多重PCR方法检测大肠杆菌O157∶H7的初步研究

目的研究一种快速、特异的检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法。方法以大肠杆菌O157∶H7的O157抗原基因(rfbE基因)、鞭毛H7抗原基因(fliC基因)、粘附素基因(eaeA基因)和志贺样毒素Ⅰ、Ⅱ(SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因)为扩增对象,设计能导至目的片段大小不同的5对引物,通过优化条件,建立了可用于粪便检测的大肠杆菌5重PCR。结果在同一扩增体系中,检测了5株不同来源的大肠杆菌O157∶H7及27株非大肠杆菌O157∶H7细菌。结果表明,该方法能从2株大肠杆菌O157∶H7中扩增出rfbEf、liC、eaeA、SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因,它们的大小分别为582 bp、802 bp、487 bp3、68 bp和177 bp。而另外3株大肠杆菌O157∶H7也能扩增出除eaeA、SLT-Ⅱ基因外的其它3个基因片段。表明该方法可用于检测大肠杆菌O157∶H7,还可检测细菌是否含有毒素基因。在检测27株非大肠杆菌O157∶H7,除O149出现SLT-II扩增产物和O1∶H7出现fliC基因扩增产物外,其它非大肠杆菌O157∶H7的扩增结果均为阴性,表明该方法有较高的特异性。当粪便样品经增菌培养12 h,用该5重PCR体系能检测出最初接种量为5cfu/g粪便的样品。结论本5重PCR方法具有较高的特异性和敏感性,可迅速、有效地将大肠杆菌O157∶H7与其它非大肠杆菌O157∶H7相区别,同时还能检测O157∶H7中的毒力因子。因此,通过进一步研究,本方法有望应用于临床大肠杆菌O157∶H7感染的辅助诊断。

三重PCR方法检测猪链球菌2型

根据发表文献,设计合成三对引物,建立三重PCR方法,分别扩增猪链球菌2型cps2J、epf,mrp基因,目标片断大小分别为:230bp、570bp、860bp。对三重PCR方法进行特异性、敏感性、重复性试验,结果显示该三重PCR方法特异性好,敏感性高,重复性好,能快速的检测猪链球菌2型。

供港澳猪场乙型脑炎血清流行病学调查及与人群感染的关系

流行性乙型脑炎是一种重要的人兽共患病毒病,成年动物和人往往呈隐性感染的带毒状态。为保障供港澳生猪的生产和卫生安全,本文以血净抑制试验调查了供港澳猪场人和猪的乙型脑炎血清抗体水平。结果各场猪群抗体阳性率分别达到57%、2.5%、39%、22%和93%。其中母猪群阳性率最高为87,%仔猪41%。各猪群平均抗体水平为1:38、1:15、1:39、1:20和1:107。同时,这些猪场的饲养人员均有乙型脑炎病毒感染,抗体阳性率分别为20%、11%、3.5%和24,%抗体水平为1:22、1:109、1:16。结果提出排除一些猪场已对猪只和人员进行乙脑疫苗接种的因素,在猪场中以善通存氏乙脑流行。加强乙型脑炎免疫接种的覆盖率,猪群采用细小-乙脑二联疫苗接种,人类特别是儿童要100%免疫接种乙脑疫苗,才能避免人猪间乙脑的相互传播。

鸡胚成纤维细胞培养鸭瘟病毒的试验

将鸭瘟病毒强毒 (DPV34 )经 12日龄鸭胚连续传 2代 ,收获的尿囊液DPV34 F2 作为细胞培养的病毒接种于鸡胚成纤维细胞 ,连续传代 5次。结果 ,从第 2代开始 ,接种DPV的鸡胚成纤维细胞出现细胞病变 ,随着代次的增加 ,细胞病变愈加明显。经电镜观察 ,第 5代细胞培养物中有典型的DPV病毒粒子 ;将第 5代培养物接种鸭胚 ,出现典型鸭瘟病变 ;用PCR方法检测培养物 。

荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的巢式PCR检测方法的建立和应用

为建立荷斯坦奶牛瓜氨酸血症和尿苷酸核酶缺乏症两种遗传缺陷病的检测方法,根据文献报道的精氨酸琥珀酸合成酶、UMPS基因核苷酸序列,设计引物,通过条件的优化,建立了巢式PCR反应体系。结合PCR产物测序,建立了检测CN和DUMPS方法。取243份临床牛血清样品用巢式PCR检测并测序,发现CN野生型238份,CN杂合子型5份,CN突变型0份;DUMPS野生型236份,DUMPS杂合子型5份,DUMPS突变型2份。所建立的巢式PCR方法灵敏、特异,还兼具高通量的特点,适合口岸对荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的大样品量检测。

狂犬病病毒RT-PCR检测方法的建立

为建立一种检测狂犬病病毒的方法,根据Gen Bank已公布的狂犬病病毒核蛋白N基因序列,设计并合成一对特异性的引物,以兽用疫苗株HEP-Flury为阳性毒株建立了RT-PCR检测方法。对建立的RT-PCR方法做灵敏度、特异性、重复性及稳定性试验,结果显示该方法的灵敏度可以达到20 FFU/m L,可以将狂犬病病毒与犬瘟热病毒和犬细小病毒区别开来。该方法重复性好,稳定可靠。

现代禽病防治技术专题(十三) 鸡传染性喉气管炎的诊断及免疫研究新进展

鸡传染性喉气管炎（ＩＬＴ）是鸡的一种急性病毒性上呼吸道传染病。病鸡以呼吸困难、气喘、咳出血性粘液和高死亡率为特征性病变。对于严重感染ＩＬＴ的急性病例，通过典型的症状（如张口呼吸、咳出血性分泌物、结膜炎及减蛋等）和特征性病变（如出血性喉炎和气管炎）不难...