白英提取液对人肺癌A549细胞凋亡及Fas／FasL基因表达的影响

目的探讨白英提取液(STE)对人肺癌A549细胞凋亡及fas/fasL基因表达的影响。方法体外培养肺癌A549细胞,以0(正常对照组),10,20和40 mg/ml STE处理A549细胞48 h,并以25 mg/L顺铂(DDP)作为阳性对照。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法检测凋亡率,半定量RT-PCR检测fas和fasL mRNA表达。结果与正常对照组比较,STE各浓度组细胞增殖抑制率显著上升(P(0.01),细胞凋亡率明显升高(P(0.01),基因fas mRNA表达显著上升(P<0.05或P<0.01),而fasL mRNA表达明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论STE通过上调fas基因和下调fasL基因表达,诱导细胞凋亡,从而抑制A549细胞增殖。

白英生物碱通过激活FAS途径诱导人肺癌A549细胞凋亡的研究

目的探讨白英生物碱(STA)诱导人肺癌A549细胞凋亡及其对Fas途径相关基因表达的影响。方法采用STA处理体外培养的A549细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染后用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Fas、FasL、Cleaved caspase-8和Cleaved caspase-3蛋白表达。结果 STA能抑制A549细胞增殖,STA各组细胞抑制率显著升高且呈剂量依赖性,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);STA各组细胞凋亡率明显升高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);Caspase-8/Caspase-3抑制剂能抑制STA诱导细胞凋亡,与同剂量STA组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);STA各组细胞Fas、FasL、Cleaved caspase-8和Cleaved caspase-3表达显著上升,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 Fas介导的死亡受体途径参与STA诱导肺癌A549细胞凋亡。

川芎嗪对烧伤大鼠心肌线粒体成分和酶活性保护作用研究

目的观察川芎嗪(TMP)对大鼠烧伤后心肌线粒体成分和酶活性变化的影响。方法实验分对照组、30%Ⅲ度烫伤组(烧伤组)和川芎嗪治疗组(伤后即刻腹腔注射川芎嗪注射液,20mg/kg体重)。后两组均于伤后1,3,6,12,24和48h检测心肌线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素氧化酶(CCO)、SOD、Ca2+-ATP酶活性,细胞色素C(Cytc)、细胞色素aa3(Cytaa3)、MDA的含量及胞浆和线粒体中Ca2+浓度。对照组为37℃假烫伤,1h后检测上述各项指标。结果烧伤组大鼠伤后心肌线粒体SDH、CCO、SOD、Ca2+-ATP酶活性有不同程度下降,尤以CCO、SOD为显著;川芎嗪对上述酶活性下降有较好拮抗作用。伤后心肌线粒体Cytc、Cytaa3含量显著降低,川芎嗪治疗后有明显升高;烧伤心肌组线粒体中Ca2+浓度显著升高,川芎嗪对Ca2+升高有较好拮抗作用。结论川芎嗪对烧伤后心肌线粒体成分破坏和酶活性改变有较好的拮抗作用。

花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用体外培养,细胞毒(MTT法)实验、荧光显微镜观察细胞形态变化、DNA琼脂糖凝胶电泳测定DNA ladder及流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化。结果花边莲提取液能够抑制SPC-A-1细胞增殖,且呈剂量依赖性;观察到凋亡细胞典型的形态和生化特征,花边莲提取液作用48 h,SPC-A-1细胞均呈现凋亡细胞所特有的亚二倍体峰(sub-G1),凋亡率随药物浓度增加而增高,并使细胞生长停滞在S期,从而阻滞细胞周期的进行。结论花边莲提取液对SPC-A-1细胞具有增殖抑制作用,并可诱导SPC-A-1细胞凋亡,其机制可能与细胞周期的S期阻滞有关。

蛇毒C型凝集素家族结构及抗原表位预测

目的:预测和设计蛇毒C型凝集素家族蛋白(CLPs)共同B细胞抗原表位肽。方法:利用expasy蛋白质数据库在线软件Align对CLPs进行序列比对。运用DNAstar和Antheprot软件对蛇毒CLP家族的二级结构和表面特性,如亲水性、表面可及性、免疫原性、柔韧性等,综合各结果预测其抗原表位。采用Swiss-model和SEPPA在线工具进行三维结构和空间表位预测。结果:蛇毒CLP家族存在多个潜在的抗原表位位点,其中46～58区和98～110区肽段为可能的B细胞表位区。结论:综合考虑以上2个肽段家族同源性和表面特征,确定N端附近的46KTWADAEKFCTEQ58为蛇毒CLP可能的共同抗原区。

提高本科医学生物化学教学质量的策略探讨

医学生物化学课程因其研究对象是生物大分子,抽象难懂,号称是"医学基础课的难点课"。而医学生物化学又是医学重要的基础课,怎样帮助本科生更好地学习这门课程,我们从教师、教学手段和教学环境等方面提出解决策略,帮助学生提高学习效率。

微信教学公众号用于移动教学综合答疑的探索与实践

答疑是教学过程中的重要一环。"互联网+"教学新时代背景下,如何开展简便、高效的教学答疑是亟待解决的问题,它将直接影响学生自主学习的效率。此文分析了传统网络答疑系统或软件的主要问题,提出了利用微信公众号开展自动+人工混合式的网络答疑,有利于学生开展网络自主学习。

白花蛇舌草注射液诱导人肺癌细胞株SPC-A-1凋亡及其分子机制的研究

目的探讨白花蛇舌草注射液诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡及其分子机制。方法采用MTT法检测癌细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化检测野生型P53、Bcl-2和NF-κB(P65)蛋白表达。结果白花蛇舌草注射液能抑制SPC-A-1细胞增殖,且呈剂量依赖性;DNA直方图上呈现凋亡细胞所特有的亚二倍体峰(sub-G1),5和50ml/L白花蛇舌草注射液组细胞凋亡显著升高,P53蛋白表达显著上升,Bcl-2和NF-κB蛋白表达显著下降。结论白花蛇舌草注射液能诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡,其机制可能与上调P53蛋白表达以及下调Bcl-2和NF-κB蛋白表达有关。

白英水提物对胃癌SGC-7901细胞凋亡与基因bcl-xl/bid表达的影响

目的:观察白英水提物对胃癌SGC-7901细胞凋亡及基因bcl-xl、bid表达的影响。方法:常规法制备白英水提物,实验分正常对照组、白英处理组。白英处理组加入白英水提物终浓度分别为12.5mg/mL、25mg/mL和50mg/mL。流式细胞仪检测细胞凋亡,半定量RT-PCR和免疫化学分析细胞中bcl-xl、bid基因表达。结果:与正常对照组比较,白英处理组SGC-7901细胞增殖有显著性下降,细胞凋亡显著性增多(P<0.05);基因bcl-xl mRNA和Bcl-xl蛋白表达降低、bidmR-NA和Bid蛋白表达升高(P<0.05),并随白英浓度增加而加强。结论:白英水提物能诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡和抑制增殖,且有一定的量效关系,其作用机制可能与调控bcl-xl、bid基因表达有关。

白英水提物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的:观察白英水提物(ESL)对胃癌SGC-7901细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法:常规法制备ESL;实验分正常对照组、白英处理组和顺铂处理组。白英处理组加入ESL终浓度分别为12.5、25、50 mg/mL。MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察SGC-7901细胞凋亡及形态变化,半定量RT-PCR分析基因bcl-xl、bid、Caspase-9 mRNA表达,荧光分析法测定Caspase-3活性。结果:与正常对照组比较,三个剂量白英处理组SGC-7901细胞增殖抑制均有显著性增加,且呈明显的时效和量效关系,细胞凋亡显著增多(P<0.05),表现细胞核固缩、染色质凝集、边聚等;bcl-xl mRNA表达显著下降(P<0.05),bid、Caspase-9 mRNA表达显著性升高(P<0.05),并随ESL浓度增加而加强,Caspaes-3活性亦显著性增高(P<0.01)。结论:ESL能剂量依赖性诱导SGC-7901细胞凋亡和抑制增殖,其作用与调控bcl-xl、bid、Caspase-9 mRNA表达和增强Caspase-3活性相关。

牛磺酸对肾NRK-52E细胞缺氧/复氧损伤的保护及初步机制

目的观察牛磺酸(Tau)对NRK-52E细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及初步机制。方法用NRK-52E细胞缺氧8 h复氧12 h培养建立了H/R模型,流式细胞仪检测凋亡率和胞内游离钙离子浓度,RT-PCR和Western blot检测GRP78、Caspase-12、Caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,H/R组细胞凋亡率上升,GRP78、Caspase-12及Caspase-3 mRNA和蛋白表达均明显增高(P<0.01),胞质游离钙离子浓度也升高(P<0.01);与H/R组比较,各浓度牛磺酸处理组的细胞Caspase-3活性和凋亡率明显下降,胞质游离钙和GRP78、Caspase-12及Caspase-3 mRNA和蛋白表达均有明显降低(P<0.01)。结论牛磺酸对NRK-52E细胞H/R损伤有较好的抑制作用,且呈一定的剂量依赖性,其机制可能是调节胞内钙稳态、抑制GRP78、Caspase-12及Caspase-3表达,减少了细胞凋亡。

白英水提物对胃癌细胞凋亡与Notch1信号通路的影响

目的:观察白英水提物对胃癌SGC-7901细胞凋亡及Notch1基因表达的影响。方法:常规法制备白英水提物,实验分正常对照组、白英处理组。白英处理组加入白英水提物终浓度分别为12.5、25mg/mL和50mg/mL。MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,半定量RT-PCR和免疫化学分析细胞中Notch1、caspase-9基因表达。结果:与正常对照组比较,白英处理组SGC-7901细胞增殖有显著性下降,细胞凋亡显著性增多(P<0.05),Notch1基因表达呈显著性的下降(P<0.05)、caspase-9基因表达有明显的上调(P<0.05),并随白英浓度增加而加强。结论:白英水提物能下调人胃癌SGC-7901细胞中Notch1信号蛋白表达和促进细胞凋亡,这可能是其发挥抗癌作用的重要机制之一。

花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响

目的探讨花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法采用体外培养人肺癌SPC-A-1细胞,实验随机分为正常对照组、花边莲处理组(浓度分别为12.5,25和50 m l/L)和顺铂(DDp25mg/L)组,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达水平,二步法免疫组化检测Survivin和Caspase-3蛋白表达变化。结果与正常对照组相比,花边莲各浓度组caspase-3 mRNA和蛋白表达显著上升(P<0.01),survivin mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论花边莲提取液诱导SPC-A-1细胞凋亡的分子机理可能与上调caspase-3基因表达和下调survivin基因表达有关。

花边莲提取液诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡及其分子机制的研究

目的:探讨花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞凋亡及其可能分子机制。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法检测凋亡率,二步法免疫组化检测野生型P53、Survivin、NF-κB P65和Bc l-2蛋白表达变化。结果:花边莲提取液能够抑制SPC-A-1细胞增殖,且呈一定剂量—时间依赖性;随着药物浓度上升细胞凋亡率明显增高(P<0.01);P53蛋白表达显著上升(P<0.01),Survivin、NF-κB和Bc l-2蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论:花边莲取液能诱导SPC-A-1细胞凋亡,其分子机制可能与上调野生型P53蛋白表达和下调Survivin、NF-κB P65和Bc l-2蛋白表达有关。

大蒜素对人卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖与凋亡的影响及机制

探讨大蒜素(DT)对人上皮性卵巢癌SKOV-3/DDP细胞的增殖抑制及诱导其细胞凋亡的分子机制。用人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP细胞随机分为4组:①正常对照组;②DT组:于培养基中加入DT(终浓度分别为5、10、20、40μg·mL-1)分别作用细胞24、48和72h;③顺铂(DDP)组(5μg·mL-1);④DT+DDP组(20μg·mL-1 DT和5μg·mL-1 DDP)。MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测基因bax、bcl-2的mRNA和蛋白表达。与正常对照组比较,DT组SKOV-3/DDP细胞增殖抑制率与凋亡率均有显著的增加(P<0.05),且作用呈剂量和时间依赖性,Bax mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2mRNA和蛋白表达下调(P<0.05);与DT或DDP组比较,DDP+DT组的细胞生长抑制率及凋亡率均有显著增加(P<0.05),且Bax mRNA及蛋白表达上调,Bcl-2mRNA和蛋白表达下调的程度大于单用组(P<0.05)。大蒜素对SKOV-3/DDP细胞有显著的抑制增殖和促凋亡的作用,增加SKOV-3/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与大蒜素调控Bax/Bcl-2蛋白表达有关。

牛磺酸对缺血/再灌注大鼠肾脏GRP78和Caspase-12表达的影响

观察牛磺酸(Tau)对肾缺血/再灌注(I/R)大鼠肾脏GRP78、Caspase-12表达的影响及其意义。将Wistar大鼠30只随机分为假手术组(对照组)、I/R组和I/R+TMP组。采用夹闭双侧肾蒂45min再灌注24h制备肾I/R模型。I/R+TMP组在手术前1h按200mg.kg-1腹腔注射Tau,余操作同I/R组。检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr);光镜观察肾小管组织结构变化;RT-PCR和免疫组化检测GRP78、Caspase-12mRNA和蛋白表达。与假手术组比较,I/R组大鼠血清BUN,Cr水平显著升高,肾组织损伤严重,GRP78和Caspase-12mRNA和蛋白表达呈显著性增加(P<0.01);与I/R组比较,I/R+Tau组血清BUN、Cr水平及GRP78、Caspase-12表达均有显著性下降(P<0.05),肾脏损伤明显减轻。牛磺酸对肾脏缺血/再灌注大鼠GRP78、Caspase-12过度表达升高有很好的抑制作用,这可能是它减轻肾脏缺血/再灌注损伤的重要机制之一。

白英水提物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的观察白英水提物(SLT)对胃癌SGC-7901细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法常规法制备白英水提物;实验分正常对照组、白英处理组和顺铂处理组。白英处理组加入白英水提物终浓度分别为12.5,25和50 mg/ml。MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察SGC-7901细胞凋亡及形态变化,半定量RT-PCR分析基因bcl-xl,bid,caspase-9和caspase-3 mRNA表达。结果与正常对照组比较,3个剂量白英处理组SGC-7901细胞增殖抑制均有显著性增加,且呈明显的时效和量效关系,细胞凋亡呈显著性增多(P<0.05),表现细胞核固缩、染色质凝集、边聚等;基因bcl-xl mRNA表达显著性下降(P<0.05),bid、caspase-9和caspase-3 mRNA表达有显著性升高(P<0.05),并随白英浓度增加而加强。结论白英能剂量依赖性的抑制SGC-7901细胞增殖和诱导凋亡,其作用可能与调控bcl-xl、bid、caspase-9和caspase-3 mRNA表达相关。

PUMA介导大蒜素诱导人卵巢癌耐顺铂SKOV-3/DDP细胞凋亡

目的探讨p53上调凋亡调控因子(PUMA)在大蒜素诱导人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV-3/DDP)细胞凋亡中的作用。方法将SKOV-3/DDP细胞随机分为4组:正常对照组、大蒜素组(于培养基中加入终质量浓度为20μg/mL大蒜素作用细胞48 h)、顺铂组(5μg/mL)、大蒜素+顺铂组。MTT法检测细胞存活率,荧光显微镜和流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western-blot检测PUMA、bax及bcl-2的基因表达。结果与对照组比较,大蒜素组SKOV-3/DDP细胞凋亡率有明显的增加(P<0.05),且作用呈剂量依赖性,PUMA,Bax mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05);与大蒜素组比较,顺铂+大蒜素组的细胞生长抑制率及凋亡率均有显著增加(P<0.05),Bax表达上调及Bcl-2表达下调的程度大于单用组(P<0.05);用特异性SiRNA沉默PUMA后,大蒜素组细胞凋亡率呈显著性下降(P<0.05)。结论 PUMA在介导大蒜素诱导SKOV-3/DDP细胞凋亡中发挥了关键性作用。

盐析法快速提取口腔拭子DNA

目的建立盐析法快速从口腔拭子中提取基因组DNA的方法。方法首先以细胞裂解液和蛋白酶K消化口腔上皮细胞,然后用5 mol/L NaCl沉淀蛋白质,用异丙醇沉淀DNA,最后用70%乙醇洗涤得到的DNA并将其溶于TE(10mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,pH 8.0)中。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对TP53基因的rs1042522和CHRNA3基因的rs12910984位点进行分型。对不同基因型的样本测序验证。结果单支口腔拭子提取得到的DNA量在0.68～2.56μg之间,D260/D280比值在1.77～1.94之间。经PCR扩增和酶切消化,10个样本的两个单核苷酸多态性都得到了清楚分型。酶切结果与测序结果吻合。结论本实验所建立的盐析法可以快速、简便、经济地从口腔拭子得到高质量的基因组DNA。