树木褐根病PCR快速检测技术之建立

褐根病(brown root rot disease)是林木最严重的病害，由病原真菌Phellinus noxius所引起。树木罹病初期不易以外部病徵来诊断，为掌握防治先机，针对病原菌应用聚合酶链锁反应(PCR)进行分子检测，有助於提高病害诊断效率。本研究以各林地采样分离得到的褐根病菌为样本，先以通用性引子对ITS1-F/ITS-4 进行PCR 增幅，产物经过定序与比对後重新设计出褐根病菌之专一性引子对G1F/G1R，引子对序列为G1F：5'-GCC CTT TCC TCC GCT TAT TG-3'；G1R：5'- CTT GAT GCT GGT GGG TCT CT-3'，可对褐根病菌增幅出653-bp的专一性片段。再利用改良後之快速程序抽取核酸，仅需菌丝洋菜块0.16平方公尺或0.15克感病根部样本，抽取时程仅需2小时，即可进行聚合酵素连锁反应。由检测的结果发现改良後之核酸抽取方法能大幅缩短作业时程及成本，也证实G1F/G1R引子对树木褐根病菌的专一性极佳，且可针对极少量之样本进行检测，其灵敏度可达10pg。本研究所研发的树木褐根病快速且灵敏的PCR诊断技术，应能广泛应用於林木褐根病诊断及疫情监控。