机械信号转导在血小板粘附等过程中的研究进展

血小板是由巨核细胞生成的细胞质片状结构,主要功能为止血和组织修复。血小板功能的发挥不仅涉及其形态上的改变,还涉及多种血小板相关分子在血流机械剪切力环境下发生的构象变化,这些构象变化可导致更多或更强的蛋白分子间相互作用以及生物化学信号转导。近年来,随着机械信号转导(Mechanotransduction)检测技术的发展和应用,血小板机械信号转导亦得到多方面研究,这些研究对阐明血小板生理病理下的变化具有重要意义。本文就该方面的研究进展做一简要概述。

乙肝表面抗原核酸疫苗在小鼠体内的阳性表达

目的 :用乙肝表面抗原核酸疫苗免疫小鼠 ,探讨其在体内的表达。方法 :用含乙肝表面抗原基因的质粒载体肌注小鼠 ,免疫组化法检测HBsAg在注射部位肌组织、局部淋巴结、脾脏的表达 ;进一步用ELISA法检测血清中抗HBsAg抗体 ;脾淋巴细胞特异及非特异性增殖试验。结果 :一次免疫后 ,在注射部位肌组织可见HBsAg阳性表达 ;二次免疫后 ,在脾、局部淋巴结可见HBsAg阳性染色。血清抗体出现阳性 ;特异性抗原及ConA均可刺激脾淋巴细胞增殖。结论 :乙肝核酸疫苗肌注小鼠后 ,在骨骼肌、淋巴结、脾脏组织中HBsAg呈阳性表达 ,并出现了一定免疫应答效应。

EGFR外显子19、21突变等位基因特异性PCR检测方法的建立

目的建立一种人表皮生成因子受体(EGFR)外显子19、21突变等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法根据EGFR外显子19、21野生型和突变型设计特异性引物,提取健康人和非小细胞肺癌患者血中有核细胞的基因组DNA作为模板,采用等位基因特异性聚合酶链式反应扩增EGFR外显子19、21突变基因。结果特异性引物可以扩增EGFR外显子19缺失突变的2种类型和外显子21的错义突变。结论等位基因特异性PCR法可以用于检测人EGFR外显子19、21突变。

转染EGFRL858R的肺腺癌细胞中IL-6和VEGF表达水平及其意义

目的:探讨肿瘤细胞癌基因表皮生长因子受体(EGFR)L858R型突变与肺腺癌恶性转移患者癌细胞中白细胞介素6(IL-6)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的关系及其意义。方法:将含EGFRL858R全长基因质粒的载体转染EGFR野生型肺腺癌细胞系H460(EGFRL858R-H460组),空载体转染H460细胞作为对照组(Vec-H460组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGF mRNA表达水平。将含IL-6siRNA的载体转染带有EGFRL858R型突变的细胞系H1975(IL-6siH1975组),转染空载体的H1975细胞作为对照组(Vec-H1975组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGF mRNA表达水平,Western blotting法检测2组细胞中VEGF蛋白表达水平。结果:与Vec-H460组比较,EGFRL858R-H460组细胞中IL-6和VEGF mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与Vec-H1975组比较,IL-6siH1975组细胞组IL-6和VEGF mRNA表达水平明显降低(P<0.01),VEGF蛋白表达强度明显降低。结论:肺腺癌细胞系中EGFRL858R型突变可升高肺腺癌患者癌细胞中IL-6和VEGF mRNA表达水平,其中IL-6mRNA水平升高可能是VEGF mRNA表达水平升高的原因,这些变化可能是EGFRL858R型突变参与肺腺癌恶性转移进程的途径之一。

抗绿脓杆菌单抗制备及对小鼠绿脓杆菌感染的保护性作用

目的制备抗绿脓杆菌单克隆抗体,观察其对绿脓杆菌感染的烧伤小鼠及正常小鼠的保护作用。方法应用NS-1细胞和经绿脓杆菌免疫后的BALB/C小鼠脾细胞制备杂交瘤细胞株,收集其分泌的抗体,观察其对绿脓杆菌感染的Ⅲ°烧伤小鼠及正常小鼠的免疫保护作用。结果该单克隆抗体可预防绿脓杆菌感染。结论我们的研究结果为抗绿脓杆菌单克隆抗体在临床上应用的可行性提供了实验室基础。

感染与特应性疾病

流行病学调查发现 ,人群中感染性疾病发病率和特应性疾病发病率呈负相关。研究表明 ,感染性疾病通过诱导Th1型免疫应答抑制了变应原特异性Th2型细胞的发育 ,从而起到防止特应性疾病发生的作用 ;但当感染发生在特应性疾病慢性期时 ,通常产生Th1/Th2型混合应答 ,可导致病情恶化 ;肠内寄生虫感染诱导的Th2型免疫应答虽然可以促进变应原特异性Th2细胞发育 ,但有可能产生的多克隆IgE竞争性地抑制了变应原特异性IgE对肥大细胞的触发 ,从而阻碍了特应性疾病的发生。尚有作者发现弓型虫和呼吸道合胞病毒感染与特应性疾病的发生有正相关性 。

B细胞特异性激活蛋白研究进展

B细胞特异性激活蛋白（BSAP）是近年来新发现的B细胞核反式作用因子，属转录因子的pax基因家族成员，其蛋白结构已经清楚。在淋巴系统内，仅B细胞可产生这一因子，其功能是在B细胞发育早期，调节B细胞多种特异性基因表达；B细胞被激活后、促进B细胞的增殖及同型转换。但BSAP对免疫球蛋白的基因转录起抑制作用，因此，在B细胞分化晚期，BSAP水平下降时，可使免疫球蛋白分泌增加。

肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体的生物学特性

目的:分离并鉴定肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体,对其生物学特性进行研究,为开发抗肠出血性大肠埃希菌O157的生物制剂提供实验依据。方法:以肠出血性大肠埃希菌O157为宿主菌,采用噬斑法从环境污水中分离出针对肠出血性大肠埃希菌O157的噬菌体。噬菌体经超滤浓缩后,电镜观察其大小和形态;将宿主菌和噬菌体以不同的比例混合,测定噬菌体的最佳感染复数并观察其一步生长曲线;利用SDS-PAGE分析噬菌体的结构蛋白和非结构蛋白;提取噬菌体基因组,进行酶切电泳分析。结果:电镜显示噬菌体的头部呈球形、直径40nm,噬菌体的尾部长约80nm。噬菌体的最佳感染复数为10-2,即当宿主菌和噬菌体之间的比例为1∶100时裂解效率最高。一步生长曲线示噬菌体在裂解宿主菌时,潜伏期约为10min,爆发期约为30min,裂解量为130。SDS-PAGE凝胶电泳呈现13种蛋白,相对分子质量为16 000～22 000。琼脂糖凝胶电泳显示噬菌体基因组大小约23 000bp。结论:成功分离并鉴定一株针对肠出血性大肠埃希菌O157的噬菌体,是一种裂解性强、特异性高的毒性噬菌体,肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体属于有尾病毒目,管尾噬菌体科。

脐血单个核细胞治疗大脑中动脉闭塞性脑梗塞大鼠后行为学及胆碱能变化

目的:观察人脐血单个核细胞(Umbilical cord blood mononuclear cells,UCBMC)对大脑中动脉闭塞性脑梗塞大鼠的治疗作用。方法:制备脑梗塞大鼠大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将UCBMC给予脑梗塞大鼠进行治疗。用平横木行走实验评价大鼠运动功能;用TTC染色法观察脑梗塞区坏死比例;测定各组大鼠脑组织和血浆中乙酰胆碱(Acetylcholine,Ach)浓度和乙酰胆碱酯酶(True choline esterase,TChE)活性。结果:与MCAO组相比,给UCBMC组大鼠行为学评分明显升高(P<0.05),大脑坏死面积显著减少(P<0.01),脑组织中TChE活性和血浆中的TChE活性及Ach水平明显增强和增高(P<0.05)。结论:静脉注射UCBMC可促进脑梗塞大鼠中枢神经系统功能恢复及胆碱能系统恢复。

低密度脂蛋白氧化及其对骨生成的抑制作用

低密度脂蛋白（LDL）可以通过金属离子、酶、蛋白质糖基化和NO等多种途径发生氧化，主要生成弱氧化低密度脂蛋白（mmLDL）和氧化低密度脂蛋白（oxLDL）。LDL氧化产物可以通过多种成骨相关信号通路影响成骨分化。

最低限度免疫定义基因表达的HCV多表位DNA疫苗对小鼠细胞免疫的诱导作用

目的:探讨采用最低限度免疫定义基因表达法制备丙型肝炎病毒(HCV)多表位DNA疫苗的可行性,阐明该方法在疫苗领域可能的应用价值。方法:采用人工合成和PCR方法制备长度为1 346bp的含有CMV启动子、HCV 1b亚型多表位和牛生长激素(BCG)多聚腺苷酸序列的最低限度免疫定义基因表达DNA疫苗,命名为M-HCV-epi;同时制备结构基因被非HCV同源的DNA序列替换的相同长度DNA片段作为对照,命名为V-pcDNA3.1。12只ICQ小鼠随机分为实验组(n=6)和对照组(n=6),分别采用M-HCV-epi DNA和V-pcDNA3.1DNA各20μg皮下注射。QRT-PCR法检测免疫后小鼠脾细胞中干扰素γ(IFN-γ)mRNA的表达水平;人工合成3个HCV 1b亚型表位多肽和1条对照多肽。用上述合成的多肽刺激免疫后小鼠脾细胞,ELISA法检测脾细胞刺激上清中IFN-γ水平。结果:与对照组比较,实验组小鼠脾细胞中IFN-γmRNA表达水平升高(1.50±0.18)倍(P<0.05);加入aa35-44多肽的实验组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ水平较对照组明显升高(P<0.05)。结论:最低限度免疫定义基因表达法制备HCV多表位DNA疫苗可诱导细胞免疫反应,该方法在DNA疫苗领域可能具有应用价值。

硒和维生素E对克山病病区粮喂养大鼠胰淀粉酶活性的影响

饲予大鼠低硒的克山病病区粮引起血清与胰腺组织内淀粉酶活性明显降低,血液及胰腺谷脱甘肽过氧化物酶(GSH—P_x)活性减退,水溶性脂质过氧化物(LPO)含量升高。在病区粮内补一定剂量硒或维生素E(VE)可明显升高其GSH—P_x活力,降低LOP含量,增加血清及胰腺淀粉酶活性。提示病区粮中的致病因素可损害胰腺外分泌功能,其发生机制可能与硒和VE缺乏引起的过氧化损害有关。

林业种植工程中幼林抚育技术要点

幼林抚育是林业种植工程中的一项重点工作,加强幼林抚育有利于提高产量,保证林业种植工程的综合效益。工作人员要对幼林抚育技术进行合理应用,明确幼林抚育的技术要点,加强对幼林的种植管理,从而为林木健康生长打下良好基础。鉴于此,本文首先分析了幼林抚育中存在的问题,其次提出了林业种植工程中的幼林抚育技术要点。

基于网络药理学方法探讨蛇床子治疗骨质疏松可能的分子途径

目的采用网络药理学方法探讨蛇床子抗骨质疏松的可能分子途径。方法利用中药系统药理学数据库(TCMSP)筛选蛇床子活性成分,预测靶蛋白和相互作用蛋白;用TTD和CTD数据库查询骨质疏松靶蛋白,预测相互作用蛋白,构建药物–靶蛋白–疾病交互网络;用DAVID数据库富集并分析靶蛋白信号通路;通过Systems Dock软件将蛇床子活性成分与重要的靶蛋白进行分子对接验证。结果筛选得到蛇床子活性成分19个、靶蛋白72个、骨质疏松疾病靶蛋白118个;经相互作用蛋白(PPI)网络交集后,获得药物和疾病共同靶蛋白91个;富集得到26条信号通路;β-谷固醇、豆甾醇、24-epicampesterol、poriferast-5-en-3β-ol与SRC、ESR1靶蛋白具有良好的分子对接活性。结论蛇床子可能通过激活甲状腺激素信号通路中的SRC和ESR1起到治疗骨质疏松的作用。

人乳头瘤病毒16型E7基因原核表达载体的构建及表达

目的:构建人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E7基因原核表达载体,观察目的基因的蛋白表达。方法:人工合成HPV16E7基因核苷酸序列,利用特异性引物通过聚合酶链反应扩增HPV16E7基因,并克隆至pGEX-4T1原核表达载体,构建重组表达载体pGEX-4T1-HPV16-E7。将其转化到工程菌Rosetta后,经IPTG诱导表达,进行E7-GST融合蛋白的SDS-PAGE分析和Ni 2+-NTA亲和层析纯化。结果:E7基因PCR扩增产物和重组表达质粒的双酶切产物经琼脂糖凝胶电泳,均可见300bp的目的基因条带。表达的重组蛋白经SDS-PAGE电泳和纯化后,在相对分子质量约36 000处有特异性表达带,与预期相符。结论:在原核系统中含E7基因的重组质粒可有效表达E7-GST融合蛋白。

钙对模拟克山病偏食喂养大鼠甲状腺素代谢的影响

本文研究了克山病偏食饲料及在这种饲料中补充钙和硒、VitE对大鼠甲状腺素代谢的影响。结果表明,用偏食饲料喂养大鼠的血清钙水平仅及常规食组一半,T_3↓、T_4↑、TSH↑;饲料补钙后T_3↑、T_4↑、TSH↓;补硒、VitE后T_3↑、T_4↓、TSH↓,表明钙在病区粮偏食喂养大鼠的甲状腺素代谢中起重要作用,补充钙同时补充硒和VitE效果更好。

硒和维生素E对饲予克山病病区粮大鼠心、肝、肾、胰抗脂质过氧化能力的影响

硒和维生素Ｅ对饲予克山病病区粮大鼠心、肝、肾、胰抗脂质过氧化能力的影响张桂珍，李广生，王凡，张秀云，温剑平白求恩医科大学地方病研究所（长春１３００２１）ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅＧＳＨ－ｐｘａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＩＰＯｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎｍｙｏｃａｒｄｉ...

背压对并列双支管内高压成形充模能力与壁厚的影响

为了探究并列双支管内高压成形过程中管件成形性能,本文采用数值模拟方法研究了背压对管件充模能力以及壁厚的影响。结果表明：在最大内压和轴向进给量不变的情况下,相比无背压冲头的加载路径,具有背压加载路径的并列双支管的充模能力提高5.6%,支管顶部最大减薄率降低39%,有效防止了管件破裂。背压加载路径有效提高管件的充模能力和延缓壁厚减薄,从而提高管件成形性能。随着背压冲头后退速度增加,并列双支管的充模能力基本不变,最大减薄率和支管高度增大。