参芪益心方对ISO诱导的心肌细胞凋亡及内质网应激的影响

目的探讨参芪益心方对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的心肌细胞凋亡及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的干预效果。方法40只SD大鼠随机分为5组,即对照组(Con组)、模型组(ISO组)、曲美他嗪治疗组(QM组)、参芪益心方低剂量治疗组(SL组)、参芪益心方高剂量治疗组(SH组),每组各8只。除Con组外,其余各组大鼠皮下注射ISO诱导心肌损伤,Con组大鼠给予等量生理盐水,共4周;第3周开始QM组给予曲美他嗪混悬液5mg/(kg·d),SL组给予参芪益心方水煎剂10g/(kg·d),SH组给予参芪益心方水煎剂20g/(kg·d),Con组和ISO组给予等量生理盐水灌胃。实验4周末比较各组大鼠的心电图、超声心动图指标,心肌组织病理切片,肌醇需求酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE 1)、X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)、cleaved caspase-3、p53正向凋亡调控因子(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)水平。结果与Con组比较,ISO组大鼠心电图出现异常Q波,ST段抬高,心率增快(P<0.05),左室射血分数、左心室短轴缩短率明显降低,心功能下降(P<0.05);SL组和SH组较ISO组心功能改善(P<0.05)。ISO组心肌结构紊乱,纤维化程度明显增强,可见纤维断裂与空泡样变性;SL组和SH组较ISO组纤维化程度降低,心肌纤维断裂和空泡减少。ISO组大鼠心肌组织的IRE1、XBP1、cleaved caspase-3、PUMA蛋白水平均显著高于Con组(P<0.001);SH组和SL组大鼠心肌组织的IRE1、XBP1、cleaved caspase-3、PUMA蛋白水平均显著低于ISO组(P<0.05),且SH组降低较SL组更显著。结论ERS参与ISO诱导的心肌损伤,参芪益心方可降低IRE1、XBP1、cleaved caspase-3、PUMA水平,改善心肌损伤,且高剂量效果更显著。

医学类高校科研经费管理存在的问题及对策分析

在我国新的科研项目制度下,做好科研项目经费的运用与管理工作尤为关键。本文通过对目前的医学类医学院科研处科研经费使用和管理的工作状况进行全面剖析,提出了关于科研经费使用和管理工作中的一些问题。并通过对科研经费的概念进行阐述,以及分析医学类高校科研经费管理的系列问题和关于科研经费管理的一些建议,以期为推动医学类科研机构的发展壮大提供参考意见。

柚皮苷对糖尿病及其并发症作用机制的研究进展

柚皮苷主要存在于芸香科柑橘属植物柚、葡萄柚、酸橙及其变种的果皮及果实中,属于双氢黄酮类化合物。研究表明柚皮苷具有抗1型及2型糖尿病的药理作用,作用机制为通过抑制糖尿病相关的氧化应激损伤、炎症、糖代谢酶异常等方面,同时在一定程度上延缓糖尿病并发症(包括糖尿病心肌病、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变及糖尿病神经病变)的发生与发展。探讨柚皮苷对糖尿病及其并发症作用机制的研究进展,旨在为抗糖尿病新药研发提供依据。

柚皮苷对高糖诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤影响

目的探讨柚皮苷对高糖引起的大鼠H9c2心肌细胞损伤作用影响及机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,用35 mmol/L葡萄糖处理建立细胞损伤模型。将细胞随机分为5组,对照组(不加任何干预)、模型组(35 mmol/L葡萄糖培养48 h)、柚皮苷低、中、高剂量组(5、10、20 μmol/L柚皮苷预先孵育4 h,再用35 mmol/L葡萄糖培养48 h。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞内质网应激(ERS)标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(cysteinyl aspartate specific proteinase 12,caspase 12)及细胞炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、真核细胞转录因子(nuclear factor kappa-B,NF-κB)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组H9c2细胞存活率[(70.36 ±6.31)%]明显下降(P < 0.01),凋亡率[(41.25 ±7.44)%]升高(P < 0.05),细胞中IL-6、NF-κB、GRP78、CHOP和Caspase12蛋白表达水平[分别为(0.34 ±0.03)、(1.04 ±0.10)、(0.93 ±0.65)、(0.52 ±0.02)、(0.39 ±0.02)]均明显升高(P < 0.01);与模型组比较,20 μmol/L柚皮苷组H9c2细胞存活率[(92.33 ±5.64)%]明显提高、细胞凋亡率[(25.0 ±4.82)%]明显减少(P < 0.05),H9c2细胞内GRP78、CHOP、Caspase12表达水平[分别为(0.57 ±0.04)、(0.31 ±0.04)、(0.23 ±0.02)]明显降低(P < 0.05),炎性因子IL-6、NF-κB表达水平[分别为(0.23 ±0.03)、(0.76 ±0.06)]明显下调(P < 0.05);呈一定剂量效应关系。结论柚皮苷可明显减轻高糖诱导的H9c2细胞损伤、降低凋亡率,其机制可能与抑制细胞内质网应激水平和炎症因子表达有关。

柚皮苷对糖尿病大鼠心肌病氧化应激及内质网应激的影响

探讨柚皮苷（naringin,Nar）对糖尿病大鼠心肌组织的保护作用与氧化应激及内质网应激的关系。SD雄性大鼠随机分为正常对照组（Con组）,模型组（T1DR组）,Nar低、中、高剂量组（Nar25,Nar50,Nar100）。除Con组外,其他各组用链脲佐菌素（STZ,60 mg·kg^-1）一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,模型复制成功后Nar分别按25.0,50.0,100.0 mg·kg^-1剂量灌胃;Con组和T1DR组等体积生理盐水灌胃,每天1次,连续8周。8周后处死大鼠,留取心肌组织。普通光镜观察大鼠心肌组织病理改变。试剂盒法检测心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot法检测各组大鼠心肌组织葡萄糖调节蛋白78（GRP78）,CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12（caspase 12）mRNA和蛋白的表达。结果显示,与Con组比较,T1DR组心肌结构发生损伤,心肌组织MDA含量增加（P〈0.05）、SOD的活性明显降低（P〈0.05）。内质网应激相关因子GRP78,CHOP和caspase 12基因和蛋白表达明显增加（P〈0.05或P〈0.01）。Nar处理8周后,Nar各干预组心肌结构损伤明显改善,心肌组织MDA含量下降,SOD的活性明显升高,GRP78,CHOP和caspase 12基因和蛋白表达明显下降,其中中、高剂量组变化显著（P〈0.05,P〈0.01）。该研究结果表明,Nar可能通过减轻大鼠糖尿病心肌氧化应激损伤,抑制内质网应激启动的细胞凋亡途径发挥对心肌组织细胞的保护作用。

柚皮苷对糖尿病大鼠心肌纤维化及STAT3磷酸化水平的影响

目的观察柚皮苷对糖尿病大鼠心肌纤维化及信号传导与转录激活因子3(STAT3)磷酸化水平的影响。方法健康雄性SD大鼠ip链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,将模型成功大鼠随机分为模型组和柚皮苷低、中、高(25、50、100mg/kg)剂量组,另设正常大鼠为对照组,每天ig给药1次,连续给药8周,对照组和模型组给予等体积生理盐水。8周后检测大鼠空腹血糖;计算心脏指数;采用Masson染色观察心肌纤维化程度;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测大鼠心肌组织I型胶原(Collagen I)和纤连蛋白(FN)m RNA表达;免疫组化法检测大鼠心肌组织Collagen I和FN蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测大鼠心肌组织STAT3及其磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠空腹血糖、心脏指数、心肌纤维化程度以及Collagen I、FN和p-STAT3表达均明显升高(P<0.05、0.01);与模型组比较,柚皮苷高、中剂量组心脏指数、心肌纤维化程度以及Collagen I、FN和p-STAT3表达均明显下降(P<0.05、0.01)。结论柚皮苷通过下调糖尿病大鼠心肌组织STAT3通路,减少心肌间质中Collagen I和FN合成及沉积,从而改善糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化。

柚皮苷通过P38 MAPK/NF-κB通路抑制脂多糖致HaCaT细胞炎症反应

目的探讨柚皮苷通过P38 MAPK/NF-κB通路对脂多糖(LPS)致HaCaT细胞炎症损伤的抑制作用。方法LPS(0、0.1、1.0、10.0、20.0μg/mL)孵育24 h刺激人永生化角质细胞HaCaT,模拟银屑病模型,MTT法观察细胞存活率变化,Western bloting法检测白介素(IL)-6和NF-κB蛋白表达;MTT法观察柚皮苷(0、5、10、20、40、80、160、320μmol/L)作用24 h对HaCaT存活率的影响;选择LPS、柚皮苷最佳作用浓度。柚皮苷(20和40μmol/L)作用银屑病模型HaCaT细胞24 h,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测IL-6、IL-1β、IL-17和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平变化;Western blotting法检测细胞核内转录因子NF-κB p65、P38 MAPK磷酸化蛋白水平以及炎症因子IL-6蛋白水平。结果LPS增加HaCaT细胞存活率,并上调NF-κB p65和IL-6蛋白表达,呈剂量相关性,炎症反应在20μg/mL达到高峰;5～160μmol/L柚皮苷对HaCaT细胞无明显毒性作用。与模型组比较,柚皮苷能够显著抑制炎症因子IL-6、IL-1β、IL-17和TNF-α的转录水平(P<0.05);同时能够显著抑制LPS诱导的NF-κB p65和P38 MAPK磷酸化蛋白水平、抑制IL-6蛋白的表达(P<0.05)。结论柚皮苷抑制脂多糖致HaCaT细胞炎症反应,发挥改善银屑病的作用,机制可能与抑制P38 MAPK/NF-κB信号通路有关。

柚皮苷对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞损伤保护作用

目的探讨柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,用H_2O_2诱导建立细胞凋亡模型。实验设对照组、模型组、柚皮苷低、中、高剂量组(10、20、40μmol/L),噻唑蓝法检测细胞活力并用显微镜观察各组细胞形态;原位末端标记法检测H9c2心肌细胞凋亡情况;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax、caspase-3 m RNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率[(17.2±2.1)%]明显升高(P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组细胞凋亡率[分别为(10.7±1.9)%、(5.7±1.2)%、(6.4±1.5)%]均下降(均P<0.05)。与对照组比较,模型组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平(0.76±0.16)明显下调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(5.42±0.52)、(1.09±0.11)]均上调(均P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平[分别为(1.37±0.11)、(1.65±0.09)、(1.65±0.15)]均上调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(2.78±0.55)、(3.43±0.15)、(2.69±0.26)和(0.59±0.08)、(0.77±0.06)、(0.82±0.05)]均下调(均P<0.05)。结论柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤具有一定保护作用,其机制可能与其对凋亡信号途径的抑制作用有关。

姜黄素类似物H8通过ERK信号通路改善糖尿病小鼠肾脏纤维化的研究

目的探讨姜黄素类似物H8改善糖尿病小鼠模型肾纤维化的作用和机制。方法选取9周龄糖尿病db/db小鼠和db/m小鼠,分为正常对照组(db/m,Con)、糖尿病组(db/db)、H8治疗组(db/db+H8),每组8只。各组自给药开始计时,第8周末处死,采集血液和肾脏组织,检测H8对血清尿素(UR)、Scr、SUA特征指标的影响;HE染色、Masson染色观察肾脏病理形态变化;RT-PCR检测小鼠肾组织中胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)、波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达;Western blot检测ColⅠ、Vimentin、p-ERK、ERK的蛋白表达。结果 db/db+H8组血清UR、Scr、SUA降低(P<0.05);HE、Masson染色显示,H8能改善db/db小鼠肾脏组织炎症侵袭、胶原蛋白累积与肾纤维化;与db/db组比较,db/db+H8组的RT-PCR显示ColⅠ、Vimentin mRNA水平下降(P<0.05),Western bolt结果显示,ColⅠ、Vimentin、p-ERK蛋白表达水平也降低(P<0.05或P<0.01)。结论 H8能改善db/db小鼠肾脏纤维化,可能与抑制ERK信号通路有关。

姜黄素类似物H8对db/db小鼠内脏脂肪代谢影响

目的探讨姜黄素类似物H8对db/db小鼠(糖尿病模型)内脏脂肪代谢的影响及机制。方法将db/db小鼠随机分为模型组、阳性对照组(罗格列酮5 mg/kg),H8低、高剂量组(5、10 mg/kg);连续干预8周,称量小鼠体重和内脏脂肪重量,检测血液生化指标,取肾周脂肪组织石蜡包埋,HE染色观察内脏脂肪细胞,免疫荧光法检测内脏脂肪细胞F4/80表达水平;Real-time PCR法检测脂代谢合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、固醇调节元件绑定蛋白(SREBP)mRNA表达水平,蛋白印记法检测FAS、ACC1、SREBP的蛋白表达。结果与模型组比较,低、高剂量H8组小鼠内脏脂肪系数[分别为(3.20±0.23)%、(2.93±0.75)%]明显降低、内脏脂肪细胞体积[分别为(304.7±24.8)、(331.3±18.0)明显缩小(均P<0.01),内脏脂肪细胞F4/80表达水平[分别为(0.39±0.06)、(0.43±0.04)]显著降低,脂肪合成相关基因FAS[(217.0±46.5)、(249.1±31.4)]、ACC1 [(54.9±5.4)、(50.4±5.3)]、 SREBP[(14.2±1.7)、(13.4±1.5)]mRNA表达水平均明显下降(均P<0.01),脂肪合成相关蛋白FAS[(0.69±0.03)、(0.41±0.06)]、ACC1[(0.11±0.02)、(0.07±0.01)]、SREBP[(0.36±0.05)、(0.41±0.06)]表达也显著降低(均P<0.01)。结论姜黄素类似物H8能够改善db/db小鼠内脏脂肪代谢。