE和Western blot检测F212-489蛋白的表达。结果荧光显微镜观察到重组菌pMG36e-egfp/MG1363有绿色荧光表达,Western blot检测到重组菌pMG36e-f212-489/MG1363中F212-489蛋白的表达。结论构建的乳酸乳球菌能够组成型表达F212-489蛋白,其蛋白具备免疫反应性。

基于Profinity eXact系统的可溶性egfp表达和纯化

为研究Profinity eXact系统在蛋白表达及纯化过程中的效果,利用PCR扩增绿色荧光蛋白基因egfp,定向克隆至表达载体pPAL7上,转化BL21(DE3),荧光显微镜下观察诱导后的重组菌;取超声破碎的上清挂柱纯化,紫外下检测纯化后egfp发出荧光的特性,Western blot分析其免疫反应性。结果表明:诱导后的重组菌pPAL7-egfp/BL21(DE3)在紫外光下能够发出绿色荧光;一步纯化后的egfp蛋白同样也能在紫外激发下发出绿色荧光,同时egfp蛋白能和特异性抗体结合,具有良好的免疫反应性。实验结果说明Profinity eXact系统对于可溶性蛋白的表达和纯化,方法操作简单、快捷,具有很好的应用价值。

幽门螺杆菌尿素酶B基因的限制性片段长度多态性分型和生物信息学分析

目的：对不同来源野生型幽门螺杆菌（Hp）菌株的尿素酶B基因进行限制性片段长度多态性（RFLP）分型和生物信息学分析。方法：采用HaeⅢ单酶切法对国内临床分离的Hp菌株、动物模型适应株及国际标准Hp菌株尿素酶B（ureB）基因进行RFLP分型，同时进行基因测序和序列同源性对比及进化树分析等生物信息学研究。结果：HaeⅢ单酶切结果显示，14株Hp 1．7kb ureB基因均呈现出2～5种带型，可分为五组，其中两种国际标准株NCTC11637、NCTC11639和三种临床分离野生株拥有相同的RFLP带型，其他国内临床分离株和动物适应株分属于四种不同的RFLP带型组。ureB基因序列同源性比对表明，各种Hp菌株间核苷酸序列同源性均〉96．6％，氨基酸序列同源性均〉98％，其中CCS9801、CCS9806、M3及M10菌株之间的核苷酸和氨基酸序列同源性为100％。核苷酸序列进化树分析显示，2株国际标准株与国内临床分离株及动物适应株分处于不同进化分支，为平行进化关系；而在氨基酸序列进化树中转变为非平行关系。结论：不同Hp菌株尿素酶B在基因和蛋白质水平均高度保守和同源。

DXI800化学发光仪的日常维护和故障处理

0引言DXI800全自动微粒子化学发光仪是贝克曼库尔特公司近年推出的最新型号化学发光分析系统,它采用磁性微粒子和光量子探测器等最新技术,并利用超声波技术进行清洗,具有3个特点：（1）强大的样本处理系统、急诊功能;（2）分立而互不影响的4个进样通道,一体化的系统检测方式;（3）智能化操作控制,强大的编程、定标、质控、查询功能。

幽门螺杆菌双亚单位基因疫苗的构建及免疫原性研究

目的:构建幽门螺杆菌(Hp)两个保护性亚单位UreB、HspA融合基因疫苗并观察其免疫原性。方法:从Hp基因组分别扩增出UreB、HspA基因片段,采用重叠延伸PCR方法将两个基因片段构建融合基因,以BglⅡ和XhoⅠ酶切位点克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经测序确认后转染COS-7细胞,Western blot检测目的蛋白表达,胫前肌注射免疫小鼠后收集血清检测特异性抗体效价。结果:经测序后证实成功将融合基因构建到真核表达载体中,免疫印记检测到目的蛋白表达,并具有良好的抗原性,免疫小鼠后能够产生特异性抗体。结论:成功构建Hp双价DNA疫苗,免疫小鼠后显示出良好的免疫原性,为Hp进一步基因疫苗的研究奠定了基础。

甲状腺相关眼病球后注射法的改进及护理体会

甲状腺相关眼病（thyroid-associated ophthalmopathy，TAO），是一种器官特异性自身免疫性疾病。TAO年发病率男、女分别为16／10万和3／10万，由于TAO病因尚不十分清楚，治疗远比诊断复杂。球后注射是将药物注入眼球后肌锥内以达到治疗作用的方法，是目前治疗TAO局部给药的重要途径，它具有疗效快、给药准确、同时又避免全身用药副作用大的优点。由于TAO是以眼外肌肥大，眶内压增高导致眼球突出为特征，增加了球后注射的难度，加之治疗期内眼眶部需反复多次进行局部注射，方法不当易发生多种并发症。笔者在临床工作中通过实践探索，对球后注射方法进行改进，明显减少了并发症的发生，现介绍如下。

重组人IL-10融合蛋白的表达及其生物学活性测定

目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素10融合蛋白,获得有生物学活性的IL10。方法限制性内切酶NcoⅠ和BamHⅠ双酶切目的基因IL10,插入到同样双酶切的表达载体pET32a,构建重组载体IL10pET32a,测序正确后转化E.coliBL21(DE3),不同温度、低浓度IPTG诱导工程菌表达目的蛋白,SDSPAGE和Westernblot检测目的蛋白的表达,ELISA和MC9细胞增殖法分别测定IL10的含量及生物学活性。结果构建的表达重组载体IL10pET32a经酶切鉴定和序列测定表明完全正确,诱导工程菌可以表达可溶性的融合蛋白IL10Trx,同时也存在包含体融合蛋白,经Westernblot鉴定存在有目的蛋白IL10,MC9细胞增殖法测定可溶性的融合蛋白具有生物学活性。结论成功表达了具有生物学活性的融合蛋白IL10Trx,有助于下游纯化和制备hIL10基因工程药物。

重组人白细胞介素-10在大肠杆菌中的表达及生物学活性分析

目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10),并检测其生物学活性。方法将IL-10基因重组到质粒pET11c中,转化BL21(DE),提取质粒,经酶切鉴定和测序分析;在25℃用低浓度的IPTG诱导表达,对包涵体IL-10稀释复性;经ELISA检测其含量,MC/9细胞增殖法检测其生物学活性。结果工程菌IL-10/pET11c/BL21诱导表达的目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,Westernblot鉴定证实为IL-10蛋白,两种形式的IL-10均具有一定的生物学活性。结论已成功地在大肠杆菌中表达了IL-10,为进一步纯化和制备IL-10的基因工程药物打下了基础。