抗肠道病毒71型特异性卵黄抗体的制备及鉴定

目的:制备特异性抗肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的卵黄抗体并检测其生物学性能,这对EV71感染手足口病的预防和治疗具有重大的意义。方法:用纯化并灭活后EV71作为抗原免疫健康产蛋鸡。采用本实验室水提综合聚乙二醇法提取纯化鸡卵黄抗体;用Bradford法测定卵黄抗体提取液的蛋白含量;还原性SDS-PAGE凝胶电泳分析测定提取蛋白的纯度及相对分子质量;分别用ELISA、双向免疫琼脂扩散检测纯化特异性卵黄抗体抗EV71效价;Western blot分析特异性卵黄抗体的免疫反应性。结果:卵黄中卵黄抗体含量达7.76 mg/ml,卵黄抗体的纯度为94.86%。初免10天后蛋黄中可检测到特异性抗EV71卵黄抗体,初免40天后ELISA检测抗体效价高达1∶20 480,双向琼脂扩散检测效价达1∶16。提取的卵黄抗体具有良好的免疫反应性,能与EV71特异性结合。结论:水提综合聚乙二醇法提取纯化得到的抗EV71卵黄抗体产量和纯度高、效价好且具有良好的免疫反应性。

血桐叶提取物抑菌活性及抗氧化作用研究

研究血桐叶提取物的抑菌及抗氧化活性,为血桐的开发利用提供科学依据。首先以70%乙醇回流提取血桐叶,依次用不同有机溶剂萃取,得到石油醚、乙酸乙酸、正丁醇萃取部位和水层部位;然后采用滤纸片法与最低抑制浓度法,考察血桐醇提取物各萃取部位对5种实验菌的抑菌效果;采用福林一酚法、DPPH法和邻苯三酚法分别测定血桐各萃取物的总多酚含量及其对自由基和超氧阴离子(.O2-)的清除作用。结果表明:血桐石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物对金色葡萄球菌、白色葡萄球菌、藤黄微球菌均具有较强的抑菌效果,其最低抑制浓度(MIC)为0.2～0.6mg/mL,对大肠杆菌、枯草芽胞杆菌的抑制作用均较弱。石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水层萃取物4个部位的酚性含量分别为16.35%、30.38%、50.73%、24.64%。DPPH法与邻苯三酚法测定血桐醇提物不同萃取部位的抗氧化能力大小顺序为正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>水层部位>石油醚萃取物。血桐叶提取物具有较强的抑菌及抗氧化活性,为进一步研究其抑菌和抗氧化机理提供了科学依据。

血桐叶水提物对人结肠癌LoVo细胞的增殖抑制作用

水煮浸提血桐叶,减压浓缩后冻干制成粗体样品;以MTT、生长曲线法、集落形成实验考察血桐叶提取物对人结肠癌LoVo细胞的增殖抑制作用,并且以倒置显微镜观察其对细胞形态影响.实验结果表明,血桐叶水提物对LoVo细胞的增殖有显著抑制作用,呈明显剂量依赖关系,并且对细胞的形态有改变作用.

抗甲型流感鸡卵黄抗体的制备及效价测定

目的:研究抗甲型流感卵黄抗体的制备与纯化,并探讨其效价随免疫时间的变化关系。方法:用灭活甲型流感病毒复合抗原免疫蛋鸡,用PEG6000对卵黄抗体进行分离提取,SDS-PAGE法对其进行分子量测定,考马斯亮蓝法对其含量和纯度进行测定,用微量凝集法检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体的效价。结果:提取得到的卵黄抗体重链分子量为66 kDa、轻链分子量分26 kDa,每毫升卵黄液可得到纯度为95.80%的卵黄抗体9.98mg,回收率93.01%;高效价持续时间90 d以上;免疫蛋鸡血清和卵黄中3种特异性抗体的消长规律基本相似,但抗体水平之间存在明显的差异。结论:采用灭活甲型流感病毒复合抗原免疫蛋鸡可制备高效价、高纯度抗甲型流感卵黄抗体,为卵黄抗体在甲型流感防治中的应用研究奠定了基础。