重组人Dll4真核载体的构建及其在CHO细胞中的表达

PCR法扩增rh Dll4基因片段,用EcoR I和Not I双酶切后克隆到真核载体p CA中,并对其进行双酶切和测序鉴定;用电转法将真核载体导入CHO细胞中,并利用Western blot法检测rh Dll4在CHO细胞中的表达水平。经双酶切和测序验证,成功构建p CA-rh Dll4真核表达载体。Western bolt验证表明,rh Dll4基因在CHO细胞中正常表达。经镍柱亲和层析纯化后,rh Dll4蛋白纯度达95%以上。MTT法检测,rh Dll4可以有效地抑制HUVEC增殖;同时可以促进Notch1受体的切割,表明所表达的rh Dll4蛋白具有生物学功能,为本实验下一步抗rh Dll4单克隆抗体的筛选奠定了基础。

血管内皮生长因子受体2胞外区3(KDR3)血管抑制活性研究

血管内皮生长因子(VEGF)是一种重要的血管生成调节因子。血管内皮生长因子受体2(VEGFR2,人VEGFR2也称为Kinase insert domain-containing receptor,KDR)是VEGF的特定膜受体之一。血管内皮生长因子阻断剂可以通过阻断VEGF-VEGFR2信号通路来调节重要的抑癌过程。目前尚没有研究VEGFR2胞外3区(KDR3)抑制血管活性的文献。因此,该研究旨在用大肠杆菌表达可溶性KDR3,并研究其抑制血管生成的活性。采用表面等离子体共振(SPR)技术检测到可溶性表达KDR3与VEGF16 5之间的平衡解离常数为54 nmol/L。采用划痕损伤修复实验来证明KDR3能够显著抑制EA.hy926细胞的迁移能力。最后通过鸡胚尿囊膜实验表明,KDR3在体内同样能够抑制新生血管生成。因此,该文初步论证外源性KDR3作为一种血管内皮生长因子阻滞剂的能力。