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变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合基因转基因黄瓜植株的获得及鉴定 被引量:5
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作者 吴家媛 刘建国 +4 位作者 马欣荣 洪献忠 吴志刚 张剑 梁文红 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期902-906,共5页
目的:经农杆菌介导将变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合基因导入黄瓜,获得转基因黄瓜植株,为转基因可食防龋疫苗的研究提供实验基础。方法:利用双元载体pCAMBIA2301构建变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合质粒(PAcA-... 目的:经农杆菌介导将变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合基因导入黄瓜,获得转基因黄瓜植株,为转基因可食防龋疫苗的研究提供实验基础。方法:利用双元载体pCAMBIA2301构建变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合质粒(PAcA-ctxB)的植物表达载体p2355-PAcA-CTB;电转化法导入农杆菌EHA105;采用叶盘转化法转化黄瓜,转基因植物经过卡那霉素抗性筛选、GUS基因染色、PCR及Southern blot杂交分析检测目的基因鉴定。结果:成功得到转基因黄瓜植株,卡那霉素抗性筛选、GUS基因染色、PCR及Southern blot杂交分析检测证实目的基因PAcA-ctxB已整合至黄瓜基因组中。结论:获得了含有变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合基因的转基因黄瓜植株,为转基因可食防龋疫苗的进一步研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 变异链球菌 霍乱毒素 B亚单位 转基因黄瓜 农杆菌
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变异链球菌表面蛋白PAc基因A区与霍乱毒素B亚单位融合基因植物表达载体的构建 被引量:4
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作者 吴家媛 马欣荣 +7 位作者 唐琳 张绍伟 管晓燕 洪献忠 吴志刚 张剑 梁文红 刘建国 《遵义医学院学报》 2011年第4期341-343,347,共4页
目的构建变异链球菌表面蛋白PAc A区与霍乱毒素B亚单位的植物表达载体,为可食嵌合体防龋疫苗的进一步研究提供实验基础。方法从中间载体pBPC55获得含35s启动子、NOS终止子和多克隆位点的片段,定向连接到植物双元表达载体pCAMBIA2301上,... 目的构建变异链球菌表面蛋白PAc A区与霍乱毒素B亚单位的植物表达载体,为可食嵌合体防龋疫苗的进一步研究提供实验基础。方法从中间载体pBPC55获得含35s启动子、NOS终止子和多克隆位点的片段,定向连接到植物双元表达载体pCAMBIA2301上,构建重组载体p2355;通过PCR扩增从重组质粒pEAC10中获得表面蛋白PAcA区与霍乱毒素B亚单位的融合基因pacA-ctxB,克隆至重组质粒p2355中,构建植物表达载体p2355-PAcA/CTB,电转化法导入根癌农杆菌EHA105。PCR及酶切鉴定。结果 PCR扩增得到了含35s启动子、NOS终止子和多克隆位点的1.1kb大小片段,经酶切鉴定,该片段已经插入到植物双元载体pCAMBIA2301中。PCR扩增得到了pacA-ctxB基因;构建的质粒p2355-PAcA/CTB经XhoⅠ和KpnⅠ双酶切及PCR检测,均得到1.7kb大小的片段,与预计的嵌合目的基因片段大小相同。结论成功构建pacA-ctxB融合基因的植物表达载体p2355-PAcA/CTB。 展开更多
关键词 变异链球菌 植物表达载体 表面蛋白 霍乱毒素B亚单位 可食疫苗
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变形链球菌表面蛋白编码基因载体质粒pMD-pac构建 被引量:3
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作者 吴志刚 刘建国 洪献忠 《蚌埠医学院学报》 CAS 2008年第2期132-134,共3页
目的:获取变形链球菌国内临床株表面蛋白PAC编码基因pac并构建载体质粒,为构建植物表达基因载体做前期准备。方法:以国内检出率最高的变形链球菌临床分离株(血清c型)的基因组DNA为模板,通过PCR扩增获取表面蛋白PAc编码基因pac;通过T-A... 目的:获取变形链球菌国内临床株表面蛋白PAC编码基因pac并构建载体质粒,为构建植物表达基因载体做前期准备。方法:以国内检出率最高的变形链球菌临床分离株(血清c型)的基因组DNA为模板,通过PCR扩增获取表面蛋白PAc编码基因pac;通过T-A克隆构建中间载体pMD18-pac质粒,对其分析鉴定。结果:目的基因成功的连接到中间载体上。结论:获取的目的基因经测序和比对表明,其与变形链球菌表面蛋白的相关编码基因在核苷酸序列和蛋白同源性上都很高,可以作为抗原基因进一步研究。 展开更多
关键词 变形链球菌 质粒 表面蛋白抗原 基因疫苗
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创新学校健康教育的思考和实践——基于陶行知健康教育思想
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作者 洪献忠 林文胜 《生活教育》 2015年第1期23-26,共4页
陶行知非常重视健康教育,他的健康教育观不仅指向学生身体,还包括学生心理,指向知、情、意、行等方面。这是我们创新学校健康教育的思想基础。经过10多年的实践探索,取得了一些成绩。中国陶行知研究会副会长姚文忠教授评价说,传统的健... 陶行知非常重视健康教育,他的健康教育观不仅指向学生身体,还包括学生心理,指向知、情、意、行等方面。这是我们创新学校健康教育的思想基础。经过10多年的实践探索,取得了一些成绩。中国陶行知研究会副会长姚文忠教授评价说,传统的健康教育,主要是指生理的健康教育,它是基础的概念,但也可以看作生长的概念、种子的概念;歙州学校的健康教育,超越了传统的、基础的概念,同时也成为了引领学校发展的概念。虽然如此,我们认为,回顾并反思过往, 展开更多
关键词 学校健康教育 教育思想 学生心理 姚文 歙州 感恩教育 教育内容 德育模式 生活教育 校园文化构建
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