基于16S rRNA测序技术分析桶装水中野生铜绿假单胞菌的系统发育

目的以铜绿假单胞菌16S rRNA为研究对象,利用16S rRNA测序分析技术构建系统发育树,研究湖南省内28株野生水源性铜绿假单胞菌的系统发育。方法收集28株野生阳性铜绿假单胞菌,利用27F/1492R通用引物进行16S rRNA PCR扩增,将胶回收产物进行测序,测序结果利用MEGA 11.0构建系统发育树,并进行遗传距离计算。结果28株铜绿假单胞菌可分为3支,一株来源于永州的菌株单独为一支,3株分别来源于常德、永州、郴州的菌株聚为一支,其余24株聚为一支;28株铜绿假单胞菌平均遗传距离为0.0064。结论28株野生铜绿假单胞菌之间具有高度同源性,通过实验进一步完善了水源性铜绿假单胞菌溯源数据库,为桶装水铜绿假单胞菌污染源监测提供了理论依据。

包装饮用水中铜绿假单胞菌实时荧光定量PCR快速检测

目的:有效弥补传统微生物学检验方法的缺陷。方法:针对GB 8538—2022中铜绿假单胞菌的毒力基因pcrL和16S rRNA基因的V3~V4区保守序列设计合成引物和探针,建立实时荧光PCR方法。结果:该方法可以有效扩增常见标准储备菌株的16S rRNA基因,且对铜绿假单胞菌标准储备菌株的毒力基因pcrL的检测效果良好,观察到明显的“S”型扩增曲线,但对常见的食源性致病菌无扩增曲线。当菌液浓度<10 CFU/mL时,pcrL基因仍有扩增曲线,其检测范围为10~10~7 CFU/mL,检测限为10 CFU/mL;不同菌液浓度下毒力基因pcrL的Ct平均值为18.0~38.6。对近3年湖南省14个县、市抽查检验(瓶)桶装水中铜绿假单胞菌不合格样品进行进一步检测,符合率达到100%。结论:该方法对铜绿假单胞菌携带毒力因子pcrL检测的灵敏度较高;且操作简便、特异性强,具有良好的实用性。

基于ISO19036:2019评估饮用水中大肠菌群的测量不确定度

[目的]参考ISO19036:2019对饮用水中大肠菌群的测量不确定度进行评估。[方法]通过设计试验方案,分别评估技术不确定度(u_(tech))、基质不确定度(u_(matrix))和分布不确定度(u_(distrib)),并综合3个分量的数值计算合成不确定度(uc(y))和扩展不确定度(U)。[结果]对GB 4789.3—2016第二法进行测量不确定度评估后,得到的技术不确定度为0.1202 log(CFU/mL),基质不确定度为0.1 log(CFU/mL),分布不确定度分别为0.0655,0.0261 log(CFU/mL),当结果为440 CFU/mL时,扩展不确定度为0.34 log(CFU/mL),表示为(2.64±0.34)log(CFU/mL)。[结论]ISO19036:2019对食品中微生物定量检测方法进行测量不确定度评估相较目前国内标准更科学、更便捷。