针刺对快速老化鼠脑、肝细胞核活性基因的影响

目的:探讨针刺的分子生物学作用机理。方法:采用不同月龄快速老化模型鼠(SAM)为研究对象,以“调神益智,平肝通络”为治疗原则,取人中、内关、太冲为主穴,对8月龄的SAMP8进行针刺治疗,以正常老化的SAM R1作增龄性对照,以非针刺SAM P8作对照,用DNA酶Ⅰ作活性基因探针观察脑、肝细胞核活性基因变化情况。结果:与非针刺组比较,针刺使8月龄的SAM P8脑、肝细胞核活性基因数增加,基因转录水平提高。结论:证实针刺能在细胞核活性基因转录水平上起作用。

载脂蛋白E等位基因频率与脑卒中相关性研究

目的 探讨脑卒中与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性的相关性。方法 用聚合酶链反应 限制片段长度多态性 (PCR RFLP)方法测定 6 73例脑卒中患者及 88例正常人的ApoE基因型。 结果 男性脑卒中组及男性对照组ApoE等位基因ε4 ,ε3,ε2分别为 0 .2 94 6 ,0 .5 935 ,0 .1381和 0 .180 9,0 .72 34,0 .0 95 7。两者比较ε4和ε3差异有极显著性 (P <0 .0 1)。女性脑卒中组之间及女性对照组之间ApoE等位基因ε4 ,ε3,ε2分别为 0 .2 981,0 .5 6 4 9,0 .1370和 0 .170 7,0 .7195 ,0 .10 98。两者比较ε4和ε3差异有显著性 (P <0 .0 5 )。男女脑卒中及男女对照组相比 ,差异无显著性。结论 在男性和女性脑卒中组ApoEε4等位基因频率明显高于其对照组 。

快速老化鼠脑MT1和MT3 cDNA克隆及mRNA定量条件的建立

金属硫蛋白 (Metallothionein ,MT)基因家族的三种亚型MT1、MT2和MT3在脑组织中均有表达 ,它们在脑组织中具有重要的神经生理和神经调节功能 ,其中MT3可能是老年性痴呆 (Alzheimer′sdisease ,AD)潜在的病因学因子。本研究以快速老化鼠SAMP10脑组织总RNA为模板 ,通过RT PCR扩增出MT1的编码区序列和MT33′非翻译区序列的cDNA片段。将两个片段克隆到pGEM○R TEasy载体上 ,经测序分析确定两个cDNA片段分别为MT1编码区序列和MT33′非翻译区序列。Northern杂交结果表明 ,MT1和MT3mRNA在 2、4、6、8四个月龄的SAMP10和SAMR1脑组织中均有表达。同时建立了MTmRNA的定量条件 。

乙型肝炎病毒血清标志物EIA测定与定量定性PCR测定结果的比较

目的:探讨乙肝病毒血清标志物EIA测定法与定量定性PCR测定结果的关系。方法:从临床标本筛选300例HBsAg阳性血清,100例HBsAg阴性血清,50例抗HBs阳性血清,并采用定量定性PCR方法对其分别进行检测。结果:HBsAg阳性血清定性PCR阳性率为29.3％,定量PCR阳性率为56.0％,HBsAg阴性血清定性PCR阳性率为2.0％,定量PCR阳性率为8.0％,抗HBs阳性血清定性PCR阳性率为2.0％,定量PCR阳性率为12.0％。结论:PCR检测乙肝病毒的方法比血清标志物EIA法有更高的临床检出率,定量PCR比定性PCR有更高的临床检出率。

假单胞菌质粒ND1.866性质的初步研究

通过对假单胞菌质粒ＮＤ１．８６６进行限制性内切酶分析，确定了质粒的分子量为３８．１０Ｋｂ。经ＥｃｏＲⅠ消化ＮＤ１．８６６产生４个酶切片段，经ＨｉｎｄⅢ消化产生６个酶切片段，经ＳａｌⅠ消化产生６个酶切片段，经ＰｓｔⅠ消化产生１１个酶切片段。

人工神经网络技术用于酵母同化无机硒作用的研究

本文研究了啤酒酵母和假丝酵母对无机硒的同化能力，结果表明假丝酵母对无机硒的耐受力较强；并且假丝酵母对无机硒的同化能力和菌体产率均高于啤酒酵母．另外还研究了金属元素对假丝酵母同化无机硒及生长的影响，运用神经网络技术，以正交试验法构造训练样本，通过预测与优化，得出培养基中的无机金属元素的最佳含量．

针刺对快速老化模型鼠脑中衰老相关基因表达的调整作用

目的:探讨针刺调整作用在分子水平的反映。方法:以快速老化模型鼠(SAM)脑中衰老相关基因的表达为研究对象,应用由磁珠分离法纯化mRNA,SMA RT-PCR cDNA合成和AFLP-银染法结合形成的mRNA—AFLP分析技术,进行mRNA指纹检测,寻找衰老相关性差异表达的基因片段,并观察针刺对其表达水平的影响。结果:随机应用20对引物作选择性AFLP扩增,共发现42条带型较为清晰的SAMP、R两系组间差异表达带,其中,33条(约占78.6％)在P系相对于R系低表达,9条(约占21.4％)在P系相对于R系高表达。针刺SAMP10的不同腧穴,可使异常低表达的基因表达水平不同程度地上调,使异常高表达的基因表达水平不同程度地下调,其变化均趋同于正常老化的SAMR1。结论:针刺对衰老机体紊乱的分子网络能发挥整体调节作用,促使其恢复协调平衡,从而延缓衰老进程。

载银活性碳纤维对大肠杆菌吸附作用的研究

以大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）为对象，通过细菌吸附实验研究了载银活性碳纤维（ＡＣＦ（Ａｇ））对大肠杆菌的吸附特性．借助扫描电子显微镜（ＳＥＭ）进行细菌分布形态的观察和细菌数量的计算．结果表明，大肠杆菌易分布于ＡＣＦ（Ａｇ）表面的沟槽处；ＡＣＦ（Ａｇ）吸附的细菌数量随银含量、比表面积的增加而增大．此外，细菌吸附量还与ＡＣＦ（Ａｇ）表面银颗粒的大小有关．对吸附细菌的动力学亦进行了研究．

醒脑开窍针法对脑梗死模型大鼠脑组织c-fos基因表达的影响

[目的]揭示醒脑开窍针法治疗脑梗死的分子调控机制。[方法]采用Northern杂交技术 ,观察局灶性脑缺血模型大鼠脑组织c-fosmRNA的转录水平及醒脑开窍针法的干预作用。[结果]局灶性脑缺血模型大鼠脑组织c-fos基因的表达因部位和时间的不同而异 ,在皮层不同时程段 ,c-fosmRNA的表达呈上升趋势 ,海马区c-fosmRNA的表达呈下降趋势 ,纹体区在1、3、6h下降 ,24、48h略有上升趋势。醒脑开窍针法能使皮层和纹体c-fosmRNA的表达峰值在各个时段均较模型组增高 ,使海马区1、3hc-fos基因表达峰值降低 ,6、24、48h基因表达上调。[结论]醒脑开窍针法可促使神经细胞对缺血损伤产生不同的适应性变化 ,从而增强脑组织的修复能力 ,加速神经元网络的重建 。

载银活性碳纤维对大肠杆菌的灭菌作用

采用真空浸清加热分解的方法制备了载很活性碳纤维（ACF（Ag））.以大肠杆菌为研究对象，用抑菌坏试验研究了ACF（Ag）的灭菌性能以及粮食量、银颗粒大小及原始活性碳纤维（ACF）的比表面积等因素对其灭菌性能的影响规律.结果表明，ACF（Ag）的灭菌性能随银含量和比表面积的增加而加强，在银含量相同时，其灭菌性能随银颗粒的减小而增强.

氮源对L-苏氨酸发酵的影响

以L-苏氨酸生产菌TRFC为供试菌株,研究了氮源对L-苏氨酸发酵的产量和糖酸转化率的影响。首先通过摇瓶实验确定发酵的最佳无机氮源和有机氮源分别为硫酸铵和酵母粉,进一步利用10L罐补料分批发酵确定硫酸铵和酵母粉的最佳用量,继续优化培养条件,采用发酵中后期流加硫酸铵和糖氨混合补料等措施,L-苏氨酸产量得到进一步的提高。在最优发酵条件下,通过10L罐补料分批发酵36h,产酸可达118.9g/L,糖酸转化率为47.6%。

补肾复脉液对缺氧内皮细胞eNOSmRNA和ET-1mRNA影响的研究

目的 :探讨中药补肾复脉液对缺氧内皮细胞内皮型一氧化氮合成酶 (eNOS)和内皮素 (ET 1)mRNA转录水平的影响及其对缺氧内皮细胞的保护作用。方法 :取培养的胎儿脐静脉内皮细胞 ,随机分为空白组、缺氧组、西药组及中药组 ,分别给予 10 %的空白兔血清 ,10 %的空白兔血清 ,10 %的含维生素C兔血清 ,10 %的含补肾复脉液兔血清 ,除空白组外 ,同时通入 95 %N2 加 5 %CO2 混合气孵育 (缺氧 ) 4h ,采用异硫氰酸胍 -酚 -氯仿法提取各组细胞总RNA ,以GAPDH为内对照 ,将RT PCR扩增产物用 1%的琼脂糖凝胶电泳分离 ,紫外灯下观察各组细胞eNOSmRNA和ET 1mRNA表达情况 ,对照凝胶拍照 ,并对底片条带光密度扫描定量分析。结果 :缺氧组ET 1/GAPDHmRNA水平最高而eNOS/GAPDHmRNA水平最低 (P <0 0 1) ,中药组和西药组均能阻抑其异常表达 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,中药组明显优于西药组 (P <0 0 5 )。结论 :中药补肾复脉液能抑制缺氧内皮细胞ET 1mRNA转录 ,促进eNOSmRNA转录 ,维持ET 1mRNA/eNOSmRNA之间的平衡 ,从而对缺氧内皮细胞有一定的保护作用。

紫杉醇合成代谢途径中紫杉烯合成酶cDNA的克隆

紫杉烯合成酶(Taxadienesynthase)被认为在紫杉醇合成代谢途径中起着限速酶的作用。为进一步研究紫杉烯合成酶的作用机理和紫杉醇生物合成代谢调控机制,采用RTPCR技术从东北红豆杉(Taxuscuspidata)愈伤组织中获得了紫杉烯合成酶基因片段,将该片段克隆在载体pGEMTEasyVector上,并转化到大肠杆菌JM109中,经EcoRI酶切检测,Southernblotting及部分cDNA序列分析证实该片段确为紫杉烯合成酶基因,与国外报道的从太平洋红豆杉(Taxus.brevifolia)幼茎中得到的紫杉烯合成酶基因序列具有很高的同源性。

不同溶氧条件下L-苏氨酸生物合成菌株的代谢流量分析

【目的】探索L-苏氨酸生物合成机理及影响因素。【方法】建立了大肠杆菌L-苏氨酸的代谢流平衡模型,应用MATLAB软件计算出不同溶氧条件下发酵中后期代谢网络的代谢流分布及理想代谢流分布。【结果】5%溶氧条件下,25.5%碳架进入HMP途径,74.5%碳架进入糖酵解途径,获得33.9%质量转化率;20%溶氧条件下,58.08%碳架进入HMP途径,41.92%碳架进入糖酵解途径,获得46.5%质量转化率;【结论】与理想代谢流(88.23%质量转化率)相比,应从菌种改造和发酵控制方面通过改变6-磷酸葡萄糖异构酶借以增加HMP途径代谢流量,通过增加磷酸烯醇式丙酮酸羧化反应代谢流提高天冬氨酸族合成代谢流,减少TCA循环代谢流量,从而达到减少副产物生成,增加L-苏氨酸生物合成的目的。

AC及AC(Ag)对细菌的吸附及灭菌功能的对比研究

测定了活性碳 (AC)及载银活性碳 (AC(Ag) )的比表面积和孔径分布曲线 ,对比研究了AC及AC(Ag) )对大肠杆菌的吸附能力和灭菌性能。结果表明 ,载银后 ,虽然AC(Ag)的比表面积下降 ,但由于银的存在 ,使其吸附的大肠杆菌数量高于AC ,而吸附速率低于AC。灭菌试验表明 ,AC对大肠杆菌没有杀灭能力 ,而AC(Ag)对大肠杆菌有较好的灭菌功能。

针刺组方影响SAMP10脑CaN mRNA特异性表达的实验研究

[目的]了解不同的针刺配穴组方对快速老化小白鼠(SAMP10)脑钙调神经磷酸酶(CaN)mRNA表达的影响。[方法]用α-32P-dCTP标记探针,Northern杂交法进行mRNA表达水平的半定量分析,分别以取穴水沟、内关的醒脑开窍法(针刺泻实组)和取穴肝俞、肾俞的滋补肝肾法(针刺补虚组)干预8月龄SAMP10(模型组)。[结果]与正常组比较,模型组CaN mRNA表达水平下降。醒脑开窍法可提高CaN mRNA表达至接近正常水平(P<0.05),滋补肝肾法有升高其表达的趋势(P>0.05),提示醒脑开窍法优于滋补肝肾法。[结论]CaN mRNA表达水平低下可能是脑老化的机制之一,针刺能提高CaN mRNA表达水平,并具有组方配穴的特异性,提示醒脑开窍法可能是干预脑老化的潜在策略。

L-苏氨酸发酵液有机膜过滤工艺研究

采用有机微滤-超滤膜分离系统,两阶段截留发酵液中残留的菌体、蛋白质和悬浮固体颗粒,建立了微滤-超滤有机膜两步法过滤工艺,解决了一步法超滤过程中的膜通量低的难题。膜通量由8.25 L/(m2.h)提高至32 L/(m2.h),色素去除率、蛋白去除率及产品回收率可分别达到58.5%、97.6%和87.0%。另外,采用0.01 mol/L NaOH、自来水和0.1 mol/L HCl间歇替换清洗可有效恢复膜通量。

溶氧强制振荡对L-苏氨酸发酵产率及其代谢流迁移的影响

为有效降低L-苏氨酸发酵过程中副产物的积累,考察了发酵过程中的溶氧强制振荡对L-苏氨酸发酵产率及其多种副产物积累的影响,并深入探讨了振荡行为对L-苏氨酸生物合成代谢网络的代谢流分布的影响。结果表明:采用溶氧强制振荡工艺能够明显提高L-苏氨酸的发酵产率和降低多种抑制性产物的合成。与非振荡工艺相比,经过36h培养,细胞生物量达到29.5g·L-1,苏氨酸的质量浓度达到118.9g·L-1,而乙酸质量浓度下降到0.8g·L-1,副产的其他氨基酸也大大降低。通过代谢流分析表明,在发酵后期的一个振荡周期(30h至31h)内,与非振荡组相比,HMP途径的代谢流量由6.5提高至95.88,CO2固定反应代谢流量由45.1提高至86.1,TCA循环相对代谢流量从1.86提高至17.78,从而导致苏氨酸对葡萄糖的质量转化率从30.0%增加至57.0%。溶氧强制振荡条件下的苏氨酸发酵液中各种副产物更少,更适合今后的大规模工业化生产。

加味温胆汤对日本快速老化模型鼠肝细胞核活性基因的影响

探讨加味温胆汤对日本快速老化模型鼠(SAM-P/10)肝细胞核活性基因的影响。方法:采用DNA酶Ⅰ为活性基因探针,酶解DNA。结果:经治疗后各组肝细胞核基因组经DNA酶消化的肝细胞核酶解片段缩小,接近R/1系水平。结论:加味温胆汤具有提高SAM-P/10鼠肝细胞核活性基因水平,并增加转录活性的作用。推测其机制与其改善了SAM-P/10鼠肝细胞染色质构象,从而有利于DNA酶的消化作用有关。

用基因表达谱芯片筛选老年性痴呆基因表达谱

[目的 ]筛选老年性痴呆 (AD)异常表达基因 ,探讨其在AD病生理机制中的作用。 [方法 ]利用小鼠 15 4 0 0点基因表达谱芯片 ,应用AD替代研究模型SAMP8,通过 10月龄SAMP8与同月龄的正常对照SAMR1比较和与同品系正常年轻 2月龄时的SAMP8比较 ,筛选出AD基因表达谱。 [结果 ]筛选到痴呆相关的差异表达基因 2 4 2个 ,衰老相关的差异表达基因 2 34个。在两组中同时出现的基因 ,即为筛选到既与痴呆又与衰老相关的差异表达基因 ,共110个。以上筛选到的差异表达基因均以下调表达为主 ,下调表达基因的数目几乎为上调的 2倍。 110中的 2 2个基因功能已知 :下调涉及突触囊泡释放 ,信号传导 ,细胞骨架 ,能量代谢 ;上调涉及细胞周期 ,离子通道 ,蛋白质合成 ,炎症反应等病生理功能。 [结论 ]本研究所得到的“老年性痴呆表达基因谱”能从众多研究线索中发现一些规律 ,为今后减少研究的盲目性提供依据。