塔里木马鹿腔前卵泡分离方法比较

以分离获得的腔前卵泡数量、正常卵泡率和72h体外培养存活率为指标,比较了酶消化法、梳刮法和剪碎法3种不同方法分离塔里木马鹿Cervus elaphus yarkandensis腔前卵泡的效果。结果表明:在卵巢数目相同的情况下,以酶消化法平均获得的腔前卵泡数最多,梳刮法次之,剪碎法最少,3种不同分离方法获得腔前卵泡数量之间存在极显著差异(P<0.01);梳刮法和剪碎法分离获得的腔前卵泡正常率均极显著高于酶消化法(P<0.01);梳刮法和剪碎法分离获得的腔前卵泡在体外培养24h、48h和72h后的存活率极显著和显著高于酶消化法(培养24h、48h后,P<0.01;培养72h后,P<0.05)。由此可见,梳刮法是塔里木马鹿腔前卵泡更有效的分离方法。

绵羊同期发情及冻胚移植效果观察

羊胚胎移植技术是优秀种羊扩群和引种的有效手段。在绵羊繁殖季节采用两种同期发情处理方案对150只受体羊处理,同期发情率为88.67%(133/150)。采用手术法,对其中126只受体羊进行了纯种肉羊冻胚移植,受体羊可用率为94.74%(126/133)。用B超诊断妊娠率为44.00%(55/125),产羔59只,单羔存活率93.62%(44/47),双羔存活率66.67%(8/12)。试验结果表明,用冷冻胚胎移植繁殖种羊可行。

浅谈改进羊胚胎移植技术提高受胎率的措施

本文根据作者多年从事羊胚胎移植经验,总结了羊胚胎移植手术改进方法,提高绵羊胚胎移植受胎率的措施。

应用PCR法和LAMP法鉴定牛早期胚胎性别的研究

通过设计特异性引物,优化Mg2+浓度、退火温度和循环时间等影响PCR的因素,确定了适合现场应用的PCR反应体系;46枚胚胎现场的鉴定率为87%,移植妊娠率为28%,准确率为85%,证明建立的PCR胚胎性别鉴定方法可用于生产。使用LAMP法对126枚常规胚胎和42枚性控胚胎现场鉴定,鉴定率95%,移植妊娠率33%,准确率88%,结果证明该方法可应用于牛早期胚胎性别鉴定。PCR法和LAMP法所鉴定同一样品的结果一致,说明在控制好实验条件的情况下,根据实际情况可选用这两种方法中的任何一种进行性别鉴定应用。

牛卵胞质内显微受精中第一极体位置与激活方法研究

【目的】探讨牛卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)操作中,卵母细胞第一极体位置以及受精卵化学激活方法对ICSI卵体外发育的影响。【方法】采集牛卵巢,成熟培养卵母细胞后,调整其第一极体分别位于相当于时钟6点和12点的位置,进行牛卵母细胞胞质内显微受精,以ICSI卵不进行激活处理为未激活组,分别采用乙醇、离子霉素及离子霉素联合6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)激活ICSI卵,统计ICSI卵的形态完整率、卵裂率和囊胚发育率。【结果】第一极体分别位于相当于时钟6点和12点的位置时,所获得的ICSI卵形态完整率(92.9%和94.0%)、卵裂率(37.1%和40.0%)和囊胚发育率(12.9%和12.2%)均无统计学差异(P>0.05)。未激活组ICSI卵的卵裂率较低,不能发育到囊胚;用乙醇或离子霉素激活时,ICSI卵的卵裂率(25.7%和27.6%)和囊胚发育率(3.3%和3.4%)均显著高于未激活组(7.5%和0)(P<0.05);用离子霉素与6-DMAP联合激活时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率分别为38.9%和13.9%,显著高于乙醇激活组、离子霉素激活组及未激活组(P<0.05)。【结论】对牛卵母细胞进行ICSI操作时,第一极体分别位于相当于时钟6点和12点位置时,对ICSI卵的发育无显著影响;采用离子霉素和6-DMAP联合激活,有利于ICSI卵的体外发育。

培养液中血清或其替代物对牛体外受精卵体外发育的影响

探讨在牛体外受精卵体外培养液中添加血清替代品对体外受精卵发育的影响,确定血清在SOF培养液中合适的添加浓度及添加时期,以筛选优良的牛体外受精卵体外培养液。在SOF液中分别添加10%血清(NBS)8、mg/ml牛血清白蛋白(BSA)和1 mg/ml聚乙烯醇(PVA)进行牛体外受精卵的全程培养,添加NBS组的卵裂率(66.3%)显著高于添加BSA组(51.0%)(P<0.05),极显著高于添加PVA组(47.6%)(P<0.01);添加NBS组的囊胚发育率(30.9%)显著高于添加PVA组(20.7%)(P<0.05),极显著高于添加BSA组(13.6%)(P<0.01)。在培养液中添加不同浓度(10%、5%)的NBS及无血清培养液全程培养时,3组之间卵裂率(65.6%、60.0%、58.0%)差异不显著(P>0.05);10%NBS组囊胚发育率(30.0%)极显著高于5%NBS组(17.6%)和无血清组(6.0%)(P<0.01)。5%NBS组的囊胚发育率极显著地高于无血清组(P<0.01)。在受精卵培养的最初48 h用5%NBS,之后用10%NBS培养液时,卵裂率(58.6%)和囊胚发育率(29.3%)与SOF+10%NBS全程培养组(66.3%、30.9%)差异都不显著(P>0.05)。试验结果表明,SOF培养液中添加PVA、BSA替代血清时卵裂率和囊胚发育率都明显下降,可能SOF培养液中添加血清比添加PVA或BSA更有利于牛体外受精卵的体外发育。体外培养时在SOF培养液中添加一定浓度的血清以及改变血清的添加方式,可提高牛体外受精卵体外发育效果。

牛体外受精卵与牛胎儿睾丸支持细胞体外共培养研究

【目的】研究牛胎儿睾丸支持细胞对牛早期胚胎的体外发育是否有促进作用。【方法】从屠宰场采集5-7月龄胎牛睾丸，经原代和传代培养制备牛胎儿睾丸支持细胞（sertoli cells，SCs）饲养层，对比原代和传代胎牛睾丸SCs与牛体外受精卵共培养时受精卵的发育情况；分别以4×10^4，2×10^4mL。两个密度接种传代胎牛睾丸SCs与牛受精卵体外共培养，并以培养液中无牛胎儿睾丸SCs饲养层为对照，研究体外牛胎儿睾丸支持细胞（sertoli cells，SCs）对牛受精卵体外发育的影响。【结果】与牛受精卵体外共培养时，接种密度为2×10^4mL^-1传代胎牛睾丸SCs饲养层共培养组的卵裂率（79．3％）高于原代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组（69．2％），但差异不显著（P〉0．05）；囊胚发育率（41．3％）极显著地高于原代SCs饲养层共培养组（16．7％）（P〈0．01）。接种密度为4×10^4mL^-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组的卵裂率大于接种密度为2×10^4mL^-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组和对照组，但差异不显著；胚胎发育率极显著地低于接种密度为2×10^4mL^-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组和对照组。【结论】制备的传代牛胎儿睾丸SCs饲养层，能有效促进牛体外受精卵的体外发育，提高囊胚发育率；接种的传代牛胎儿睾丸SCs饲养层密度过大，将严重影响牛体外受精卵的发育。

影响农牧区绵羊胚胎移植效果因素分析

本文根据笔者多年规模化开展羊胚胎移植工作的经验体会,就影响羊胚胎移植效果的诸因素,进行了有关供受体羊的选择、品种、年龄、胎次、体重、体况、超排方案、配种、胚胎采集、移植、供受体羊饲养管理等因素进行了分析讨论。

应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别方法优化的研究

研究的目的是优化胚胎PCR性别鉴定方法的条件,建立实用的鉴定方法。试验设计获得了牛种属和公牛特异的引物,利用聚合酶链反应(PCR)对模板DNA进行扩增,通过常规双重PCR法和巢式PCR法的比较研究,结果表明巢式PCR法大大提高了鉴定牛早期胚胎性别的灵敏度。对组织DNA样品、血样、颗粒细胞和公牛冷冻精子进行检测,结果全部与实际性别一致;对于胚胎样品,判定结果与产犊性别一致。通过批量胚胎现场的检测,证明建立的胚胎性别鉴定方法可用于生产。

牛卵母细胞的玻璃化冷冻研究

本试验通过牛卵母细胞玻璃化冷冻过程中采用载体、冷冻时卵母细胞所带颗粒细胞层数和其成熟培养时间这3个方面对牛卵母细胞的玻璃化冷冻进行了探讨。(1)不同载体的对比:玻璃OPS管和塑料OPS管冷冻效果较好。玻璃OPS管冷冻卵母细胞,解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为91.2%、41.3%和14.52%。塑料OPS管冷冻卵母细胞,解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为89.09%、40.90%和14.54%。(2)保留2￣3层颗粒细胞的卵母细胞玻璃化冷冻的冷冻效果较好,其冷冻解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为90.79%、40.13%和15.13%。(3)体外成熟培养22h的卵母细胞冷冻效果较好,其冷冻解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为94.14%、41.80%和15.23%。

三九克痢注射液治疗鸡大肠杆菌沙门氏杆菌病

由大肠杆菌、沙门氏杆菌引起的鸡的细菌性拉痢,是普遍危害养鸡业的重要疾病,笔者在治疗猪黄白痢、牛羊腹泻使用三九克痢注射液取得一定疗效的同时,又试用于鸡的大肠杆菌,沙门氏杆菌病的治疗,亦收到满意疗效,现报告如下:

奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果比较

先利用屠宰场卵巢获得的卵母细胞进行体外培养试验。在建立了培养体系获得较稳定的囊胚率的基础上,再利用具有优良乳用遗传性状的老龄奶牛进行活体采卵(OPU),获得的卵子进行体外胚胎生产,对奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果进行了比较。同时对奶牛重复OPU的效果及OPU卵子的培养天数对妊娠率的影响因素等进行探讨,试图为研究和生产建立一个高效的活体采卵体外胚胎生产方法。结果表明:(1)活体采卵获得的卵母细胞从形态以及后期的发育情况均明显差于屠宰场卵巢获得的卵子;OPU法的卵裂率、囊胚率(70.5%、18.3%)明显低于从屠宰场卵巢获得的卵子的卵裂率、囊胚率(75.1%、34.8%)(P<0.01)(。2)不同个体采集卵子数量差异明显(5.92枚/头与1.4枚/头)(P<0.05)(。3)同一头奶牛每次采卵数之间无显著差异,但有波动性变化。(4)奶牛OPU卵子经培养在第6 d或第7 d发育至囊胚的胚胎移植妊娠率高于第8 d发育至囊胚的胚胎。

犬细小病毒病与犬瘟热混合感染的诊治

犬瘟热是由犬瘟热病毒（CDV）引起的以肠炎和心肌炎综合症为特征的犬科、鼬科及一部分浣熊科动物的高度接触性传染病。犬发病率最高，当犬被犬瘟热病毒感染发病后，淋巴细胞大量损失，导致机体免疫力底下，抵抗力降低，易继发其他疾病，给养犬户带来很大的经济损失。

犬瘟见愁过敏三例

1998年8月-9月,我院使用瘟见愁治疗犬肠炎,细菌、病毒性痢疾,发生过敏三例,报告如下。病例1、2为西施犬,临床症状呕吐、下痢,诊为肠炎,8月12日上午就诊。