蒙古口蘑多糖提取工艺的研究

以蒙古口蘑(Tricholoma mongolicumImai.)野生子实体和人工液体培养的菌丝体为研究对象,采用常规热水浸提法,对影响多糖提取得率的因素以正交试验的方法进行优化。结果表明,蒙古口蘑子实体多糖提取的最佳工艺为:提取时间4 h,提取4次,提取温度70℃,醇析浓度80%,料液比1∶10,经此工艺子实体的多糖得率为5.78%;菌丝体多糖提取最优工艺为:提取时间3 h,提取3次,提取温度90℃,醇析浓度80%,料液比1∶10,经此工艺菌丝体的多糖得率为5.93%。

兔迷走神经压迫后对血浆血管紧张素Ⅱ及其1型受体mRNA表达水平的检测

目的通过手术建立兔颈总动脉对迷走神经的持续压迫的动物模型,检测血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平及其1型受体(AT1R)mRNA在心肌中的表达水平。方法构建手术组动物模型,将25只新西兰兔的迷走神经与颈部结缔组织固定,造成颈总动脉对迷走神经的持续压迫。同时将25只未经手术处理的新西兰兔作为对照组。采用放射免疫法检测两组新西兰兔血浆AngⅡ的水平,用RT-PCR法检测两组新西兰兔心肌AT1RmRNA的表达水平。结果手术组兔血浆AngⅡ水平和心肌中AT1RmRNA的表达水平均高于对照组(P<0.05)。结论兔颈总动脉对迷走神经的持续压迫会刺激左侧颈部迷走神经,导致兔血浆AngⅡ和心肌AT1RmRNA表达水平的增高。

蒙古口蘑液体深层发酵菌丝体凝集素提取工艺研究

采用蒙古口蘑液体深层发酵菌丝体为研究对象,对影响真菌菌丝体凝集素提取的主要因素(浸泡溶液、浸泡时间及不同的硫酸铵分级沉淀浓度)做多因素交叉实验。提取的凝集素生物活性的大小采用凝集素的血凝效价来表示,即能引起血凝现象的凝集素的最高稀释倍数2″表示。结果表明:浸泡溶液、浸泡时间及不同的硫酸铵分级沉淀浓度都显著影响提取的凝集素相对含量。并获得最佳提取工艺为:浸泡溶液0.01 mol/L PBS(pH 值7.4),浸泡时间48h 和分级沉淀浓度20%～75%。

新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体的构建

目的构建4个新靶点的人CyclinE干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质细胞瘤U251细胞,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA表达,获得干扰效果最好的真核表达载体,为CyclinE成为人脑肿瘤标志物提供有价值的资料。方法 (1)构建4个新靶点CyclinE干扰RNA的真核表达载体后,用双酶切和碱基序列测定的方法鉴定载体构建成功与否;(2)用Lipofectamine 2000转染4个成功构建的载体到胶质瘤U251细胞株;(3)通过RT-PCR的结果检测转染后CyclinEmRNA表达量,选出干扰效果最好的1个。结果 (1)成功构建了4个新靶点的CyclinE干扰RNA真核表达载体即PCyclinE-1、PCyclinE-2、PCyclinE-3、PCyclinE-4。(2)CyclinEmRNA表达明显受到抑制,并获得效果最好的CyclinE干扰RNA真核表达载体。结论成功构建并筛选出效果最好的新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体,使U251细胞的CyclinE mRNA表达明显降低。

CDK2干扰RNA新靶点的发现及对人脑胶质瘤生长的影响

目的:构建4个新靶点的人CDK2干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质细胞瘤SHG44细胞,经RT-PCR检测mRNA的表达MTT法检测细胞增殖,获得干扰效果最好的真核表达载体,为继续探讨CDK2在SHG44细胞中的作用提供有价值的资料及实验基础。方法:1.构建4个新靶点CDK2干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序鉴定。2.脂质体法瞬时转染上述4个载体到SHG44细胞株。3.通过RT-PCR比较转染后CDK2mRNA的表达量,MTT法检测细胞增殖。结果:1.成功构建了4个新靶点的CDK2干扰RNA真核表达载体PGPU6/GFP/Neo-CDK2-1、PGPU6/GFP/Neo-CDK2-2、PGPU6/GFP/Neo-CDK2-3、PGPU6/GFP/Neo-CDK2-4。2.CDK2 mRNA表达和细胞增殖明显受到抑制,并获得了效果最好的CDK2干扰RNA真核表达载体。结论:.成功构建并筛选出了效果最好的新靶点CDK2干扰RNA真核表达载体,使SHG44细胞的CDK2 mRNA的表达明显降低。