树鼩IgE高亲和力受体α亚基单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗树鼩IgE高亲和力受体α亚基(FcεRIα)的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行检测。方法:采用大肠杆菌原核表达树鼩IgE FcεRIα蛋白,经过纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合;通过ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;利用Protein A纯化单克隆抗体,Western印迹检测其特异性,间接免疫荧光及免疫组化对单克隆抗体进行分析。结果:用纯化的树鼩IgE FCεRIα蛋白免疫小鼠,选取效价高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,经过3轮亚克隆筛选,筛选出5株抗树鼩IgE FCεRIα单克隆抗体,分别命名为HC020、HC021、HC022、HC023和HC024,细胞间接免疫荧光表明5株单克隆抗体均能检测到293T细胞中表达的IgE FCεRIα,其中HC020、HC022、HC024能够通过免疫组化检测组织切片中的IgE FCεRIα。结论:制备了5株IgE FCεRIα单克隆抗体,为今后研究树鼩IgE FCεRIα奠定了基础。