雷公藤多苷对不可逆性肾小球硬化模型系膜损伤的抑制作用

目的观察雷公藤多苷(GTW)对不可逆性肾小球硬化模型系膜损伤的抑制作用,阐明其在体内延缓肾小球硬化的分子药理机制。方法运用2次注射单克隆抗体(mAb)1223的方法,建立大鼠不可逆性肾小球硬化模型,以经口灌胃GTW(50mg·kg-1BW)干预42d,并设立对照组。比较24h尿蛋白排泄量(Upro)、肾功能(Scr,BUN)以及肾小球形态学(LM,IF)变化,并检测(RTPCR)模型鼠肾组织中I型胶原(collagentypeI)、转化生长因子(TGFβ)mRNA表达水平。结果GTW抑制肾小球硬化模型鼠Upro和系膜增殖。肾小球总细胞数GTW组(65.67±3.43),对照组(87.02±2.41),P<0.05;细胞外基质积分GTW组(1.20±0.06),对照组(2.77±0.23),P<0.05;α平滑肌肌动蛋白积分GTW组(1.75±0.33),对照组(2.62±0.15),P<0.05;I型胶原积分GTW组(1.68±0.31),对照组(2.06±0.24),P<0.05。GTW使肾小球硬化模型鼠肾组织中collagentypeI,TGFβmRNA表达水平下调53.5%和14.7%,与对照组比较,二者差异均有显著性(P<0.05)。结论GTW抑制肾小球硬化模型鼠Upro和系膜增殖的作用是通过减少细胞因子mRNA的表达来实现的。

雷公藤多甙对实验性系膜增殖性肾炎蛋白尿及系膜损伤的影响

目的观察雷公藤多甙(multiglycosideoftripterygiumwilfordiiHook.f.,GTW)在体内对实验性系膜增殖性肾炎蛋白尿及系膜损伤的影响。方法运用单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb)1223建立大鼠可逆性抗Thy1.1抗体肾炎(简称“抗Thy1.1肾炎”)模型,以GTW干预,并设立对照组。比较24h尿蛋白排泄量(urinaryproteinexcretion,Upro)、肾功能(serumcreatinine,SCr;bloodureanitrogen,BUN)、血浆总蛋白(totalplasmaprotein,TP)以及肾小球形态学变化,并检测肾组织中增殖因子(plateletderivedgrowthfactorBB,PDGFBB;transforminggrowthfactorβ,TGFβ)mRNA表达水平。结果GTW抑制抗Thy1.1肾炎模型Upro和系膜损伤;抗Thy1.1肾炎模型肾组织中增殖因子(PDGFBB、TGFβ)mRNA表达水平与正常组比较,分别为其2.84倍与1.64倍,GTW使PDGFBBmRNA过高表达水平下调33.1%,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论GTW可减少系膜增殖性肾炎模型蛋白尿,抑制系膜细胞增殖和细胞外基质沉积;这些作用可能与下调肾组织增殖因子(PDGFBB)mRNA的表达有关。

柴苓汤对大鼠蛋白尿作用的实验观察

本实验利用大鼠被动性 Heymann 肾炎(PHN)模型,验证了柴苓汤对蛋白尿的抑制作用,将雌性 Wistar 大鼠分4组,即柴苓汤组、小柴胡汤组、柴半姜组和对照组。治疗组尿蛋白排泄受到抑制,尤其是柴苓汤组24h 尿蛋白排泄量的均值为52.2±46.9mg/d,而对照组为276.5±127.3mg/d(P<0.01)。对照组血清白蛋白和总蛋白减少,血清总胆固醇增加。治疗组与之比较均有显著性差异,以柴苓汤组最为明显(P<0.05和P<0.01)。表明中药对被动性 Heymann 肾炎蛋白尿具有明显抑制作用,其中柴苓汤的作用最为突出。

抗Thy1.1抗体诱导的肾炎模型及其在中药研究中的应用

抗Thy1.1单克隆抗体诱导的抗Thy1.1抗体肾炎模型广泛应用于人类系膜增殖性肾炎的研究领域。该模型的病理特征包括补体依赖性系膜溶解、肾小球内炎症细胞浸润、显著的蛋白尿,以及急性或进展性系膜损伤。文章综述了经静脉注射单克隆抗体1-22-3诱导的可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型和不可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型的病理特征;阐述了肾小球内炎症细胞浸润和各种损伤性细胞因子的变化规律;分析了包括系膜细胞增殖和细胞外基质沉积在内的复杂的系膜损伤病变过程。运用该模型,可以说明雷公藤多苷、柴苓汤等中药对系膜损伤和蛋白尿的药理作用,并且,在分子水平阐明这些药物对各种损伤因子的作用机制。

柴胡剂对单克隆抗体5-1-6引起蛋白尿的实验研究

静脉一次性注射单克隆抗体5-1-6可引起实验大鼠大量的、一过性的蛋白尿。抗体注射后第1、3、5、8天,柴胡剂治疗组与PBS对照组比较有显著性差异。免疫荧光所见,柴胡剂治疗组中沿肾小球毛细血管壁颗粒样沉积明显减少。口腔灌药柴苓汤对蛋白尿的作用未能得到证实。此实验提示柴胡剂可能通过某种途径改变了大鼠肾小球毛细血管壁的通透性。

柴胡皂甙D对肾损害大鼠蛋白尿抑制作用的实验研究

本实验利用单克隆抗体1-22-3引起雌性 Wistar 大鼠肾损害模型,验证了柴胡皂甙 D(ss-D)经腹腔注射对蛋白尿具有明显的抑制作用。注射 ss-D0.2mg·kg^(-1)体重d^(-1)时,与磷酸盐缓冲液(PBS)对照组比较,第1天、3天尿蛋白结果有显著性差异(分别为 P<0.05和 P<0.01)。每日注射 ss-D0.6mg/kg 体重时,第1、3、5、8天尿蛋白结果与PBS 对照组比较,均有显著性差异,特别是第3天和第8天(P<0.001)。间接免疫荧光染色发现,经 ss-D 治疗后,肾小球中单核巨噬细胞的表面标识(TR-3,ED-1)和 T 淋巴细胞抑制细胞的表面标识(OX-8)阳性细胞数量明显降低,提示 ss-D 具有抗炎和免疫调节作用。

腹腔注射中药柴胡对实验大鼠蛋白尿作用的观察

本实验利用单克隆抗体(MonAbl-22-3)引起肾损害模型,验证了中药柴胡对雌性 Wistar 大鼠蛋白尿的抑制作用。MonAb1-22-3注射后第3天,柴胡治疗组尿蛋白排泄的均值为8.7±10.7mg/24h 尿,磷酸盐缓冲液(PBS)对照组为63.9±61.7mg/24h 尿(P<0.01)。同时,柴胡治疗组与 PBS 对照组比较,肾组织的损伤程度明显减轻。光镜下 PBS组可看到系膜细胞增多,系膜基质增加。柴胡治疗组则不明显。结论是柴胡腹腔注射对蛋白尿具有明显的抑制作用,并可减轻肾损害。

雷公藤多甙对抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿和足细胞裂隙膜相关分子表达的影响

目的观察雷公藤多甙(multi-glycoside of Tripterygium wilfordii Hook.f.,GTW)对抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿和足细胞裂隙膜相关分子(nephrin、podocin)表达的影响。方法经尾静脉一次性注射500μg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)1-22-3建立大鼠抗Thy1.1抗体肾炎模型。14只大鼠随机分为GTW干预组(简称GTW组)和安慰剂干预组(简称造模组)。实验1中,在注射抗体前3天,经灌胃给予GTW〔75mg/(kg.d)〕或安慰剂,直至造模后第14天,处死大鼠;实验2中,在注射抗体同时,经灌胃给予GTW〔100mg/(kg.d)〕或安慰剂,直至造模后第7天,处死大鼠。分别观察14天内或7天内模型鼠24h尿蛋白排泄量(urinary protein excretion,Upro)动态变化。在第14天或第7天,处死大鼠后,取出肾脏,分别观察肾小球形态学变化、肾小球内巨噬细胞浸润、肾小球内nephrin、podocin及其核酸表达。结果实验1中,GTW抑制抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿和系膜损伤,在第14天,对肾小球内nephrin、podocin免疫荧光染色强度无影响;实验2中,GTW改善抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿、系膜损伤、肾小球内巨噬细胞浸润,而且,在第7天,显著增强肾小球内nephrin、podocin及其核酸表达。结论在抗Thy1.1抗体肾炎中,nephrin、podocin表达的减弱可能会促进系膜损伤和蛋白尿。GTW改善系膜损伤和蛋白尿的作用,很可能是通过增强nephrin、podocin表达来实现的。

蛋白尿的分子机制

近年来有关肾性蛋白尿分子机制的研究规律 ,是以人类遗传性肾病中发现的与蛋白尿相关的SD结构分子为开端 ,在动物模型上进一步寻找新分子 ,再延伸至获得性肾病中 ,说明其临床意义 ,这一思路仍将是今后肾性蛋白尿研究的主要方法。

雷公藤多苷对抗Thy1.1抗体肾炎肾小球内炎症细胞浸润的抑制作用

目的:观察雷公藤多苷(multi-glycoside of Tripterygium wilfordii.,GTW)对肾小球内浸润的炎症细胞及其相关细胞因子的影响,进一步阐明GTW在体内的抗炎作用。方法:经尾静脉注射500μg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)1-22-3建立2种大鼠抗Thy1.1抗体肾炎模型。将模型鼠随机分为GTW干预组(GTW组)和蒸馏水干预组(对照组)。实验1中,在注射抗体前3d,经灌胃给予较大剂量GTW(75mg·kg-1·d-1)或蒸馏水,直至造模后第7天,处死大鼠;实验2中,在第2次注射抗体同时,经灌胃给予中等剂量GTW(50mg·kg-1·d-1)或蒸馏水,直至造模后第42天,处死大鼠。分别观察7d内或42d内模型鼠24h尿蛋白排泄量(urinary protein excretion,Upro)动态变化;在处死大鼠后,取出肾脏,分别观察肾小球内浸润的巨噬细胞(macrophage,MΦ),T淋巴细胞变化和肾组织内白介素(interleukin,IL)-2和干扰素(interferon,IFN)-γ核酸的表达。结果:实验1中,可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型鼠肾小球内浸润的MΦ明显增多,较大剂量的GTW可以减少模型鼠肾小球内MΦ的浸润和肾组织内IL-2核酸表达;实验2中,不可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型鼠肾小球内浸润的活性MΦ,T淋巴细胞明显增多,中等剂量的GTW可以改善模型鼠肾小球内活性MΦ,T淋巴细胞的浸润,以及肾组织内IL-2,IFN-γ核酸表达;对于2种模型,GTW都有减少蛋白尿的作用。结论:不同剂量的GTW在体内对抗Thy1.1抗体肾炎肾小球内炎症细胞浸润有抑制作用,这些作用与改善肾组织内IL-2和IFN-γ核酸表达有关。

雌性大鼠增龄性肾病变及转化生长因子-β在肾组织内的表达

目的观察正常雌性大鼠肾脏的增龄性改变以及肾组织内转化生长因子－β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β，ＴＧＦ－β）及其信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）的表达。方法利用光镜、免疫荧光及电镜技术观察了不同鼠龄雌性大鼠的肾组织病理改变及ＴＧＦ－β表达的演变过程，并利用原位杂交技术观察了ＴＧＦ－βｍＲＮＡ在肾组织中的表达情况。结果随着鼠龄的增长，大鼠血尿素氮、肌酐、血脂及尿蛋白定量均无明显变化。１８月龄大鼠的肾小球在光镜下仅见轻度系膜增殖性改变，可见ＩｇＧ、ＩｇＭ在肾小球内沉积，但不伴有Ｃ３的沉积，肾组织内未见有单核巨噬细胞（ＥＤ－１）、Ｔ辅助淋巴细胞（ＣＤ４）及Ｔ抑制淋巴细胞（ＣＤ８）的积聚。电镜下可见肾小球基底膜明显增厚、皱折及结节形成。肾组织免疫荧光及原位杂交技术均证实１８月龄大鼠肾小球内有ＴＧＦ－β表达。结论无蛋白尿的正常雌性大鼠可见明显的肾脏增龄性改变，ＴＧＦ－β在这一病变过程中可能具有重要作用。