人脐带间充质干细胞移植对老年痴呆小鼠脑、肝组织中衰老相关基因表达的影响

目的:研究人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)静脉移植对APP+转基因鼠衰老的调控作用,并从衰老相关基因角度探讨MSCs延缓衰老的机制。方法:采用PCR技术对老年痴呆APP+转基因鼠进行分子鉴定;将传至第3代的h UC-MSCs细胞密度调整为1×106m L-1后进行尾静脉移植。移植h UC-MSCs 3周后,通过Morris水迷宫实验从行为学水平检测干细胞移植对APP+转基因鼠的延缓衰老作用(检测小鼠的学习记忆能力),然后采用荧光定量PCR和Western blot法检测h UC-MSCs移植后小鼠脑及肝脏组织中与衰老相关的基因及蛋白[沉默信息调节因子2(Sirt2)、增殖细胞核抗原(PCNA)、p16、p21、p53]表达的变化。结果:该实验共鉴定出12只APP+转基因鼠。与对照组相比,移植组小鼠逃避潜伏期时间明显缩短、穿越平台次数增加、在平台所在象限停留的时间延长,差异具有统计学意义(P均<0.05)。移植组APP+转基因鼠的脑及肝脏组织中PCNA和Sirt2基因的mRNA和蛋白相对表达量升高,p21及p53基因相对表达量降低(P均<0.05),而p16基因表达变化不明显(P>0.05)。结论:APP+转基因鼠经h UC-MSCs静脉移植治疗,学习记忆能力显著提高,延缓衰老作用明显,涉及衰老标志基因p21、p53、PCNA、Sirt2等表达调控改变,这些衰老标志基因之间相互联系,可能构成细胞衰老的基因调控链。

单细胞海藻提取物对人脐带间充质干细胞的抗衰老作用

目的:探讨单细胞海藻(MPPT)提取物对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的抗衰老作用。方法:取剖宫产新生儿脐带,分离、传代培养hUC-MSCs,显微镜下观察细胞形态,收集第3、10、15代细胞,qRT-PCR分析不同代细胞中p16、p21、p53、PCNA、Sirt2 mRNA的表达情况。CCK-8法检测不同质量浓度MPPT提取物对第15代hUCMSCs增殖的影响;流式细胞术检测MPPT提取物对hUC-MSCs细胞周期和凋亡的影响;β-半乳糖苷酶染色法检测MPPT提取物对hUC-MSCs衰老的影响;qRT-PCR检测MPPT提取物对hUC-MSCs中p16、p21、p53、PCNA、Sirt2 mRNA表达的影响。结果:第3代细胞呈梭形贴壁细胞,第15代细胞呈不规则状态,易脱壁。随着传代次数的增加,hUC-MSCs中PCNA、Sirt2 mRNA表达减少(F=76.944、25.649,P<0.001),而p16、p21和p53 mRNA表达增加(F=46.714、77.645、845.676,P<0.001);与第15代细胞相比,1 g/L的MPPT提取物可促进第15代hUC-MSCs增殖,促进细胞周期进入S期,抑制细胞凋亡(P均<0.05);MPPT提取物处理组衰老细胞率降低(F=773.557,P<0.001),细胞中PCNA、Sirt2 mRNA表达增加,p16、p21和p53 mRNA表达降低(P均<0.05)。结论:MPPT提取物可能通过调节hUC-MSCs中p16、p21、p53、PCNA和Sirt2等衰老相关基因的表达发挥抗衰老作用。

脐带沃顿胶干细胞移植对脊髓损伤大鼠炎症因子表达的影响

背景:免疫炎症反应促使大量炎症因子的产生和释放是继发性脊髓损伤的其对主要原因。目的:探讨脐带沃顿胶干细胞移植对急性脊髓损伤大鼠的神经修复作用及其对炎症因子单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素10表达的影响。方法:81只健康成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和脐带沃顿胶干细胞移植组(n=27),后两组以脊髓半切方法建立急性脊髓损伤模型,造模后脐带沃顿胶干细胞移植组经尾静脉移植1×106个脐带沃顿胶干细胞。移植后不同时间通过BBB评分评价各组大鼠的运动功能;ELISA检测不同时间点各组大鼠血清中单核细胞趋化蛋白1的含量;qR T-PCR和Western分析不同时间点损伤脊髓组织中单核细胞趋化蛋白1及白细胞介素10的表达;免疫组织化学检测损伤组织中脐带沃顿胶干细胞的迁移和神经分化情况。结果与结论:与假手术组和模型组相比,脐带沃顿胶干细胞移植组大鼠的神经功能明显恢复(P<0.05)。脐带沃顿胶干细胞移植组大鼠血清中单核细胞趋化蛋白1水平显著低于模型组(P<0.05)。脐带沃顿胶干细胞移植组脊髓组织单核细胞趋化蛋白1 mR NA和蛋白表达显著低于模型组(P<0.05),白细胞介素10 mR NA和蛋白表达显著高于模型组(P<0.05)。移植组中脐带沃顿胶干细胞可迁移至损伤部位,并表达神经胶质纤维酸性蛋白。这些结果提示脐带沃顿胶干细胞可能通过调控脊髓损伤组织的炎症反应,促进神经修复,这也可能是脐带沃顿胶干细胞治疗脊髓损伤的机制之一。

人脐带沃顿胶干细胞对急性大鼠脊髓损伤的作用及脊髓组织中TNF-α和BDNF表达的影响

目的:探讨人脐带沃顿胶干细胞(WJCs)移植对急性脊髓损伤大鼠的治疗作用及其可能机制。方法:81只大鼠分为假手术组、模型组和WJCs移植组,每组27只。每组取6只,采用BBB评分法评估脊髓损伤后1、3、7、14、21和28 d各组大鼠的运动功能,采用透射电镜检测损伤局部超微结构并检测损伤后28 d脑源性神经营养因子(BDNF)的表达,其余大鼠采用实时荧光定量PCR和Western blot检测损伤后0、3、6、12、24、72、168 h损伤脊髓组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达。结果:脊髓损伤后模型组与WJCs移植组大鼠的运动功能均有不同程度的恢复,其中WJCs移植组较模型组恢复更明显。与模型组相比,WJCs移植组损伤区脊髓组织结构相对完整。模型组和WJCs移植组损伤脊髓组织中TNF-αmRNA和蛋白以及BDNF蛋白的表达较假手术组增加(P<0.05);与模型组相比,WJCs移植组中TNF-α的表达降低,而BDNF的表达增加(P<0.05)。结论:WJCs移植可改变脊髓损伤区的微环境,抑制损伤脊髓组织中TNF-α的表达,同时增加BDNF的表达,促进大鼠神经功能恢复,减少脊髓继发性损伤。

脂肪源间充质干细胞移植对D-半乳糖衰老模型大鼠肾、肺组织中衰老相关蛋白表达的影响

目的:探讨脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)静脉移植对D-半乳糖衰老模型大鼠的抗衰老效果。方法:18只SD大鼠随机平均分为3组,模型组与移植组大鼠连续8周腹腔注射D-半乳糖[100 mg/(kg·d)],对照组腹腔注射生理盐水。然后移植组尾静脉注射ADMSCs(4×106个),模型组和对照组尾静脉注射生理盐水。4周后,采用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力,并测定大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性,并用Western blot法检测大鼠肾与肺组织中衰老相关蛋白沉默信息调节因子1(Sitr1)、P16、P21及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠空间学习记忆能力降低(P<0.05);与模型组相比,移植组大鼠空间学习记忆能力明显改善(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠血清中SOD活性降低,肾与肺组织中Sirt1、PCNA蛋白表达水平降低(P<0.05),P21、P16蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,移植组大鼠血清中SOD活性增加(P<0.05),肾与肺组织中Sirt1、PCNA蛋白表达水平升高(P<0.05),P21、P16蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:ADMSCs静脉移植治疗抗衰老作用明显,其可能通过调节衰老相关蛋白表达发挥作用。

大鼠创伤性颅脑损伤程度与血清MCP-1、VEGF及损伤区CD34＋细胞表达水平的关系

目的探讨大鼠创伤性颅脑损伤的程度与血清单核细胞趋化因子（MCP-1）、血管内皮生长因子（VEGF）及损伤区CD34＋细胞数量的相关性。方法80只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、假手术组、轻度损伤组和重度损伤组，每组20只。采用Feeney法制作大鼠创伤性颅脑损伤模型。伤后3、7d进行改良大鼠神经功能缺损评分（mNSS）评价神经功能；伤后6h、1d、3d、7d行多聚甲醛灌注取脑组织，行HE染色并采用免疫组织化学染色（SP法1检测各组大鼠脑损伤区CD34＋细胞的表达情况；伤后1h、3h、6h、9h、1d、3d、5d、7d取外周血，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定外周血血清MCP-1、VEGF的水平。结果与轻度损伤组比较，重度损伤组伤后3d、7dmNSS评分较高，差异有统计学意义俨〈0．05）；免疫组化染色显示对照组、假手术组大鼠脑损伤区CD34＋细胞表达极少．轻、重度损伤组损伤区均有CD34＋细胞出现，且轻度损伤组损伤区CD34＋细胞数量较多；轻度损伤组、重度损伤组血清MCP-1、VEGF表达水平在各时间点均较对照组、假手术组高，且重度损伤组血清MCP-1表达水平高于轻度损伤组，VEGF表达水平明显低于轻度损伤组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论大鼠血清MCP-1表达量与颅脑损伤程度呈正相关，血清VEGF表达量、脑损伤区CD34＋细胞数量与颅脑损伤程度呈负相关，这些可作为评判大鼠创伤性颅脑损伤程度的观察指标。

甘薯病毒C中国分离物全基因组序列测定及比较分析

利用RT-PCR结合RACE方法,从采自河南南阳的甘薯样品上获得甘薯病毒C中国分离物(SPVC-Ch1)的全长基因组序列。序列分析结果表明,SPVC-Ch1基因组由1 0846个核苷酸组成,3'末端包含poly(A)尾序。基因组含有1个由10 446个核苷酸构成的开放阅读框,编码一个由3 481个氨基酸残基构成的393 k Da多聚蛋白。将SPVC-Ch1与Gen Bank中登录的其他SPVC分离物序列进行比较分析发现,SPVC不同分离物间全基因组核苷酸序列相似性为92.7%~98.9%,多聚蛋白的氨基酸序列相似性为95.1%~99.2%,SPVC-Ch1与Bungo分离物的相似性最高,与C1分离物的相似性最低。系统进化树分析结果表明,SPVC-Ch1与日本的Bungo、以色列的IL、韩国的CW135和UN202等分离物形成一个分支,亲缘关系较近。这是SPVC中国分离物全基因组序列的首次报道,研究结果丰富了SPVC全基因组序列信息,有助于全面了解SPVC种群的遗传进化关系。