土壤细菌DNA提取及多样性分析的T-RFLP方法

获得高质量的土壤总DNA是土壤细菌生态学的关键步骤之一。实验通过综合应用两个试剂盒(Soilmaster kit和DNA IQ^(TM)系统)的优点进行土壤样品总DNA的提取,结果证明该方法是一种快速、有效、灵敏、稳定的土壤DNA提取方法。另外尝试将16S rDNA序列和T-RFLP(Terminal restriction fragment length polymorphism)技术引入土壤细菌DNA群落多样性的研究中,证明T-RFLP是一种有力的土壤细菌多样性分析工具。

应用AFLP检测大麻遗传多样性

目的筛选对于大麻多态性好的AFLP引物标记来区分大麻品种。方法利用AFLP技术用55对引物组合对12个大麻地域品种进行初筛。结果选出5对多态性好的引物组合进行了遗传多样性研究。每对AFLP引物组合扩增出47～76条带,共获得285条带,其中多态性条带为99条以及10条品种特异带。结论AFLP对于大麻具有很高的分辨率,为今后深入地研究大麻植物遗传多样性奠定了很好的基础。

检验人精浆特异蛋白P_(30)免疫胶体金试剂条的研制

目的制备用于检验人精浆特异蛋白P30—主要是来自法医学案件的免疫胶体金层析试剂条。方法选取针对不同抗原决定簇的抗P30单克隆抗体细胞株,并制备其小鼠腹水,分离纯化单克隆抗体。制备胶体金并以纯化抗体包被,制成免疫胶体金,以免疫胶体金浸泡玻璃纤维。选取适宜的硝酸纤维素膜并于其上不同位置以未金标的另一株P30单克隆抗体和羊抗鼠IgG包被。搭建试剂条并检测其灵敏度和特异性。结果所制成的试剂条灵敏度至少可达4ng/ml;对6人份混合的人精液物质在稀释20万倍后仍出阳性结果,且无非特异性反应。结论检验人精浆特异蛋白P30的免疫胶体金试剂条可对嫌疑人精物质做出排查,有利于法医物证检验。

模板DNA磁珠提取法

生物检材的DNA分析结果取决于对检材DNA的提取与获得.DNA提取的方法很多,如常规采用的有机酚-氯仿提取法和Chelex-100提取法.

不同温度焚烧对成人股骨16个基因位点的影响

目的：探讨不同温度焚烧后骨骼DNA浓度的变化以及16个基因位点的存留情况。方法：常压下以100-500℃对30例成人股骨进行焚烧，对其存留DNA进行浓度测定，用Identifiler^TMPCR试剂盒进行荧光标记和复合扩增，ABI3100xl Genetic Analyzer软件对DNA16个基因位点进行检测和分析。结果：骨骼样本提取的DNA浓度在50．6～0．0ng／μl之间。未烧和5个温度焚烧后基因位点存留不同，位点检出率分别为98．5％、82．7％、52．9％、35．0％、8．5％、0．4％。结论：温度对骨骼DNA的保存有很大影响，温度越低，保存越完整；片段越小，存留越多。

接触DNA检验成功率的影响因素探讨

人在接触物体后,会在物体表面留下少量的接触DNA,对它的检验是目前法医DNA检验的热点和难点。在不同情况下,接触DNA的STR检验成功率差异较大。影响接触DNA检验成功率的主要因素有个体差异、载体属性、接触时间、遗留时间、检验时能否突出重点部位、检验策略的选取和结果分析等,本文详细综述了接触DNA检验成功率的影响因素。

犬的三个STR基因座遗传多态性

选择犬的三个 STR基因座 ,复合扩增后 ,使用 PE3 77自动测序仪及 Genescan3 .1 .2软件进行电泳及数据分析 ,共检测了 57例无亲缘关系的犬 ,得到三个基因座的个体识别率( DP)分别为 0 .42 1 7、0 .8963、0 .80 95,多态信息含量 ( PIC)分别为 :0 .3 3 3 9、0 .73 81、0 .5979,及三个位点的联合个体识别率 ( TDP)为 0 .9886。这为犬的群体遗传学研究 ,司法鉴定等方面提供了方向。

粪便DNA提取及检验

目的 研究人类粪便DNA的提取和检验方法。方法 8人份粪便样本 ,磁珠法提取DNA后 ,进行STR复合扩增和mtDNAHVI区测序分析。结果 用 2种方法提取的粪便DNA ,STR复合扩增检验均未获成功 ;方法1提取的粪便DNA有 6个样本、方法 2有 7个样本获得了清晰可读的mtDNAHVI区序列 ,并与唾液对照样本DNA的序列完全一致。结论 用本文建立的方法提取粪便DNA ,不适于STR分析 ,可通过mtDNA测序分析进行检验。

改良高盐低pH方法提取陈旧大麻DNA初探

目的探讨建立室温保存10年以上大麻干叶及大麻树脂DNA提取方法。方法采用SDS及改良高盐低pH方法,改变提取缓冲液中β-巯基乙醇终浓度,增加用酚、氯仿快速抽提过程,提取新鲜和陈旧大麻(树脂)DNA,应用大麻叶绿体trnL intron引物进行PCR,琼脂糖凝胶电泳法检测扩增产物。结果用高盐低pH方法获得了10年以上大麻干叶及树脂清晰的电泳图谱,其中成功提取了1份23年陈旧大麻的DNA。结论高盐低pH方法操作简便、实用,可望用于陈旧、微量大麻植株的DNA检测,对于涉毒案件中特殊大麻标本的检验具有一定意义。

微量接触DNA的浓缩与回收

目的对纯化后的微量DNA进行进一步浓缩,提高DNA检验成功率。方法将30 ml(约600 pg)纯化后的微量DNA,分别采用Amicon离心超滤管和DNA Clean&ConcentratorTM-5试剂盒进行浓缩回收,用Identifiler试剂盒进行PCR扩增及分型检测,比较STR分型图谱的平均峰高、峰面积和等位基因丢失率。检验24枚白纸上的汗潜指纹,比较浓缩前后的检验效果。结果经过Amicon离心超滤管回收后,STR分型平均峰高85.3RFU,平均峰面积为1 130.8,等位基因丢失率为66.13%。经过DNA Clean&ConcentratorTM-5试剂盒回收后,STR分型平均峰高147.5RFU,平均峰面积为1 960.2,等位基因丢失率为35.14%。汗潜指纹的DNA检验通过DNA Clean&ConcentratorTM-5试剂盒纯化浓缩,获得有效分型的数量由浓缩前的9枚提高为20枚。结论 DNA Clean&ConcentratorTM-5试剂盒可以明显提高微量DNA检材的检验成功率,效果优于Amicon离心超滤管。对白纸上的指纹,DNA Clean&ConcentratorTM-5试剂盒浓缩后检验成功率升高。

联合运用CTAB与磁珠提取陈旧骨骼DNA

用Chelex-100法或酚-氯仿法提取骨骼DNA,一般采用PK消化.该法虽对比较新鲜且有软骨组织存在的骨骼DNA提取效果较好[1],但对陈旧性骨骼DNA提取,难以达到理想效果.

抗人血红蛋白胶体金检测试剂条的研制

目的制备法医学检验所用的确定人血的免疫胶体金层析试剂条。方法选取抗人血红蛋白单克隆细胞株,制备其小鼠腹水,从腹水中纯化出单克隆抗体。制备胶体金并用一纯化的单克隆抗体包被,制成免疫胶体金。取玻璃纤维以免疫胶体金浸泡,烘干。在一硝酸纤维素膜上两个不同位置分别点加另一抗人血红蛋白抗体和羊抗鼠IgG。搭建试剂条并检测其灵敏度和特异性。结果制成的免疫胶体金试剂条可对稀释至20万倍的人血红蛋白溶液显示阳性,对法医学检验常见8种动物的血溶液显示阴性。结论所制备抗人血红蛋白胶体金试剂条可以应用于法医学检验。

陈旧碎骨组织DNA检验

碎尸案中,因骨骼碎小且数量多又损毁严重,会使之难以与其他动物骨骼区分开,从而成为法医DNA鉴定的一大难题。本文利用扫描电镜进行骨骼种属鉴定,通过哈氏系统的形态学特征区分人骨与其他动物骨骼,大大减少了DNA检验的工作量,而后续脱钙与裂解处理同时进行又缩短了反应时间。一起10年前碎尸案的碎小骨块据此而成功地快速鉴定,一种适用于陈旧碎骨DNA的快速检验方法也因此建立。

发酵中氧对红茶品质的影响及富氧发酵工艺优化

发酵是红茶品质形成的关键工序,氧是影响发酵的关键因素,解析氧对红茶品质及内含成分的影响具有重要意义。以一芽二叶的‘龙井43’品种为原料,进行低氧发酵(5%),自然发酵(21%)和富氧发酵(36%)处理,通过感官审评结合气相色谱-质谱技术(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)和超高效液相色谱-质谱技术(ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)分析了氧浓度对红茶感官品质、非挥发性代谢物和挥发性代谢物的影响,并通过单因素结合响应面试验优化了红茶富氧发酵工艺。结果表明:相比自然发酵,富氧发酵可以显著改善红茶滋味和香气品质(P<0.05);富氧发酵中关键滋味化合物儿茶素及没食子酸含量显著下降(P<0.05),茶黄素总量及单体含量显著增加(P<0.05),游离氨基酸含量无显著变化(P>0.05);不同氧浓度发酵中共25种挥发性化合物存在显著差异,包括12种醛类,2种酮类,3种醇类,3种烯类,5种酯类,大部分差异化合物含量随氧浓度升高而增加;红茶富氧发酵优化工艺为:氧气浓度40%、通氧时间1.5 h、发酵时间4 h,优化工艺红茶的茶黄素总量、TF、TF3G、TF3'G和TFDG含量分别为2.86%、0.25%、1.71%、0.24%和0.68%。该研究结果为指导红茶加工和品质调控提供了重要依据。

鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因的表达

目的 制备抗人转铁蛋白单链抗体。方法 拼装好并带有酶切位点粘性末端的鼠抗人转铁蛋白的单链抗体基因经凝胶电泳定量后,同载体pCANTAB 5E连接,以其转化E.coli TG1细胞,经辅助噬菌体M13K07挽救构建噬菌体抗体表面呈现文库、抗原包被固相材料富集选择阳性重组噬菌体克隆（Panning）。感染能产生可溶抗体片段的大肠杆菌菌株E.coli HB2151,制备可溶抗体,以Anti-E末端抗体进行Western blot、ELISA检验和分子量测定。结果 人转铁蛋白的单链抗体基因成功表达。结论 用基因工程抗体技术制备抗体是可行的。

犬线粒体DNA高变区Ⅰ(HVRⅠ)的遗传多态性研究

目的为犬线粒体DNA应用于系统进化和法医学物证鉴定提供基础。方法对106只无亲缘关系的犬线粒体DNA高变区Ⅰ(1041-1318)进行测序。结果测序得到了23个单倍型,它们的差异由24个突变点产生,其中包括碱基转换、颠换及插入。大多数突变点是碱基替代,转换为79.2%,颠换为16.7%,碱基插入为4.1%。结论犬线粒体DNA高变区Ⅰ序列,遗传差异度(相当于杂合度)为0.89,两个无关个体的偶合概率为0.1213,具有高度序列多态性。