癌症治疗中PI3K/AKT/mTOR通路及靶向抑制剂研究进展

目的为磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路抑制剂的开发、临床应用提供参考。方法归纳PI3K/AKT/mTOR通路在多类型癌症进展中的作用,比较该通路靶向抑制剂的治疗作用。结果PI3K/AKT/mTOR通路可促进肿瘤细胞增殖、迁移,促进耐药性产生。该通路抑制剂有PI3K靶向抑制剂、AKT靶向抑制剂、mTOR靶向抑制剂和PI3K/mTOR双靶向抑制剂,可延长患者的生存期,具有一定的肿瘤抑制作用。其中,PI3K和mTOR靶向抑制剂较AKT靶向抑制剂发展相对较好,多用于乳腺癌的治疗、延缓耐药性产生等。结论PI3K/AKT/mTOR通路促进癌症发展,其靶向抑制剂具有良好的靶向抗肿瘤效果,但应进一步增强特异性和选择性,减少不良反应。

二萜类化合物药理学作用研究进展

二萜类化合物广泛存在于自然界,具有重要的生物学意义。二萜类化合物抗肿瘤活性研究较为透彻,其作用的发挥与诱导肿瘤细胞凋亡、抑制细胞增殖、直接细胞毒作用及破坏肿瘤组织血管的形成作用相关。二萜类化合物除了抗肿瘤活性外,还具有抗菌、抗病毒、抗炎及免疫抑制作用等。此外,近年来研究发现二萜类化合物尚具有降低血压、防止血栓形成等作用。二萜类化合物作用复杂,作用机制各异,本文对二萜类化合物的研究进行总结。

蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞周期及凋亡的影响

目的:研究蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞周期及细胞凋亡的影响。方法:MTT法测定蓝萼香茶菜乙素对AGZY的细胞毒作用;PI染色、流式细胞术观察蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞的IC50为0.11mmol/L,且随着蓝萼香茶菜乙素剂量增加对AGZY细胞抑制作用增强;蓝萼香茶菜乙素可以降低AGZY细胞G2/M期细胞数量,阻止细胞分裂。结论:蓝萼香茶菜乙素可阻滞AGZY细胞的生长,阻滞细胞进入G2/M期,并诱导AGZY细胞凋亡。

enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的增殖抑制作用

目的研究enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的增殖抑制活性。方法应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的细胞毒活性。结果enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株都有一定程度的抑制作用,其抑制活性呈现剂量-效应关系,其中以serrin B和nodosin效果较为显著。结论enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin是中药溪黄草拮抗白血病和结肠癌的有效成分,溪黄草具有一定的防治白血病和结肠癌的作用。

Nodosin通过Apaf-1和caspase-3诱导HepG2细胞凋亡

目的:研究传统中药提取物nodosin对人肝细胞癌Hep G2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:将nodosin设置为1. 25μmol/L、2. 5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L不同浓度组,作用于Hep G2细胞24 h后,用Hoechst 33258染色和电镜观察不同浓度的药物对细胞形态学的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用RT-qPCR检测凋亡蛋白酶激活因子1 (Apaf-1) mRNA的表达,用Western blot检测caspase-3及其前体和活化体的蛋白水平。结果:形态学结果显示,随着用药剂量的增加,细胞皱缩和细胞核偏移越明显,凋亡小体在5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L剂量组明显增多。Apaf-1 mRNA的表达增加,caspase-3及其前体的表达和cleaved caspase-3的蛋白水平随着用药剂量的增加逐渐增加(P <0. 01)。结论:Nodosin能够诱导Hep G2细胞凋亡。该作用可能是通过增加Apaf-1 mRNA的表达继之激活caspase-3实现的。

TGF-β_1对HFL-I细胞HSP47和Collagen-Ⅰ表达的影响

目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对人胚肺成纤维细胞(HFL-I)中Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ)、热休克蛋白47(HSP47)表达的影响。方法体外培养HFL-I,5 g/L TGF-β1诱导0、1、3、5 d后,Western blot法检测HSP47表达;诱导0、6、12、24、48、72 h后,RT-PCR法检测Collagen-Ⅰ及HSP47 mRNA表达。结果5 g/L TGF-β1诱导后,HFL-I细胞中HSP47蛋白表达持续增高(P<0.05);5 g/L TGF-β1诱导后12 h后,HFL-I细胞中Collagen-Ⅰ、HSP47 mRNA表达开始增加(P<0.05),于24 h时达到峰值,48 h开始下降,至72 h时,仍高于正常对照组。结论 TGF-β1可上调HSP47和Collagen-Ⅰ基因的表达,该作用可能与肺纤维化发生关系密切。

nmhaFGF对肾脏缺血再灌注损伤大鼠不同时间血尿素氮肌酐和尿蛋白含量的影响

目的研究非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法30只大鼠随机分成假手术组、模型组和nmhaFGF组3组,每组10只。分别于术后4 h、8 h、16 h、24 h、48 h、72 h和7 d检测大鼠血液中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和尿液中蛋白含量的变化。结果模型组大鼠手术后8 h起血液中BUN和Cr含量明显高于假手术组(P<0.05),24 h血液中BUN和Cr含量达到高峰,7 d后BUN和Cr下降。模型组尿液中蛋白含量与假手术组相比各时间均明显升高,24 h达到峰值。nmhaFGF组16 h和24 h时血液中BUN、Cr含量和尿蛋白含量与模型组相比显著下降(P<0.01)。结论nmhaFGF能够改善肾脏缺血再灌注损伤引起的肾功能障碍,从而对肾脏缺血再灌注损伤起到保护作用。

水的酸碱度对Bradford法检测蛋白质含量的影响

目的探讨水酸碱度的变化对Bradford法检测蛋白质含量的影响。方法用pH分别为4.0(pH=4.0组)、7.0(pH=7.0组)和10.0(pH=10.0组)的双蒸水配置Bradford法所需要的试剂,绘制标准曲线,检测标准蛋白浓度,比较水的酸碱度的变化对标准曲线的影响。结果pH=4.0组和pH=7.0组的标准曲线拟合度较pH=10.0组标准曲线拟合度明显增高;pH=4.0组和pH=7.0组检测的蛋白质含量与已知蛋白浓度相比差别无统计学意义(P>0.05);pH=10.0组检测蛋白质的含量与已知蛋白浓度、pH=7.0组和pH=4.0组相比差别均有统计学意义(P<0.05),pH=7.0组和pH=4.0组检测蛋白质含量的准确性高于pH=10.0组。结论双蒸水酸碱度的变化可以影响Bradford法检测蛋白质含量的精确度。

Serrin B和Nodosin对HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株的毒性作用

目的探讨天然药物Serrin B和Nodosin对人早幼粒白血病细胞株HL60、人胃腺癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株LOVO、人胶质瘤细胞株U87、人肺腺癌细胞株AGZY的毒性作用。方法将对数期生长的HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株接种于96孔板中,细胞贴壁后,分别加入Serrin B或Nodosin,使药物的终浓度分别为0.00、1.25、2.50、5.00、10.00、20.00μmol.L-1,24 h后用四甲基偶氮唑盐法检测细胞株的死亡率。结果 Serrin B对HL60、SGC7901、LOVO、U87和AGZY细胞株均有较强的毒性作用(P<0.01),且其毒性作用呈现剂量-效应关系。Nodosin对HL60、SGC7901、LOVO、U87细胞株具有较强的毒性作用(P<0.05,P<0.01),而对AGZY细胞株无明显毒性作用。结论 Serrin B和Nodosin是中药溪黄草抗癌作用的有效成分,为人类多种肿瘤治疗的新药研究开发提供新的思路。

川芎嗪对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨川芎嗪(LT)对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法28只SD大鼠随机分为4组,(每组7只),分别为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组、治疗组。采用双侧肾蒂夹闭的肾缺血再灌注损伤模型,测定肾组织丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,同时测定血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,并在光镜下观察肾组织病理变化。结果肾缺血再灌注组与对照组和假手术组相比,MDA、BUN和Cr含量明显升高(P<0.01),SOD活性下降(P<0.05),治疗组MDA、BUN和Cr含量下降(P<0.05),SOD活性增强(P<0.05)。结论川芎嗪对急性肾缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与抗自由基损伤有关。

胰岛素抵抗伴NAFLD小鼠模型肝细胞瘦素表达及其意义

目的 观察胰岛素抵抗伴非酒精性脂肪肝（NAFLD）小鼠肝脏细胞中瘦素表达量变化及其与血清中胰岛素和游离脂肪酸水平的相关性。方法 80只昆明种小鼠分为高脂组40只和对照组40只,高脂组采用高脂饲料喂养,饮用含1.8%甲硫氨酸的自来水;对照组喂养正常标准饲料,饮用普通自来水。两组分别于15、30、45、60 d分别处死10只小鼠,采集心脏动脉血2 m L,ELISA法检测血清胰岛素和游离脂肪酸水平,半定量RT-PCR法测定肝细胞瘦素基因的相对表达量。结果 15 d时高脂组胰岛素水平高于对照组（P〈0.05）,30 d时血清游离脂肪酸含量明显高于对照组（P〈0.01）;肝脏细胞瘦素基因表达量随饲养时间延长而增高;15-30 d增幅最明显。结论 瘦素抵抗与胰岛素抵抗共同参与了NAFLD的发病过程,瘦素抵抗可能是胰岛素抵抗伴NAFLD发病的重要机制。

溪黄草乙素对人视网膜母细胞瘤细胞生长的影响

目的研究溪黄草乙素对人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)细胞生长的影响。方法MTT法测定不同浓度(5μmol.L-1、10μmol.L-1、20μmol.L-1、40μmol.L-1和80μmol.L-1)和不同时间(分别作用24h和48h)溪黄草乙素对人Rb细胞株增殖的影响;碘化丙啶染色,流式细胞术观察溪黄草乙素对Rb细胞周期及细胞凋亡的影响。结果溪黄草乙素各个剂量组对Rb细胞的增殖均有显著抑制作用,OD值随溪黄草乙素浓度升高而下降,抑制率随浓度增加而增加。溪黄草乙素对Rb细胞株的IC50为130μmol.L-1,且随着溪黄草乙素剂量增加对Rb细胞株抑制作用增强。不同剂量组(对照组、5μmol.L-1组、10μmol.L-1组、20μmol.L-1组、40μmol.L-1组、80μmol.L-1组)溪黄草乙素作用Rb细胞24h后,细胞凋亡率分别为:(1.07±0.03)%、(5.13±0.82)%、(8.67±1.20)%、(14.39±2.07)%、(26.45±3.01)%、(34.18±1.25)%;作用Rb细胞48h后,细胞凋亡率分别为:(2.36±0.27)%、(6.49±1.15)%、(11.90±1.54)%、(19.21±2.66)%、(37.10±3.62)%、(47.55±3.19)%。表明溪黄草乙素作用Rb细胞24h和48h后Rb细胞的凋亡率在各个剂量组均显著升高,也呈现一定的剂量-效应关系,提示溪黄草乙素对Rb细胞凋亡率的影响随着剂量增加而升高。结论溪黄草乙素可阻滞细胞进入G2/M期,进而诱导Rb细胞株凋亡。

非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子对急性肾功能衰竭大鼠血尿素氮、肌酐和尿蛋白含量的影响

目的研究非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对大鼠急性肾功能衰竭的保护作用。方法腹腔注射氯化汞复制大鼠急性肾功能衰竭模型,5 min后,nmhaFGF组经舌静脉注射nmhaFGF 40μg.kg-1,模型组经舌静脉注射等剂量的生理盐水,对照组大鼠麻醉后注射生理盐水,在30 min、90 min、24 h、48 h取血检测大鼠血液中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和尿液中蛋白含量的变化。结果模型组大鼠注射氯化汞后48 h血液中BUN含量达到高峰(P<0.01),Cr含量以及尿蛋白含量在24 h达到高峰(P<0.01)。nmhaFGF组24 h和48 h血液中BUN和Cr与模型组相比显著下降(P<0.01,P<0.05);尿蛋白含量在24 h明显下降(P<0.05)。结论nmhaFGF能够改善氯化汞诱导的大鼠急性肾功能衰竭。

nmhaFGF和haFGF对放线菌素D诱导的人视网膜色素上皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenic human acidic fibroblast growth factor,nmhaFGF)和haFGF对放线菌素D诱导的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞凋亡的保护作用,同时探讨2种浓度放线菌素D诱导hRPE细胞凋亡模型的复制条件。方法用0.25mg·L-1和0.50mg·L-1放线菌素D诱导hRPE细胞凋亡,用琼脂糖凝胶电泳检测2种浓度放线菌素D诱导hRPE细胞DNA断裂情况,并用流式细胞仪检测放线菌素D诱导hRPE细胞的凋亡率,确定诱导hRPE细胞凋亡的条件,分别以0.02mg·L-1、0.06mg·L-1、0.18mg·L-1、0.54mg.L-1和1.62mg·L-1的nmhaFGF和haFGF预作用于hRPE细胞24h,并设置正常细胞组和凋亡模型细胞组,观察nmhaFGF和haFGF对hRPE细胞凋亡的作用。结果0.25mg·L-1和0.50mg·L-1放线菌素D诱导hRPE细胞凋亡16h后细胞凋亡率分别为32.68%和53.27%,琼脂糖凝胶电泳结果显示0.25mg·L-1放线菌素D诱导细胞凋亡条带清晰,而0.50mg·L-1放线菌素D诱导hRPE细胞凋亡条带模糊,因此0.25mg·L-1放线菌素D作用hRPE细胞16h是诱导hRPE细胞凋亡的最佳条件。在nmhaFGF各剂量组中,随着nmhaFGF浓度升高,hRPE细胞凋亡率明显降低,其中1.62mg·L-1剂量组细胞凋亡率最低,为(11.49±0.50)%;相同浓度haFGF各剂量组细胞凋亡率也呈现不同程度的降低,但随着haFGF剂量升高,凋亡率下降的趋势不如nmhaFGF剂量组明显,在haFGF剂量组中,1.62mg·L-1剂量组细胞凋亡率最低,为(14.35±1.02)%,nmhaFGF和haFGF对hRPE细胞凋亡率的下降作用经比较差异无统计学意义。结论haFGF和nmhaFGF都可以发挥对hRPE细胞凋亡的保护作用。该保护作用可能是通过发挥其非促分裂活性实现的。

nmhaFGF对过氧化氢诱导的NRK52E细胞凋亡的拮抗作用

目的:研究过氧化氢诱导NRK52E细胞凋亡模型的制作方法,探讨非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenic human acidic fibroblast growth factor,nmhaFGF)对过氧化氢诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E细胞)凋亡是否具有拮抗作用。方法:用MTT、Hoechst33342染色以及流式细胞仪检测确定诱导细胞凋亡的过氧化氢的浓度,制作NRK52E细胞凋亡模型,以不同浓度的nmhaFGF作用于凋亡细胞,并以haFGF作为对照,观察nmhaFGF对NRK52E细胞凋亡的影响。结果:0.4mmol/L过氧化氢作用NRK52E细胞18h是诱导NRK52E细胞凋亡的最佳条件。nmhaFGF0.01、0.03、0.10、0.30、1.00mg/L剂量范围,随着nmhaFGF浓度升高,细胞凋亡率明显降低,而相同浓度haFGF各剂量组细胞凋亡率呈现不同程度的降低,但haFGF剂量组量效关系不明显。结论:切除促分裂序列的haFGF可以发挥对NRK52E细胞凋亡的保护作用,该保护作用可能是通过其非促分裂活性实现的。

nmhaFGF对肾脏缺血再灌注损伤大鼠不同时间SOD、MDA、BUN、Cr和尿蛋白含量的影响

目的:研究非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法:30只大鼠随机分成3组,每组10只。假手术组:切除动物左侧肾脏,暴露右侧肾脏,分离输尿管,不夹闭肾动脉,经舌静脉注射生理盐水1.5ml;模型组:模型制作成功后舌静脉注射生理盐水1.5ml;nmhaFGF组:模型制作成功后经舌静脉注射40μg/kg的nmhaFGF1.5ml。术后4h、8h、16h、24h、48h、72h和7d检测大鼠血液中SOD、MDA、BUN、Cr以及尿液中蛋白含量的变化。结果:模型组16h血液中SOD开始明显下降,MDA明显上升,24hSOD下降至最低点,MDA含量达到最高点;8h血液中BUN和Cr含量明显高于假手术组,24h血液中BUN和Cr含量达到高峰,7d后BUN和Cr下降。模型组尿液中蛋白含量与假手术组相比各时间段均明显升高,24h达到峰值。nmhaFGF组16h和24h血液中SOD、MDA、BUN和Cr与模型组相比显著下降;尿蛋白含量在24h下降最为显著。结论:nmhaFGF具有抗肾脏缺血再灌注损伤自由基的作用和改善肾小球功能的作用,并且该作用呈现一定的时效关系。

Nodosin对HepG2细胞株的增殖抑制作用及对Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究传统中药提取物nodosin对体外培养的人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用,并探讨其对Bcl-2和Bax表达的影响。方法:将不同浓度组(1.25、2.5、5、10和20μmol/L)nodosin预作用于HepG2细胞24 h,用倒置显微镜观察nodosin对细胞形态学的影响,采用MTT法检测细胞生长抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡率和Bcl-2、Bax的表达。结果:形态学结果显示,随着nodosin剂量的增加,细胞皱缩和漂浮细胞数量增加,流式细胞术检测结果显示随着nodosin药物浓度的增加,HepG2细胞凋亡率增加。Bax的表达随着nodosin剂量的增加逐渐增加,Bcl-2的表达逐渐减少。结论:Nodosin能抑制HepG2细胞株的增殖,呈明显的剂量依赖性,对HepG2细胞的抑制作用是通过增加Bax的表达以及降低Bcl-2的表达诱导细胞凋亡实现的。

人酸性成纤维细胞生长因子对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞坏死的保护作用

目的研究人酸性成纤维细胞生长因子(human acidic fibroblast growth factor,haFGF)对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞的保护作用。方法用0.2mmol.L-1过氧化氢培养hRPE细胞36h制作hRPE细胞坏死模型为模型组,用1mg.L-1haFGF预培养hRPE细胞12h、24h、48h,并设置空白对照组,用台盼蓝染色在倒置显微镜下观察细胞坏死情况,用MTT法检测haFGF预作用hRPE细胞不同时间细胞的死亡率,并用8g.L-1琼脂糖凝胶电泳检测haFGF不同时间对hRPE细胞完整性的影响。结果模型组细胞死亡率为(36.97±2.81)%,空白对照组细胞死亡率为(1.05±0.04)%,haFGF预作用细胞12h、24h、48h细胞死亡率分别为(32.50±4.06)%、(19.77±3.68)%、(26.45±3.19)%。其中,模型组与空白对照组细胞死亡率相比、haFGF预作用24h与模型组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.01),而haFGF预作用12h、48h细胞死亡率与模型组相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。台盼蓝染色结果显示haFGF预作用细胞24h,hRPE蓝染细胞核数明显减少,而预作用12h染色细胞核数减少不显著,预作用48h蓝染细胞核数显著增加。琼脂糖凝胶电泳显示:模型组细胞DNA呈现"涂布"状,说明细胞坏死明显,haFGF预作用细胞24h"涂布"状基体消失,提示hRPE细胞DNA完整性尚好,而预作用12h和48hDNA"涂布"状仍明显存在。结论1mg.L-1的haFGF可以显著拮抗过氧化氢对hRPE细胞的损伤,预作用24h时haFGF对hRPE细胞的保护作用最佳。

活血通腑方抗实验性肠粘连作用及机制研究

目的 观察活血通腑方对肠粘连的治疗效果,探讨其对肠粘连防治作用的机理.方法 取SD雄性大鼠60只,随机分为6组：对照组、模型组、活血通腑方高、中、低剂量组、地塞米松磷酸钠阳性对照组.除对照组外,其余各组大鼠均制备肠粘连模型.对照组和模型组腹腔注射生理盐水,地塞米松组腹腔注射地塞米松磷酸钠（10mg/kg）,活血通腑方低、中、高剂量组灌胃给予活血通腑方（0.65、1.3、2.6 g/100 g）,连续给药1周.各组于术后第8天取血,ELISA法测定血清IL-6、IL-1β和TNF-α含量;取粘连组织,匀浆后试剂盒检测TGF-β1、CTGF的含量,同时记录大鼠肠粘连级别.RT-PCR检测粘连组织中FN mR-NA的表达.Western blot检测p-Smad3的蛋白水平.结果 模型组血清IL-1β和TNF-α含量增高,FN mRNA的表达增加,TGF-β1、CTGF含量增高.与模型组相比,活血通腑方低、中、高剂量组的肠粘连程度明显减轻,血清IL-1β和TNF-α及粘连组织中TGF-β1和CTGF含量明显下降（P＜0.05～0.01）,FN mRNA和p-Smad3表达降低（P＜0.05～0.01）.结论 活血通腑方可减轻肠粘连的程度,对肠粘连具有防治作用.

川芎嗪对实验性肺纤维化肺泡巨噬细胞释放肿瘤坏死因子的影响

目的探讨川芎嗪防治大鼠肺纤维化的机制。方法将48只SD大鼠一次性气管内注入博莱霉素A5(BLMA5)制备肺纤维化模型,随机分为模型对照组及实验组各24只,在实验的d3、d7、d14、d28分批处死后进行支气管肺泡灌洗并收集灌洗液(BALF);另取8只为空白对照组,于实验的d28一次性处死计数细胞总数及分类计数,采用ELISA法测定肺泡巨噬细胞(AM)培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)水平。结果模型对照组各期BALF细胞计数及AM培养上清液TNFα含量较空白对照组明显增高(P<0.05,P<0.01),实验组较模型对照组明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论抑制TNFα释放可能是川芎嗪防治大鼠肺纤维化的机制之一。