巴马小型猪OCA2基因序列、组织表达分析及载体构建研究

旨在为猪的毛色调控机制和模拟与OCA2基因相关的人类疾病模型的研究建立基础。本研究将GenBank公布的猪OCA2基因序列（NC_010457.4）所缺失的5个外显子（20~24号外显子）进行了克隆和划分,在基因组水平和cDNA水平上采用PCR扩增和Sanger测序方法对划分结果进行了验证;并对OCA2基因进行生物信息学分析,同时在广西巴马小型猪中对OCA2基因外显子的多态位点进行了筛选。采用实时荧光定量PCR技术（Q-PCR）分析了OCA2基因在各组织中的表达规律,并以皮肤全长cDNA为模板构建重组表达质粒,并利用XhoⅠ和SacⅡ限制性内切酶进行双酶切验证。在已公布的猪OCA2基因中成功划分和克隆了所缺失的外显子,并在OCA2基因所有外显子中共发现了10个SNPs位点,其中7个为同义突变,3个为错义突变（R124H、G509D、R573H）;猪OCA2基因在多种组织中广泛表达,其中,肺、大脑、小脑相对高表达,脾、胃、盲肠和皮肤中度表达,而在心和肝中表达量较低;OCA2基因重组表达质粒经酶切和测序鉴定证明构建成功。本研究初步探讨了猪OCA2基因的序列信息及组织表达规律,并构建了OCA2基因重组表达质粒,为该基因下一步的功能学研究及疾病模型的研究奠定了基础。