SDS变性剂对杂色鲍碱性磷酸酶的活力与构象的影响

以十二烷基磺酸钠(SDS)为变性剂,研究其对杂色鲍碱性磷酸酶(ALP)活力的影响,结果表明酶的剩余活力随着SDS浓度增高而下降,但当下降到67%时,随着SDS浓度增高,酶活力几乎不再发生明显变化.这说明杂色鲍ALP对SDS具有高度的耐受性.研究SDS对杂色鲍ALP的pH稳定性的影响,发现该酶的pH稳定性区域由5.9～10.0区域漂移到7.6～10.6区域,显示酶的pH稳定性往碱性区域偏移.进一步以荧光和紫外光谱为监测手段,研究杂色鲍ALP经SDS微扰后的分子构象变化情况.其结果表明随着SDS浓度增高,荧光发射强度逐渐发生变化,但发射峰未发生明显变化;紫外吸收强度发生变化,但吸收峰也未发生明显变化.这说明该酶活性中心对SDS变性剂并不敏感.这在以往文献中未见过报道.

巯基化合物和磷酸盐及其类似物对鲍鱼碱性磷酸酶的抑制作用

研究二巯基苏糖醇(DTT)、巯基乙醇(ME)等巯基化合物及磷酸盐(Na2HPO4)、砷酸盐(Na2HAsO4)、酸盐(Na3WO4)和钼酸盐(Na3MoO4)对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力的影响.结果表明:这些效应物对该酶都具有明显的抑制作用,而且它们的抑制作用强度依次为:DTT>ME;Na2HPO4>Na3WO4>Na2HAsO4>Na3MoO4.进一步研究这些效应物对该酶的抑制作用机理,表明:巯基化合(DTT、ME)均非竞争性抑制;Na2HPO4、Na2HAsO4和Na2HWO4表现为竞争性抑制;本文测定了它们的抑制常数并加于比较.

鲍鱼碱性磷酸酶的分离纯化和性质研究

以杂色鲍(Haliotis diversicolor)内脏为原料,经Tris HCl缓冲液(pH 7.5,含0.1mol/L NaCl)抽提,正丁醇处理,硫酸铵分级沉淀分离,DE 32离子交换、Sephadex G 150分子筛、DE 32纯化,得到电泳单一纯的碱性磷酸酶制剂,比活力为1 226 U/mg.酶学性质和动力学性质研究表明:该酶催化对硝基苯磷酸水解反应的最适 pH值为 10.08,最适温度为48℃.米氏常数Km 值为0.80 mmol/L,Vm 值为20.1 mmol/L·min-1(pH 10.0,37℃).酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 7~11区间和在温度低于55℃下稳定.金属离子对酶活力的影响结果表明:Li+、Na+和K+对酶活力没有影响,Mg2+、Ca2+、Ba2+、Mn2+和Co2+对酶有不同程度的激活作用,而Cu2+、Cd2+、Zn2+、Hg2+、Ag+、Bi2+和Pb2+等对酶起抑制作用.

杂色鲍碱性磷酸酶在醇、醛和酮溶液中的失活作用

报道了杂色鲍碱性磷酸酶(ALP)在甲醇、乙醇、丙醇、甲醛、丙酮等溶液中的失 活动力学．结果表明:酶的剩余活力随着有机溶剂浓度的增大而迅速下降．测得上述 5种有机溶剂对该酶的半抑制率(IC50)分别为5．41、3．07、1．80、31．0×10-3、2．30 mol／dm3．在这些有机溶剂溶液中酶的失活过程都是可逆反应．检测醇、醛、酮对该酶 的失活作用机理,结果表明甲醇、乙醇、丙醇对杂色鲍ALP的失活作用均为非竞争性 机制,其抑制常数分别为5．36、3．02、1．80mol／dm3．甲醛、丙酮对杂色鲍ALP的失活 作用都呈现为混合型抑制,其对游离酶的抑制常数(K1)分别为24．7×10-3、1．66 mol／dm3;对酶-底物络合物的抑制常数(KIS)分别为56．2×10-3、5．40mol／dm3．

杂色鲍碱性磷酸酶在DMSO溶液中的活力与构象变化的研究

以二甲亚砜(DMSO)为效应物,研究其对杂色鲍碱性磷酸酶(ALP)活力的影响,结果表明:该酶的剩余活力随着DMSO浓度增大而迅速下降,当DMSO浓度达40%,酶活力几乎完全丧失.说明DMSO对杂色鲍ALP有明显的失活作用.导致酶活力丧失50%的DMSO浓度为17%.在较低DMSO浓度(<20%)的失活是可逆的反应过程.动力学研究表明,该酶的失活过程属于混合型.进一步测定游离酶(E)和酶底物络合物(ES)与DMSO的结合常数(KI和KIS),结果表明KI<KIS,说明底物存在对酶被DMSO的失活作用有一定的保护作用.应用荧光发射光谱研究杂色鲍ALP经DMSO微扰后的分子构象变化情况,随着DMSO浓度增大,荧光强度逐渐增强,但发射峰未发生明显变化现象,说明酶分子中的生色基团残基的微环境发生了一定的变化.

长螺旋钻孔泵压灌注成桩工艺在复合地基基础施工中的应用

CFG桩复合地基在刚性桩地基处理中应用广泛,经改良的CFG桩长螺旋钻孔泵压灌注成桩工艺突破了传统工艺不能在地下水位以下施工的限制,兼具施工场地便捷、施工工效快、桩身质量好等优势。文章结合工程实例,详细介绍了CFG桩长螺旋钻孔泵压灌注成桩工艺,包括工艺特点、所需施工设备、现场试桩以及具体施工工艺流程,最后对施工效果进行分析,结果表明应用该工艺能实现良好的施工效果。

探索法制教育走进初中生物学教学新模式

法制教育是初中生物学一个情感教育目标之一,针对中学生的心理和文化水平现状,本文以具体的教学案例,提出了课堂一直是法制教育的主阵地,主题活动是法制教育的延伸的实践模式。并指出教学设计要能坚持多样性,直观性,趣味性的原则。

探索初中生物学核心概念建构的课堂实施途径

根据对初中生学习基础与思维特点,尝试通过实践体验,联系生活经验,教师点拨,应用反馈,图标总结等方式,探索生物学核心概念建构的课堂实施途径,并达到对概念的延伸应用。总结在核心概念中应该把握的兴趣性、创造性和个性化教育原则。

双轮铣削搅拌水泥土墙(CSM工法)在砂、岩复杂地质条件下深基坑中的应用

本文通过在广州海珠区某深基坑工程中应用双轮铣削搅拌水泥土墙(CSM工法)在砂、岩复杂地质条件中形成止水帷幕,阐述了双轮铣削搅拌水泥土墙(CSM工法)的方案设计要点及施工工艺,对在砂、岩复杂地质条件下深基坑开挖形成止水帷幕具有参考价值。

初三中考数学专项复习的教学策略研究

学生在进入到初三之后的复习就会面临很大的压力,教师应当起到自身的引导作用,帮助学生进行复习的规划,制定专项的复习策略,从而使学生可以更好的完成学习策略。教师在进行复习的过程中应当坚持以学生为本的理念,抓住复习的重点,展开专题设定,从而进行针对性的训练。

房屋建筑装配式混凝土结构施工关键技术探析

现如今随着我国建筑规模的不断扩大,一些新的建筑技术也逐渐涌现出来,发展绿色建筑成为现如今建筑行业的全新目标,绿色建筑不仅会对周围环境带来较小的污染,同时也能在一定程度上促进能源在使用过程中的效率。现阶段装配式混凝土结构这一项施工技术已经得到相对来说比较普遍的运用,这种施工技术主要是在工厂内完成的,从而减少建筑工程施工时间,减少对周围环境带来的影响。文中主要分析了房屋建筑装配式混凝土结构施工关键技术,希望能够为同行业工作人员提供相应的参考。

少先队活动与学生能力的培养

少先队工作是学校教育工作的重要组成部分,是学校贯彻教育方针的有力助手。寓教育于活动之中,是少先队工作的特点,它符合少年儿童的年龄特点和心理特征。今天的雏鹰,明天的栋梁,组织开展形式新颖、丰富多彩、贴近生活的活动,能有效地把孩子们团结在队旗下,通过对活动的设计、参予、评价,培养他们的综合能力和创新意识。

早期电针长强穴对缺血缺氧性脑损伤大鼠海马CA1区神经元损伤及细胞自噬的影响

目的从自噬途径探讨早期电针长强穴对缺血缺氧性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马CA1区神经元细胞损伤修复及神经功能改善的作用机制。方法将69只7日龄新生SD大鼠,采用随机数字表法分成空白组12只、假手术组12只和造模组45只;造模组随机数字表法分成模型组、电针组和三甲基腺嘌呤(3-MA)+电针组各15只,采用改良Rice Vannucci法制备HIBD模型,3-MA+电针组在造模前尾静脉注射3-MA,制备模型成功后每组采用随机数字表法选取12只进入实验。空白组不予任何处理,假手术组仅分离左侧颈总动脉,不予结扎,缝合消毒,不做缺氧处理。造模后6 h开始干预,连续干预3 d。电针组和3-MA+电针组进行电针长强穴干预,其他组别模拟固定。干预后比较5组大鼠体质量及倾斜板转头时间,Zea Longa法比较5组大鼠的神经功能缺损评分,免疫组织化学法检测5组大鼠海马CA1区神经元中神经元特异性核蛋白(NeuN)表达水平,透射电子显微镜观察5组大鼠海马CA1区神经元结构及自噬小体情况,Western blot法检测5组大鼠海马CA1区微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达量。结果与空白组比较,假手术组大鼠干预后转头时间、体质量、神经功能缺损评分、海马CA1区NeuN含量、LC3-Ⅱ蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较,模型组大鼠干预后转头时间、神经功能缺损评分、海马CA1区NeuN含量、LC3-Ⅱ蛋白表达量均升高(P<0.05),体质量降低(P<0.05);与模型组比较,电针组和3-MA+电针组大鼠干预后转头时间、神经功能缺损评分、海马CA1区NeuN含量、LC3-Ⅱ蛋白表达水平降低(P<0.05),体质量升高(P<0.05)。透射电子显微镜观察发现,干预后空白组和假手术组大鼠海马区神经元细胞结构基本完整,未发现自噬小体形成;模型组大鼠海马区神经元细胞结构被破坏,部分呈空泡样,可见自噬小体及溶酶体形成;电针组海马区神经元细胞结构较模型组改善,可见少量自噬小体及溶酶体;3-MA+电针组海马区神经元细胞结构相对完整,仅见个别自噬小体。结论早期电针长强穴可降低大鼠海马CA1区神经元中的NeuN含量及LC3-Ⅱ蛋白表达,抑制海马CA1区损伤后的神经元自噬,减轻脑损伤,从而改善HIBD大鼠神经功能。

做好初二年级学困生转化工作之我见

初二年级,为整个初中教育中承上启下的时期,也是学生各方面发展最迅速激烈的时期。这一时期,学生思想问题多,但可塑性强。做好初二年级学困生的转化工作,重点贯彻好四个字:'抓、夸、帮、友'。