噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库的构建

目的构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,研究IgA结合分子结构与功能的关系。方法基因合成IgA亲和体ZA1、ZA2片段。片段两端引入Kpn I酶切位点,3′端引入随机连接肽序列,Kpn I酶切,随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S的Kpn I克隆位点上,转化大肠杆菌TGI,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示随机组合文库。结果基因合成IgA亲和体;构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,容量为3·4×107,滴度为1·6×1012TU/L;文库中含79%以上的阳性克隆;序列分析显示组合文库由ZA1、ZA2随机组合而成,连接方式符合随机连接的特点,各亲和体之间连接肽序列也呈随机分布。结论合成IgA亲和体,构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,该文库库容量、多样性和随机性可满足体外分子进化研究的要求。

IgA亲和体随机组合噬菌体文库的构建和体外分子进化

目的构建IgA亲和体随机组合文库并进行体外分子进化,研究IgA亲和体分子结构与功能的关系。方法基因合成两个IgA亲和体片段。3′端引入3个随机连接肽序列随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示随机组合分子文库。以人IgA为靶分子对该文库进行4轮亲和筛选。制备阳性筛选克隆的单克隆噬菌体,用ELISA鉴定IgA结合活性。结果成功构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合分子文库,库容量为3.4×107,滴度为1.6×1012TU/L,阳性克隆占79%以上,序列分析IgA亲和体随机连接,随机连接肽序列呈随机分布。在人IgA分子诱导的分子进化过程中,展示多个IgA亲和体串联体的噬菌体比例明显增加,获得3种新型IgA亲和体组合分子结构形式:IgA亲和体二联体、三联体和四联体。ELISA结合实验表明IgA亲和体三联体和四联体的IgA结合能力远大于单体和二联体。结论通过构建IgA亲和体噬菌体展示随机组合文库和体外分子进化的方法,获得多种新型组合分子,其中IgA亲和体三联体和四联体的IgA结合能力明显增加,提示通过有效的分子进化成功地获得了高亲和力的IgA结合分子。

结核分枝杆菌特异性蛋白片段Rv3388和6种特异抗原在结核抗体检测中的应用价值

目的 对结核分枝杆菌（ MTB） PE家族的所有成员的结构进行分析,预测其抗原表位,截取Rv3388蛋白的优势抗原片段,对重组Rv3388蛋白及其它6种MTB特异性抗原进行评估,探讨不同结核特异性抗原与血清抗体的反应模式,评价血清学检测在结核病诊断中的价值. 方法 利用基因合成技术重叠延伸PCR扩增Rv3388蛋白637-731位的编码基因片段, 原核表达并纯化重组蛋白pET32a/Rv3388637-731 ,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法对该抗血清进行免疫原性分析. 同时对这7种MTB特异性蛋白的特异性及敏感性进行评价. 结果 重组蛋白pET32a/Rv3388637-731在大肠杆菌中的表达量占全菌蛋白的80%,ELISA显示有较强的免疫原性. 7 种 MTB特异性抗原具有不同的反应模式,单个抗原检测敏感性较差. 结论 对MTB PE家族的蛋白结构分析,表达并纯化重组蛋白pET32a/ Rv3388637-731 ,7种蛋白在血清抗体检测中具有抗原互补性,不同抗原与机体反应存在不同反应模式,提高结核抗体检测敏感性应多种抗原联合检测.

胸椎旁神经阻滞联合自控静脉镇痛对胸腔镜肺癌根治术后免疫功能及不良反应的影响

目的:分析胸椎旁神经阻滞(TPVB)联合自控静脉镇痛(PCIA)对胸腔镜肺癌根治术后免疫功能及不良反应的影响。方法:根据自愿接受的镇痛方式将120例于胸腔镜行根治术的非小细胞肺癌(NSCLC)患者分为研究组和对照组,每组各60例。研究组患者采用术中TPVB联合术后PCIA进行镇痛;对照组患者仅采用术后PCIA进行镇痛。对两组患者术后48 h内PICA按压次数、术后6 h、12 h、24 h、48 h的静息状态及咳嗽状态下视觉模拟量表(VAS)评分、术前1 d及术后48 h时的外周血CD4~+T淋巴细胞比例、CD8~+T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+T淋巴细胞比值、血清皮质醇(Cor)、前列腺素E2(PGE2)、术后镇痛不良反应发生率进行记录和对比。结果:在术后48 h内,研究组患者的PICA按压次数少于对照组(P<0.05)。在术后各时点,研究组患者静息及咳嗽状态下的VAS评分均低于对照组,组间效应、组内效应、组间组内交互效应均有统计学意义(P<0.05)。在术后48 h时,两组患者的外周血CD4~+T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+ T淋巴细胞比值均较术前下降(P<0.05),而外周血CD8~+T淋巴细胞比例及血清Cor、PGE2水平却均较术前上升(P<0.05)。此外,研究组患者的外周血CD4~+T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+ T淋巴细胞比值高于对照组,而外周血CD8~+T淋巴细胞比例及血清Cor、PGE2水平、术后镇痛不良反应总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:相对单独采用PCIA,在胸腔镜NSCLC根治术中采用TPVB联合PCIA的方式能够在术后早期达到更好的镇痛效果,缓解术后免疫功能损害,降低应激水平,减少PCIA的使用频率,降低镇痛不良反应发生率。

两种方法建立人肾透明细胞癌裸鼠原位移植转移模型及其比较

目的建立人肾癌裸小鼠原位移植转移模型,并比较两种不同方法的结果。方法将肾癌完整组织块和肿瘤细胞悬液种植于裸小鼠肾包膜形成原位移植瘤,并观察和比较两种方法所建立模型的肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率。结果肾癌完整组织块接种的原位成瘤率达75·0%,肾、肺门淋巴结转移率均73·3%,肺转移发生率53·3%;细胞悬液种植的原位成瘤时间较组织块法延迟10d,成瘤率为40·0%,肺、肾门淋巴结转移率均12·5%,肺脏无转移。结论两种原位移植转移模型均具有人肾细胞癌自然生长过程的特点,肾癌完整组织块原位移植模型优于细胞悬液原位接种模型,为研究人肾细胞癌转移机制和抗转移实验治疗提供了有力工具。

HIV-1 HXB2株蛋白酶在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

目的原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(Protease,PR),用于对HIV-1GagP2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选。方法根据HIV-1HXB2株PRDNA序列设计引物,用重叠延伸PCR方法合成使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体进行测序。将HIV-1PRDNA克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和柱对表达蛋白进行纯化,SDS-PAGE鉴定,并用HIV阳性血清进行免疫反应性的鉴定。结果合成的使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经测序显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致。所构建的HIV-1PR原核表达质粒pQE30-pr,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为14000的HIV-1PR蛋白,纯化的目的蛋白浓度为7.74mg/ml。ELISA检测该蛋白与HIV阳性血清呈特异性反应。结论已成功合成并克隆了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经表达及纯化的HIV-1PR蛋白具有免疫学特性。

HIV Gag CAP2NC噬菌体蛋白酶切割模型的构建

HIV蛋白酶(protease,PR)耐药突变的大量出现严重地影响了AIDS的治疗.应用突变PR对展示HIVPR靶序列随机文库的噬菌体进行切割筛选,可获得突变PR的敏感噬菌体,该噬菌体可用于针对HIVPR耐药突变株的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)新药筛选.为了探索这一可能性,将包含HIVPR靶位点P2/NC序列的Gag蛋白CAP2NC片段展示于噬菌体表面,并在该片段的N端连接一可与人免疫球蛋白分子特异结合的固相化标签序列LD3,将该噬菌体固定于人免疫球蛋白包被的酶标板上,用HIVSF2PR进行切割,用抗M13噬菌体酶标抗体ELISA法检测未被切割的剩余噬菌体以反映切割效果.结果表明,所构建的噬菌体能被HIVPR有效切割,最大切割效应可达80%以上,其ELISA检测值明显下降,并且该切割效应与HIVPR呈明显的量效关系,能被PI类药物Indinavir(IDV)特异抑制.首次成功构建了展示HIV Gag CAP2NC片段的噬菌体蛋白酶切割模型,不仅可为研究HIVPR的耐药性变异及其靶序列的适应性变异提供一新的研究平台,同时也为构建一种全新的PI类药物,尤其是针对耐药的PI类药物大规模体外噬菌体筛选模型打下基础.

噬菌体展示耐药突变HIV-1蛋白酶敏感切割位点六肽随机文库的构建

目的构建耐药性突变HIV-1蛋白酶(protease PR)敏感切割位点序列体外噬菌体筛选模型,研究HIV-1蛋白酶耐药性突变与敏感切割序列的关系。方法用含随机核苷酸序列的引物PCR方法对HIV-1gag基因上的CAP2片段的PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化,再将重组CAP2片段和NC片段拼接克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANT-AB5S上,建立HIV-1蛋白酶靶蛋白切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果该噬菌体展示文库库容量为2.6×106,滴度为4.1×1015TU·L-1,CAP2片段插入率为47.8%;序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布。结论成功地构建HIV-1蛋白酶的敏感切割序列噬菌体筛选文库,为筛选到突变PR敏感切割序列噬菌体及研究耐药HIV-1蛋白酶抑制剂与突变PR的关系打下基础。

HIV-1 Gag蛋白P2/NC蛋白酶切割位点序列的随机化及噬菌体展示

目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响。方法:PCR扩增制备重组HIV-1gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化;在NC片段5′端设计重叠区域,3′端引入SalⅠ酶切位点。应用Overlapping PCR将CAP2和NC片段拼接并克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANTAB5S上,建立HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果:该噬菌体展示文库库容量为2.1×106,滴度为3.0×1012TU/ml,CAP2/NC片段插入率为52.1%;12个样品的序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布;10个阳性单克隆噬菌体CAP2/NC-LD3-pCANTAB5S样品中9个与IgG特异结合。结论:成功地对HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点进行了随机化并展示于噬菌体表面,构建了其噬菌体展示文库,为筛选耐药性突变的PR敏感切割序列及构建蛋白酶抑制剂噬菌体筛选模型打下基础。

超声引导下竖脊肌平面阻滞和椎旁神经阻滞对VATS患者术后镇痛和恢复影响的比较

目的比较超声引导下竖脊肌平面阻滞和椎旁神经阻滞对VATS患者术后镇痛和恢复的影响。方法纳入拟择期进行VATS的患者80例,年龄18~80岁,ASA分级Ⅰ~Ⅱ级,体重≥40kg。患者被随机分配到竖脊肌平面阻滞组(ESPB组,n=40)和椎旁神经阻滞组(PVB组,n=40),分别使用30、20mL 0.375%罗哌卡因进行阻滞。主要观察指标是术后第1天的40项恢复量表(QoR-40)评分,次要观察指标是术后1、6和12h的NRS疼痛评分。同时记录患者术中舒芬太尼的使用量、术后并发症的发生情况以及患者满意度。结果 ESPB组和PVB组术后第1天的QoR-40量表评分(P=0.829)及术后1、6和12h的NRS疼痛评分差异均无统计学意义(P=0.0655、P=0.423、P=0.426)。两组患者术中舒芬太尼的使用量和术后并发症的发生情况也均无明显差异。ESPB组的患者满意度更高(P=0.0033)。结论超声引导下竖脊肌平面阻滞在加快VATS患者康复和术后镇痛方面与椎旁神经阻滞效果相当。竖脊肌平面阻滞可以作为一种新型的区域神经阻滞技术广泛应用于临床。

细胞外组蛋白对ARDS早期诊断和预后评估的临床价值

目的探究细胞外组蛋白对急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)早期诊断和预后评估的临床价值。方法选择2017年1月—2018年6月同济大学附属上海市肺科医院和北京市朝阳医院急诊重症监护病房(emergency intensive care unit,EICU)收治的ARDS患者67例,并以15名健康志愿者作为健康对照组。根据28 d转归情况将ARDS患者分为生存组(38例)和死亡组(29例)。测定ARDS患者血清中细胞外组蛋白的水平,比较细胞外组蛋白在健康对照组和ARDS患者中的差异以及细胞外组蛋白与ARDS患者预后的相关性;受试者工作特征曲线(ROC)分析细胞外组蛋白对ARDS早期诊断及预后评估的价值。结果和对照组相比,ARDS患者的血清细胞外组蛋白水平明显升高(P<0.000 1),且与患者的预后密切相关(P<0.01)。ROC曲线显示细胞外组蛋白(1 d)对于ARDS的早期诊断的AUC为0.898 5,细胞外组蛋白(3 d)对于判断ARDS患者预后的AUC为0.815 4。结论细胞外组蛋白水平对ARDS的早期诊断和预后评估具有重要参考临床价值。

肺移植术后巨细胞病毒感染的研究进展

巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染是肺移植中最普遍的机会性感染,是导致患者围术期死亡的主要原因。本文阐述肺移植术后CMV感染的研究进展,得出肺移植后CMV感染的研究多集中于预防及治疗,CMV感染的可能机制与炎症、趋化因子、免疫等相关。认为深入阐明肺移植后CMV感染的原因、发病机制、防治措施有望为临床提供新的研究与治疗靶点,以减少患者术后排斥反应及术后移植物功能障碍的发生,提高患者术后生存率。

肺移植术后患者细胞外组蛋白水平变化及意义

目的探讨细胞外组蛋白在肺移植术后血浆中的变化及临床意义。方法选取20例肺移植患者,15例开胸手术对照组和15例健康志愿者作为健康对照组。分别检测肺移植组及开胸手术对照组术前(T1)、术后0 h(T2)、术后24 h(T3)、术后48 h(T4)、术后72 h(T5)及术后7 d(T6)血浆中细胞外组蛋白水平。结果肺移植患者术后细胞外组蛋白水平显著高于术前及健康对照组( P <0.001);术后0时达至峰值(中位数: 0.351 μg/mL;四分位数间距: 0.114,0.468 μg/mL),术后24~72 h呈逐渐下降趋势,但仍高于术前水平。与开胸手术对照组各时间点相比,肺移植组术后细胞外组蛋白水平均高于开胸手术对照组( P <0.001);其中1例原发性移植肺失功(primary graft dysfunction, PGD)患者的细胞外组蛋白水平各时间点均显著高于非PGD患者,持续处于较高水平。结论细胞外组蛋白在肺移植术后显著升高,并且在PGD病程中持续处于较高水平,可能与供肺的缺血再灌注损伤有关,在肺移植早期并发症如PGD中发挥重要作用。

癌症患者服用镇痛药期间怎样克服便秘

临床实践证实，癌症患者（尤其是晚期癌症患者）经常会出现不同程度的便秘，其原因有以下几种：①癌症患者经常会使用镇痛药来缓解疼痛，而镇痛药最常见的副作用就是易使患者出现便秘。阿片类镇痛药是控制癌痛的首选药物。但此类镇痛药会减慢胃肠道的蠕动，

电磁导航支气管镜在肺外周结节诊断中的应用

目的 通过临床应用,对电磁导航支气管镜技术的原理、操作过程、注意事项及应用前景进行初步探索.方法 2014年6月至7月于上海市肺科医院住院,且胸部CT发现外周结节的患者进行电磁导航支气管镜检查,术中导航成功后通过外周超声确认位置,并在X线透视下进行标本获取,送病理学检测.根据检查结果来确定电磁导航支气管镜对肺外周结节的诊断价值.结果 确诊肺癌8例,其中腺癌7例,腺、小细胞混合癌1例;1例病理阴性,抗炎治疗后病灶吸收;最初2例患者病理阴性,手术确诊为肺癌.诊断率为81.82％.导航平均（23.03±16.78） min,病灶直径（25.27±6.63）mm.无并发症发生.结论 电磁导航支气管镜是一项诊断肺外周结节的安全、有效、微创的新兴技术.

113例纵隔畸胎瘤的外科治疗

目的总结纵隔畸胎瘤的外科诊治经验。方法1980年1月至2013年12月，手术治疗纵隔畸胎瘤113例，男48例，女65例，平均年龄（32．6±7．3）岁。后外侧切口55例，胸骨正中切口22例，胸骨T形切口6例，前外侧切口15例，胸腔镜13例，颈胸联合切口2例；单纯肿瘤切除67例，肿瘤切除合并肺切除41例（肺叶切除8例，肺楔形切除33例，心包部分切除21例），无名静脉成形术1例，不全切除2例，肿瘤活检2例。结果平均手术（167．5±46．8）min，平均失血量（271±105）ml，平均术后住院（8．6±3．5）天。围手术期死亡1例，并发症9例（8．0％）。随访96例（85．0％），平均65．4个月。6例恶性畸胎瘤死于复发转移，其他病例无复发转移。结论手术切除是治疗纵隔畸胎瘤的有效措施，切口可选择经胸腔镜、侧胸切口或胸骨正中切口径路。

细胞外组蛋白通过激活TWIK2-NLRP3通路参与脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞损伤

目的:探讨细胞外组蛋白参与脂多糖(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞损伤的作用及机制。方法:体外培养小鼠肺泡巨噬细胞株(MH-S)并传代,取融合生长至80%时的细胞进行实验,用1 mg/L的LPS刺激细胞3 h后以50 mg/L的外源性组蛋白分别刺激细胞3、6、12、24 h(LPS+组蛋白3、6、12、24 h组),并设磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(PBS组)、LPS单独刺激组(LPS组)、外源性组蛋白单独刺激组(组蛋白组)及肝素预处理组蛋白组(肝素+LPS+组蛋白组)。各组细胞经相应处理后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及炎性因子表达,用FluxOR TMⅡ绿色钾离子通道检测试剂盒检测细胞内K^+浓度,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定钾离子通道蛋白(TWIK2)、炎症小体(NLRP3)及凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达。结果:与PBS组比较,单用LPS刺激可使LDH及白细胞介素(IL-1β、IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎性因子水平显著升高。与LPS组比较,加用外源性组蛋白处理后LDH及炎性因子水平显著升高,当组蛋白刺激时间为3 h时达到峰值〔LDH(U/L):123.10±1.83比85.32±1.66,IL-1β(mg/L):40.75±2.60比18.78±1.37,IL-18(mg/L):49.94±2.45比30.19±1.82,TNF-α(mg/L):36.51±1.56比20.84±1.61,均P<0.01〕。Western Blot结果显示,与LPS组比较,NLRP3、ASC及TWIK2蛋白在LPS+组蛋白组表达均明显上调(NLRP3/GAPDH:0.80±0.02比0.57±0.02,ASC/GAPDH:0.57±0.02比0.38±0.01,TWIK2/GAPDH:0.65±0.01比0.41±0.01,均P<0.01),而肝素预处理后上述蛋白表达均明显下调(NLRP3/GAPDH:0.28±0.02比0.80±0.02,ASC/GAPDH:0.25±0.02比0.57±0.02,TWIK2/GAPDH:0.35±0.01比0.65±0.01,均P<0.01),表明组蛋白可通过TWIK2活化NLRP3参与炎症反应。此外,LPS+组蛋白组细胞内K^+浓度较LPS组明显下降(荧光强度:35.48±2.53比83.92±3.11,P<0.01);与LPS+组蛋白比较,给予肝素预处理后K^+浓度明显上升(荧光强度:72.10±1.78比35.48±2.53,P<0.01),表明细胞外组蛋白可通过TWIK2致K^+大量外流从而介导NLRP3活化参与肺泡巨噬细胞炎症损伤。结论:细胞外组蛋白可致肺泡巨噬细胞炎症损伤,其作用机制可能与细胞外组蛋白激活TWIK2通道促进K^+外流从而活化NLRP3有关。

细胞外组蛋白通过介导外周血单个核细胞焦亡加重ARDS炎症反应

目的探讨血浆中细胞外组蛋白能否通过介导外周血单个核细胞(PBMC)焦亡加重急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者炎症反应。方法选择2019年4月至9月同济大学附属上海市肺科医院收治的20例ARDS患者;选择同期进行健康体检的20例健康志愿者作为健康对照组。体内实验:采集ARDS患者确诊24 h内和健康体检者的外周血标本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆细胞外组蛋白以及炎性因子白细胞介素(IL-1β、IL-18)和乳酸脱氢酶(LDH)水平。提取PBMC,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测焦亡标志分子消皮素-D N端(GSDMD-N)蛋白表达。体外实验:分离培养健康志愿者外周血PBMC并分为4组:空白对照组不给予任何处理;脂多糖(LPS)组以1 mg/L的LPS处理细胞4 h;LPS+组蛋白组在LPS处理4 h后加入100 mg/L外源性组蛋白处理24 h;LPS+组蛋白+肝素组在LPS和外源性组蛋白处理后的细胞中加入200 U肝素干预24 h。采用Western Blot试验检测各组细胞GSDMD-N蛋白表达;采用ELISA法检测细胞上清中IL-1β、IL-18和LDH的水平。各指标间相关性采用Spearman检验。结果体内实验结果:与健康对照组相比,ARDS患者PBMC中GSDMD-N蛋白表达明显增加〔GSDMD-N/GAPDH:0.136(0.062,0.246)比0.026(0.018,0.036),P<0.01〕,血浆中IL-1β、IL-18、LDH和细胞外组蛋白水平亦明显升高〔IL-1β(ng/L):120.0(94.2,213.0)比88.5(82.3,105.3),IL-18(ng/L):164.5(70.8,236.3)比60.5(52.0,89.0),LDH(U/L):30.9(24.7,39.5)比19.8(17.2,21.5),细胞外组蛋白(mg/L):73.0(42.8,112.9)比12.2(9.6,16.9),均P<0.01〕,提示ARDS患者PBMC发生显著焦亡且有大量炎性因子释放;ARDS患者氧合指数(PaO2/FiO2)为135.5(94.5,196.0)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)。相关性分析显示,ARDS患者GSDMD-N蛋白表达与PaO2/FiO2呈显著负相关(r=-0.935,P<0.01),与IL-1β、IL-18、LDH以及细胞外组蛋白水平均呈显著正相关(r值分别为0.844、0.843、0.887、0.899,均P<0.01)。体外实验结果:与空白对照组比较,LPS组PBMC中GSDMD-N蛋白表达和细胞上清中炎性因子水平均明显升高〔GSDMD-N/GAPDH:0.035±0.006比0.028±0.006,IL-1β(ng/L):39.8±5.5比22.6±4.7,IL-18(ng/L):31.2±4.4比20.0±2.2,LDH(U/L):51.2±7.3比36.6±7.6,均P<0.05〕,说明LPS刺激能增加PBMC焦亡和炎性因子释放;与LPS组比较,LPS+组蛋白组GSDMD-N蛋白表达和炎性因子水平进一步升高〔GSDMD-N/GAPDH:0.114±0.009比0.035±0.006,IL-1β(ng/L):119.0±18.7比39.8±5.5,IL-18(ng/L):49.2±8.5比31.2±4.4,LDH(U/L):127.8±19.8比51.2±7.3,均P<0.01〕,说明给予外源性组蛋白处理后能明显放大LPS对PBMC的刺激作用,上调GSDMD-N蛋白表达和促进炎性因子释放,进一步诱导PBMC焦亡;而肝素能拮抗外源性组蛋白的促焦亡作用,GSDMD-N蛋白表达和炎性因子水平均较LPS+组蛋白组明显降低〔GSDMD-N/GAPDH:0.063±0.004比0.114±0.009,IL-1β(ng/L):46.8±8.6比119.0±18.7,IL-18(ng/L):33.0±5.1比49.2±8.5,LDH(U/L):65.4±11.0比127.8±19.8,均P<0.05〕。结论血浆中细胞外组蛋白通过介导PBMC焦亡能够加重ARDS炎症反应。

肺移植问题的研究进展

肺移植是治疗终末期肺疾病唯一有效的治疗手段。但近年来,肺移植术后急性排斥反应、感染、原发性移植物失功(PGD)、缺血/再灌注损伤、手术技术与麻醉管理、供体、体外循环或体外膜肺氧合(ECMO)以及受体原发病等均成为制约肺移植发展的难题,严重影响患者的预后。通过对上述有关肺移植的主要"瓶颈"及严重影响肺移植患者生存的因素和应对措施进行综述,为肺移植的临床治疗研究提供新的思路。