骨髓间充质干细胞外泌体联合茶多酚治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤

背景:研究表明,抑制内质网应激所致的细胞凋亡能够挽救神经部分功能。茶多酚能抑制内质网应激,但是存在生物利用率差不易透血脑屏障等问题,结合外泌体靶向脊髓修复及高效载药,理论上两者结合能够发挥更优的脊髓保护效能。目的:探讨茶多酚联合骨髓间充质干细胞外泌体对脊髓缺血再灌注损伤大鼠神经功能及内质网应激的影响。方法:SD雄性大鼠50只,随机分为假手术组、模型组、茶多酚组、外泌体组、联合治疗组,每组10只,除假手术组外,其余4组制作脊髓缺血再灌注损伤模型,术后2 h经尾静脉注射生理盐水、外泌体、茶多酚、茶多酚+骨髓间充质干细胞外泌体混合液;脊髓损伤后7,14,28 d进行BBB神经功能评分,脊髓损伤后14 d,取脊髓组织进行苏木精-伊红染色、尼氏染色、ATF6和GADD153内质网应激标志物免疫荧光染色。结果与结论:①神经功能评分:与假手术组比较,模型组、外泌体组、茶多酚组、联合治疗组神经功能评分均不同程度下降,术后14 d联合治疗组神经功能评分优于茶多酚组、外泌体组、模型组(P<0.05),术后28 d后联合治疗组神经功能评分优于模型组和茶多酚组(P<0.05);②苏木精-伊红染色和尼氏染色显示:模型组大鼠神经元细胞数量减少,脊髓损伤区域内大量空洞坏死及瘢痕增生,茶多酚组、外泌体组、联合治疗组神经元数量和周边空洞坏死有不同程度改善,联合治疗组改善最为明显;③内质网应激相关蛋白ATF6、GADD153表达:术后14 d联合治疗组GADD153表达低于模型组和茶多酚组(P<0.05),联合治疗组ATF6表达低于模型组、外泌体组和茶多酚组(P<0.05);④结果表明:茶多酚联合骨髓间充质干细胞外泌体能改善脊髓缺血再灌注损伤大鼠的神经功能,可能与抑制内质网应激相关蛋白ATF6、GADD153表达有关。

时效性、靶向性调控BMP-2基因表达促进骨质疏松骨折愈合的体外实验研究

构建含有骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因的重组Tet-on腺病毒,并验证其对早期成骨细胞模型MG63细胞BMP-2基因表达的调控作用。方法 构建重组BMP-2基因Tet-on腺病毒。体外培养MG63细胞,分为5组转染重组腺病毒。按不同转染滴度分为高滴度组、中滴度组、低滴度组,同时转染对照组,空白组不转染。高、中、低滴度组培养基中加入强力霉素,对照组和空白组培养液中不含强力霉素。培养24h后通过RT-PCR检测MG63细胞BMP-2mRNA的表达水平,ELISA检测BMP-2合成量。结果 重组BMP-2基因Tet-on腺病毒感染MG63细胞后,高、中、低三个滴度组 BMP-2 mRNA表达量及BMP-2合成量随着病毒滴度降低而降低,但均高于对照组及空白组,差异有统计学意义。对照组与空白组的BMP-2mRNA表达量及BMP-2合成量差异无统计学意义。结论 重组BMP-2基因Tet-on腺病毒对MG63细胞BMP-2基因表达的调控具有时效性、靶向性。

细胞焦亡相关蛋白在钽融合器松动周围组织中的表达及意义

背景:钽融合器植入椎间隙后如何影响其周围细胞最终导致骨溶解,发生无菌性松动,其机制有待阐明。目的:探索细胞焦亡在钽所致椎间骨溶解中的作用。方法:选择2015年1月至2021年12月江西省人民医院骨科收治的患者,观察组(n=19)为腰椎融合钽融合器松动并行翻修病例,对照组(n=11)为自体骨植骨腰椎融合、其他材料融合器融合后内固定取出及钽融合器植入邻近节段退变需要延长固定融合节段病例,术中收集两组患者融合器周围及融合节段周围界膜组织,进行扫描电镜、免疫荧光染色及qRT-PCR检测。结果与结论:①扫描电镜下可见,观察组钽融合器周围及融合节段界膜组织内可见大量纤维组织增生,同时可见部分钽脱落不规则颗粒物存在,对照组纤维组织增生不明显,未见有不规则颗粒物存在;②苏木精-伊红染色显示,观察组钽融合器周围及融合节段界膜组织中可见大量纤维组织增生,成骨细胞不明显;对照组界膜组织中纤维组织增生不明显,可见成骨细胞分布在骨组织周围;③免疫荧光染色显示,观察组界膜组织细胞焦亡相关蛋白GSDMD、NLRP3、Caspase1表达高于对照组(P<0.05);④qRT-PCR检测显示,观察组界膜组织GSDMD、NLRP3、Caspase1的mRNA表达高于对照组(P<0.05);⑤结果表明,细胞焦亡相关蛋白(GSDMD、NLRP3、Caspase1)在钽融合器松动病例中表达明显升高,说明细胞焦亡参与了钽所致椎间骨溶解的病理生理过程。

经皮脊柱内镜下结核病灶清除联合经皮椎弓根螺钉固定治疗腰椎结核疗效分析

目的探讨经皮脊柱内镜下结核病灶清除并置管引流,以及联合经皮椎弓根螺钉固定治疗腰椎结核的临床疗效及手术技巧。方法收集本治疗组自2016年6月-2018年7月收治的腰椎结核患者30例,其中单节段脊柱结核19例,邻近两个阶段11例,均行侧方椎间孔入路,L1-2节段3例,L2-3节段7例,L3-4节段6例,L4、5节段17例,L5 S1节段11例。平均住院时间24天,平均随访时间12个月。分别于术前及术后1个月、3个月和术后1年随访时记录视觉疼痛模拟评分(visual analogue scale,VAS)、Oswestry功能障碍指数(Oswestry Disability Index,ODI)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentafion rate,ESR)和C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP),对上述指标进行评价分析。并统计手术时间、术中出血量、术后并发症、住院时间等临床资料。结果腰痛VAS评分从术前(6.0±1.2)降至术后1年随访时的(1.8±0.8)分;ODI评分分别从术前(81.2±3.9)%降至术后1年随访时的(65.6±5.2)%;ESR从术前(80.5±14.6)mm/1h降至1年后随访时的(31.4±8.6)mm/1h,CRP从术前(58.7±9.8)mg/L降至术后1年随访时的(19.8±5.0)mg/L。结论经皮脊椎内镜技术联合经皮椎弓根螺钉固定技术以及病灶区置管冲洗引流,配合抗结核药物治疗,可有效治疗腰椎结核,可以显著提高患者治疗期间的生活质量,一定程度缩短治疗疗程。

腰椎术后骶髂关节源性下腰痛的特点及治疗效果

目的分析腰椎术后骶髂关节源性下腰痛的特点及治疗效果。方法选取我院2015年3月至2016年3月收治的260例腰椎术后骶髂关节源性下腰痛患者作为研究对象,予手法调整骶髂关节,对其体征及影像学表现等进行分析,结合改良Macnab标准进行疗效评定。结果相比于治疗前,治疗后患者的VAS评分,活动能力评分均有所改善,差异有统计学意义(P<0.01)。结论对骶髂关节源性下腰痛患者实施手法调整和关节内封闭治疗,效果显著且安全简单,建议临床推广。

Tet-on调控BMP-2基因表达的腺病毒载体构建

目的构建Tet-on调控BMP-2基因腺病毒载体,并对其相关指标进行鉴定,为骨质疏松性骨折的基因治疗提供新的方法。方法以含有目的基因的pDC315-BMP-2质粒为模板,将目的基因克隆至pAdenoX-Tet-On 3G Vector中,构建pAdenoBMP-2-Tet-On表达质粒。将构建的pAdenoBMP-2-Tet-On表达质粒转染Adeno-X 293细胞,完成腺病毒扩增,PCR鉴定扩增产物,并利用Adeno-X Rapid Titer Kit检测病毒滴度。结果酶切及PCR结果显示BMP-2被成功导入Tet-on腺病毒载体中,并成功转染Adeno-X 293细胞,包装及扩增后得到Tet-on调控BMP-2基因的腺病毒载体,滴度为1x1010ifu/ml。结论成功构建了Tet-on调控BMP-2基因的腺病毒载体。

基于网络药理学分析薏苡仁-苍术“异病同治”类风湿关节炎和痛风性关节炎作用机制

基于“异病同治”的中医理念,从网络药理学角度,分析了薏苡仁-苍术治疗类风湿关节炎(RA)、痛风性关节炎(GA)的具体机制及作用原理。方法 以中药成分数据库为检索工具,收集薏苡仁-苍术中药化学成分相关结果,并对SwissTargetPrediction数据库上完成对应靶点的预测,建立有效活性成分-靶点网络。经数据库分析掌握RA、GA疾病靶点,活性成分、疾病靶点筛选均在STRING平台完成,并构建PPI网络。GO功能、KEGG通路富集分析在Rx4.0.5软件上进行。结果 筛选最终结果显示,薏苡仁-苍术存在8种活性成分,筛选68个靶点68个;RA、GA疾病靶点分别为4685个、1550个,疾病与药物存在交集的靶点有24个。GO富集结果显示,揭示了1230条与生物过程相关的条目。120条KEGG通路中,与RA、GA相关的有AGE-RAGE、IL-17、Toll样受体信号通路。结论 薏苡仁-苍术药物活性成分参与免疫与炎症调节主要通过对AGE-RAGE、IL-17、Toll样受体等信号通路实现,进而实现对RA、GA的异病同治。

Toll样受体信号通路与骨关节炎相关性的研究进展

骨关节炎（osteoarthritis，OA）又称退行性骨关节病，是由多种因素引起关节软骨纤维化、皲裂、溃疡、脱失而导致的关节疾病，目前已越来越成为医患乃至社会关注的焦点话题。虽然年龄的增长、肥胖、炎症、创伤及遗传等危险因素被广泛接受，但OA明确的病因及发病机制仍需进一步研究探讨。