蟾酥对白血病多药耐药细胞CEM/VCR逆转作用的研究

目的研究蟾酥逆转白血病多药耐药细胞CEM/VCR的作用机制。方法光镜下观察不同浓度长春新碱(VCR)作用于CEM/VCR细胞和蟾酥处理的CEM/VCR细胞后细胞形态学变化;Western blot检测上述两组细胞P53、Bcl-XL、Bak蛋白的表达。结果光镜下见各实验组细胞体积缩小,细胞膜皱缩、破损,甚至出现细胞碎片,染色质凝聚成块,似凋亡小体等特征,细胞的这种变化蟾酥处理的实验组更为明显。Western blot结果显示,与对照组比较:各实验组能下调BclXL蛋白的表达,并随药物浓度的升高、作用时间的延长,Bcl-XL蛋白的表达呈下降趋势;各实验组能上调Bak、P53蛋白的表达,且与随药物浓度增加和作用时间的延长呈正比关系,与对照组比较有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论蟾酥逆转白血病CEM/VCR细胞多药耐药的作用机制可能与下调Bcl-XL蛋白和上调Bak蛋白的表达,使Bcl-XL/Bak的比值下降,以及上调P53蛋白的表达,促进CEM/VCR细胞凋亡有关。

肿节风水提物诱导白血病CEM细胞凋亡的机制

目的探讨肿节风水提物诱导CEM细胞凋亡作用的机制。方法用浓度不同的肿节风水提物对CEM细胞发生作用24、48、72h后,采用逆转录PCR技术检测凋亡相关基因bcl-2、bax和p53的表达,研究肿节风诱导白血病CEM细胞凋亡的机制。结果肿节风水提物能降低CEM细胞bcl-2基因的表达,并随药物浓度的升高、作用时间的延长,bcl-2基因的表达逐渐下降,作用48、72h后,与对照组比较有显著差异(P<0.05);同时能增强bax和p53基因表达,且随用药浓度的加大和作用时间的延长呈正比关系,与对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论肿节风水提物诱导白血病CEM细胞凋亡的机制与下调bcl-2基因和上调bax基因的表达,使bcl-2/bax的比值下降,同时还与上调p53基因的表达有关。

附子水提物诱导白血病CEM细胞凋亡的实验研究

目的研究附子水提物对白血病CEM细胞增殖的影响及其可能机制。方法应用不同浓度的附子水提取物作用于白血病CEM细胞24、48、72h后,经MTT试验计算其抑制率;镜下观察CEM细胞形态改变;DNA凝胶电泳检测CEM细胞凋亡情况。结果附子水提物对白血病CEM细胞具有较强的增殖抑制作用,其抑制作用呈现出时间和剂量依赖性,与对照组比较存在极显著性差异(P<0.01)。附子水提物作用CEM细胞24、48、72h后的半数抑制生药浓度(IC50)分别为1.74,0.15和0.04mg/ml。实验组镜下CEM细胞体积缩小,胞膜皱缩,膜表面微绒毛发生缺失或脱落,胞浆浓缩,细胞核固缩,染色质边集、凝聚,附在核膜周边,出现新月形、圆形等凋亡小体的特征性改变。凝胶电泳见附子提取物处理组出现了明显的DNA梯形条带。结论附子水提物具有抑制白血病CEM细胞的增殖作用,其抑制机制可能是通过诱导细胞凋亡而实现的。

三七炮制的历史沿革及现代研究进展

三七为名贵大宗药材,笔者通过查阅历代本草著作、现代法典等相关文献资料,梳理三七炮制历史沿革,厘清三七炮制发展脉络。在此基础上,以三七炮制品的现代研究为切入点,分别从炮制工艺、炮制前后化学成分和药理作用变化等方面进行文献分析。根据三七炮制研究现状,分析其存在的问题,如三七古代炮制方法多样但现代沿用较少;炮制工艺缺乏规范化研究;皂苷类、多糖类、氨基酸类及黄酮类成分在三七炮制前后会发生不同程度的变化,这是造成三七炮制前后药效差异的主要原因,而目前关于三七的药理作用研究主要集中在生品方面,比较三七炮制前后药效变化的研究较少,致使三七生熟差异转换机制研究不深,“生消熟补”的科学内涵未能阐述清楚,不利于临床的规范用药。因此,有必要进一步分析三七及其炮制品的药效物质基础,探究炮制前后化学成分的变化规律及其与药效活性的相关性,以阐明炮制机制,为其规范化炮制、质量控制及临床合理用药提供科学依据。

基于UPLC-Q-TOF-MS的建昌帮砂仁陈皮制熟地黄适宜炮制时间分析

目的:研究建昌帮砂仁陈皮制熟地黄炮制过程中差异代谢物和苷类分解产物还原糖的相对含量变化,为揭示该特色品种的炮制原理奠定基础。方法:以建昌帮砂仁陈皮制熟地黄的0~54 h炮制过程样品为研究对象,运用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)检测其次级代谢产物,以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(0~1 min,1%~3%B;1~10 min,3%~9%B;10~15 min,9%~12%B;15~22 min,12%~18%B;22~31 min,18%~24%B;31~35 min,24%~100%B;35~36 min,100%~5%B;36~40 min,5%~1%B;40~45 min,1%B),柱温40℃,进样量3μL,流速0.3 mL·min^(-1);运用电喷雾离子源(ESI),在负离子模式下进行扫描并采集MS数据,扫描范围m/z 50~1250,利用PeakView 1.2进行数据分析,结合文献信息及化学成分数据库对砂仁陈皮制熟地黄化学成分进行鉴定;MS数据通过MarkerView 1.2归一化处理后应用多元统计分析方法找出差异代谢物,分析差异代谢物相对含量随炮制时间不同的变化规律,最后对各差异代谢物之间进行相关性分析,并结合还原糖含量变化情况,确定建昌帮砂仁陈皮制熟地黄的最适宜炮制时间。结果:从砂仁陈皮制熟地黄不同炮制时间样品中共鉴定121个化合物,通过多元统计分析筛选出梓醇、橙皮苷、异类叶升麻苷、毛蕊花糖苷、芸香柚皮苷、松果菊苷、异地黄苷、脱咖啡酰基毛蕊花糖苷、6-O-E-阿魏酰基筋骨草醇、二羟基-7-O-新橙皮苷、焦地黄苯乙醇苷D、地黄苦苷12个差异代谢物。随炮制时间的延长,这12个差异代谢物和还原糖的相对含量在52~54 h变化幅度较小。结论:利用UPLC-Q-TOF-MS可以全面、精确地辨识不同炮制时间砂仁陈皮制熟地黄的化学成分,根据差异代谢物和还原糖相对含量变化确定其适宜炮制时间为52~54 h,为揭示该品种炮制原理的科学内涵提供了实验依据。