痰湿阻肺型COPD大鼠模型的构建及代谢组学分析

目的构建痰湿阻肺型COPD大鼠模型,并应用代谢组学技术揭示其代谢特征。方法采用烟熏联合LPS气道滴注、强迫游泳和隔日禁食的方式构建痰湿阻肺型COPD大鼠模型,通过观察大鼠行为变化,测定体重、肛温、血液指标、IL-6、IL-1β、TNF-α含量,观察组织病理形态学变化对该模型进行评价;应用LC-MS技术检测并筛选出正常组与模型组大鼠的血浆差异代谢物,进行通路富集分析。结果与正常组相比,模型组大鼠出现不同程度的咳嗽、喘息、精神萎靡、行为倦怠、毛色干枯、体重减轻、饮水增加、体温升高、粪便稀溏、舌苔肥大白滑;外周血中白细胞数和淋巴细胞数显著升高;BALF中IL-6、IL-1β、TNF-α含量显著升高;肺组织中炎性细胞浸润明显、肺泡腔体大小不一,结肠、十二指肠、回肠粘膜局部脱落;正常组与模型组间共有116个差异代谢物,主要涉及氨基酸生物合成和代谢、维生素消化吸收与代谢、脂质及类脂质合成与代谢等代谢通路。结论本研究提供了一种成功构建痰湿阻肺型COPD大鼠模型的方法及其相应评价体系,并初步揭示了该模型的主要代谢特征。

双氢青蒿素与火把花根配伍对佐剂性关节炎模型大鼠的保护作用

目的 研究双氢青蒿素与火把花根配伍对佐剂性关节炎模型大鼠的保护作用及其机制。方法 大鼠随机分为正常组、模型组、双氢青蒿素+火把花根配伍组(0.05 g/kg+3.75 g/kg)、双氢青蒿素组(0.1 g/kg)、火把花根组(7.5 g/kg),采用完全弗氏佐剂诱导大鼠关节炎模型。观察双氢青蒿素与火把花根配伍对佐剂性关节炎模型大鼠足肿胀、踝关节组织病理变化,酶联免疫吸附(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL-1β、IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶1(MMP-1)水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测足跖关节滑膜组织VEGFA、MMP-1及巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)蛋白表达情况,RT-qPCR检测足跖关节滑膜组织VEGF、MMP-1、MIF mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠左后足、右后足关节肿胀率和关节指数,血清炎症细胞因子水平,关节滑膜组织VEGF、MMP-1、MIF mRNA及蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,配伍组大鼠给药第21天左后足、右后足关节肿胀率和关节指数,血清IFN-γ、VEGF、MMP-1水平,关节滑膜组织VEGF、MMP-1、MIF mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论 双氢青蒿素与火把花根配伍对佐剂性关节炎模型大鼠具有治疗作用,其机制可能是通过抑制VEGF、MMP-1、MIF表达,降低炎症因子水平而发挥作用。

大鼠棉球肉芽肿干燥时长规范化的实验研究

目的:解决大鼠棉球肉芽肿干燥时长的规范化问题,为相关研究人员提供参考。方法:复制大鼠植入棉球模型,随机分3组给药后,称棉球湿重(0 h),干燥6、9、12、23、24 h各称1次棉球重量,计算不同时间点肉芽重量和水分蒸发量(不同干燥时间点之间水分蒸发量和不同干燥时间点水分累计蒸发量),以期揭示不同干燥时长对统计学显著性影响的客观规律。结果:不同干燥时长对实验数据统计结果的显著性产生了影响,各组均在23～24 h水分蒸发量趋于稳定。结论:大鼠植入棉球肉芽肿干燥时长的规范建议为:植入棉球20 mg,60℃干燥23～24 h。

昆明山海棠提取物对新西兰兔的胚胎-胎仔发育毒性研究

目的:研究昆明山海棠提取物对妊娠动物、胚胎及胎仔发育的影响。方法:取交配成功的新西兰雌兔,按体质量随机区组法分为溶剂对照组、阳性对照组(环磷酰胺,20 mg/kg)和昆明山海棠提取物高、中、低剂量组(15.0、7.50、3.75 g/kg,以生药量计),每组均至少18只。溶剂对照组和昆明山海棠提取物各剂量组雌兔在妊娠第6~18天灌胃水或相应昆明山海棠提取物药液,5 mL/kg,每天1次;阳性对照组雌兔在妊娠第10~13天于颈部皮下注射环磷酰胺,1 mL/kg,每天1次。依据《药物生殖毒性研究技术指导原则》相关要求,在实验期间观察并记录雌兔的一般情况、体质量和摄食量,并于妊娠第28天时对其实施安乐死,解剖后观察并记录其主要脏器、带胎子宫、胎盘子宫、胎盘、卵巢以及着床腺、吸收胎、死胎、活胎、黄体等相关指标,并对胎仔进行体质量、外观形态、内脏和骨骼发育等相关指标的检查。结果:与溶剂对照组比较,昆明山海棠提取物各剂量组孕兔的体质量、体质量增长、摄食量、主要脏器,孕兔妊娠、生殖功能以及胚胎形成和胎仔的生长发育、外观形态、内脏和骨骼发育等相关指标均未见明显异常改变(P>0.05);阳性对照组上述指标均有显著变化(P<0.05),表现出明显的孕兔母体毒性以及胚胎和胎仔发育毒性。结论:昆明山海棠提取物在剂量为3.75~15.00 g/kg(以生药量计)时对新西兰兔无明显母体毒性、胚胎或胎仔发育毒性。

UPLC-MS/MS法测定犬血浆中的雷公藤次碱及体内药动学研究

目的建立超高效液相-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定犬血浆中的雷公藤次碱的浓度,并用于雷公藤次碱的体内药代动力学研究。方法色谱柱为ACE Super C18柱(2.1×100 mm id,5μm,菲罗门),以2 mM醋酸铵(0.2%甲酸)-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为350μL·mL^-1,柱温30℃,进样量2μL。以雷公藤春碱为内标,血浆样本前处理后,采用ESI-Positive-MRM模式,进样检测。将Beagle犬分为高中低剂量组(400、200、100μg·kg^-1),给药后测定不同时间点犬血浆中雷公藤次碱的浓度,采用DAS3.0软件对雷公藤次碱药时曲线进行拟合,并计算药代动力学参数。结果建立的UHPLC-MS/MS法在5.0-250 ng·mL^-1范围内雷公藤次碱色谱响应与浓度相关性良好,定量限为4.94 ng·mL^-1,雷公藤次碱及内标的保留时间分别为2.99、2.73 min,该方法无明显的离子抑制或增强效应,批内批间精密度及准确度RSD均小于15%,提取回收率在82.86%^-112.76%之间,稳定性各项数据显示中、高浓度RSD均小于15%,低浓度RSD均小于20%,均符合要求。雷公藤次碱吸收较快,在Beagle犬体内的系统暴露随剂量的增大而增加,有呈比例增加的趋势;其消除与性别有关,与剂量无关。结论该检测方法灵敏度高、专属性强、准确度良好,适用于犬血浆中雷公藤次碱的浓度测定及其药动学研究。

雷公藤红素遗传毒性研究

目的 观察雷公藤红素的遗传毒性,为探讨其安全性提供实验依据。方法 采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验),计数回复突变菌落数;中国仓鼠肺细胞(CHL)体外染色体畸变实验,观察染色体结构畸变类型并计算畸变率;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验,计算小鼠股骨骨髓细胞微核率。结果 Ames试验在0.32~200μg/皿受试剂量下,在有或无S9代谢活化系统的条件下,受试物对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97a、TA98、TA100、TA102及TA1535所诱发的回复突变菌落数均未超过自发回复突变菌落数的2倍,亦无剂量相关性,结果阴性;体外培养CHL细胞染色体畸变实验中,37.5~300μg/mL(暴露4 h)以及22.5~180μg/mL(暴露24 h)的受试物对加或不加S9代谢活化系统培养的CHL细胞染色体畸变率无明显影响,结果阴性;小鼠骨髓微核实验受试物以12.4、25、50、100 mg/kg剂量给药3 d,每天1次,各剂量组的微核率差异不显著。结论 雷公藤红素对鼠伤寒沙门氏菌无致突变性,对哺乳动物培养细胞染色体无致畸变作用,也无诱发骨髓嗜多染红细胞微核形成的作用。雷公藤红素不具有潜在的遗传毒性。

双氢青蒿素与火把花配伍对迟发型超敏反应模型小鼠p-p38 MAPK及ICAM-1表达的影响

研究双氢青蒿素与火把花配伍对迟发型超敏反应小鼠的免疫抑制作用及可能的作用机制。通过建立迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH)小鼠模型,观察双氢青蒿素与火把花配伍对DTH小鼠的免疫抑制效应;苏木素-伊红(HE)染色观察耳组织病理学改变及单核细胞浸润程度;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中γ干扰素(interferon,IFN-γ)水平;免疫组化法检测小鼠右耳细胞黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)表达水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测右耳磷酸化p38丝裂酶原激活蛋白激酶(p38 phospho mitogen activated protein kinase,p-p38 MAPK)蛋白的活性表达情况。结果显示,与正常组比较,模型组小鼠耳肿胀度、胸腺/脾脏指数、单核细胞浸润计数及浸润程度明显升高,血清IFN-γ含量显著升高;与模型组比较,双氢青蒿素与火把花配伍组小鼠耳肿胀度、胸腺/脾脏指数显著降低,单核细胞浸润计数及浸润程度明显减轻,血清中IFN-γ含量显著降低,右耳p-p38 MAPK和ICAM-1蛋白表达水平显著下调。表明青蒿素与火把花配伍能够明显抑制DTH反应,其可能通过抑制p38 MAPK磷酸化活性的表达,调节相关炎症因子IFN-γ的产生和分泌,进一步降低ICAM-1的表达,从而发挥免疫抑制作用。

昆明山海棠对大鼠睾丸功能相关酶活性的影响

目的研究昆明山海棠染毒对大鼠睾丸功能相关酶的影响。方法 80只SD雄性大鼠随机分为正常对照组及5.0、10.0和20.0 g/kg 3个染毒组,连续灌胃3个月。于染毒1个月、2个月、3个月,测定睾丸酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸脱氢酶同工酶(LDH-X)、琥珀酸脱氢酶(SDH)和ATP酶(ATPase)活性。结果昆明山海棠染毒后,大鼠睾丸ALP、LDH活性升高,LDH-X、SDH活性降低,ACP和ATPase活性先降低后升高。结论昆明山海棠可导致大鼠睾丸功能相关酶活性明显异常。

鸡矢藤提取物对幼龄厌食症模型大鼠的影响

目的:研究鸡矢藤提取物对幼龄厌食症模型大鼠的治疗作用及可能的作用机制。方法:采用特殊饲料饲养,构建幼龄厌食症模型大鼠,观察鸡矢藤提取物10、20、30 g/kg对动物体质量、体质量增长、摄食量、胃肠动力的影响;Elisa法检测血清中胃肠激素胃动素(MTL)、胃泌素(GAS),脑肠肽饥饿素(Ghrelin)、β-内咖肽(β-EP)、生长抑素(SS)含量;免疫组织化学法检查结肠组织Cajal间质细胞(ICC)C-kit蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组动物体质量、体质量增长、摄食量、胃肠动力、MTL、GAS、Ghrelin、β-EP含量明显降低,SS明显升高,结肠C-kit蛋白表达降低(P<0.01)。鸡矢藤提取物30 g/kg可使动物体质量、体质量增长、摄食量、胃肠动力增加、MTL、GAS、Ghrelin、β-EP含量增加,SS含量显著降低,结肠C-kit蛋白表达增加(P<0.05或者P<0.01)。结论:鸡矢藤提取物30 g/kg对幼龄厌食症模型大鼠有明显治疗作用,其作用机制可能与降低脑肠肽SS含量、促进Ghrelin、β-EP分泌,MTL、GAS胃肠激素释放,调节ICC细胞C-kit蛋白的表达,改善胃肠动力有关。

甲基斑蝥胺片对Beagle犬尿液微量蛋白和尿酶的影响

目的:探讨甲基斑蝥胺片对Beagle犬肾毒性以及对其尿液微量蛋白和尿酶的影响。方法:24只Beagle犬,雌雄各半,随机分4组,每组6只,即阴性对照组(空白片)、甲基斑蝥胺片6.11,12.21,24.42 mg·kg-1剂量组,连续口服给药30 d,每天1次。药物组及对照组Beagle犬在给药后1,2,3,4周,进行新鲜尿液采集,将尿液进行尿常规检测;给药第15,30天检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)以及钠、钾、氯电解质;给药第15,30天检测尿液微量白蛋白(m Alb)、肾脏损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、丛生蛋白(clusterin)、β2-微球蛋白(β2-MG)、α1-微球蛋白(α1-MG)、丙氨酸氨肽酶(AAP)和免疫球蛋白Ig G。结果:与对照组相比,各剂量组尿液中尿蛋白和白细胞增加;连续15 d口服甲基斑蝥胺,各剂量组m Alb均升高,其中高剂量组KIM-1,NGAL,clusterin,NAG和AAP含量均明显升高,中、低剂量组未见统计学差异,同时血SCr和BUN未见明显异常;连续30 d给药后,各剂量组m Alb,KIM-1,clusterin,NAG,AAP均升高,呈量效关系,其中高剂量组NGAL及β2-MG含量明显升高。以上指标的含量均随着剂量的增加及时间的延长而明显升高,与血清中BUN,SCr呈相关性,提示尿液m Alb,KIM-1,clusterin,NAG和AAP指标,能够灵敏反映微量尿蛋白和尿酶的变化。结论:甲基斑蝥胺片具有一定的肾脏毒性,尿液m Alb,KIM-1,clusterin,NAG和AAP指标可做为评价甲基斑蝥胺早期肾毒性的生物标志物。

火把花根片对SD大鼠围产期毒性的试验研究

目的:观察火把花根片对孕期、哺乳期的SD大鼠及子代生长发育和生殖功能的影响。方法:试验设4组,即火把花根片7.5、15.0、30.0 g生药/kg和溶媒对照组(纯化水),各组雌鼠从妊娠D15至子代(F1代)大鼠离乳(出生后D21)灌胃给药,每天1次;对亲代的生殖能力和子代的生长发育、生殖能力进行观察。结果:给药后亲代雌鼠和子代大鼠一般状况良好,体重、摄食量无异常变化;亲代雌鼠生殖功能、哺乳、胚胎发育,子代大鼠生理发育、反射机能、行为学习、生殖功能等指标均未见异常(P>0.05)。结论:火把花根片7.5 g生药/kg^30.0 g生药/kg对亲代大鼠的妊娠、哺乳、胚胎和子代大鼠生长发育、生殖能力未见明显毒性。

糖尿病大血管病变内皮功能障碍的作用机制及现代中药的研究进展

内皮功能障碍(ED)被认为是血管病变发展中的早期事件之一。探索内皮功能障碍机制对于研究糖尿病大血管病变的发展有积极意义。本文主要从氧化应激、炎症、内质网应激三个方面阐释ED发生发展机制,并总结了近年来中药在防治2型糖尿病大血管病变内皮功能方面的研究进展,为进一步分析中药作用机制及探索2型糖尿病大血管病变药物探索新思路。