李晓霞

目的：研究雌激素对人涎腺黏液表皮样癌血管生成的影响．方法：应用免疫组化、裸鼠肺移植瘤试验的方法探讨17β-雌二醇对人涎腺黏液表皮样癌高转移细胞系Mc3细胞的血管内皮生长因子的表达和肺移植成瘤能力影响；并应用免疫组化的方法对Mc3细胞的雌激素受体进行检测．结果：在体外，0、1μmol／L17β-雌二醇可促进Mc3细胞血管内皮生长因子的表达、在裸鼠体内实验中给药组(5．2μg／d)及对照组肺表面的转移结节数分别为(119±70)个和(14±12)个；对肺转移瘤组织切片免疫组化结果表明给药组转移瘤组织中血管内皮生长因子的表达明显高于对照组、同时，在Mc3细胞和瘤体组织中均发现有雌激素受体的表达、结论：生理浓度的雌激素可促进人涎腺黏液表皮样癌血管内皮生长因子的表达、

趋化因子受体CXCR4 shRNA真核表达载体的构建

目的:构建趋化因子受体(CXCR4)特异的RNA干扰质粒载体。方法:根据GenBank数据库提供的CXCR4基因核苷酸序列,选择设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pWH1质粒载体连接,用酶切的方法进行鉴定;将构建成功的特异性表达载体(pWH1-CXCR4)稳定转染至人涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞系,并应用RT-PCR和流式细胞术对细胞CXCR4的表达进行检测。结果:与Mc3细胞和转染空白质粒pWH1 Mc3细胞相比,转染pWH1-CXCR4表达载体的Mc3细胞CXCR4 mRNA和蛋白的表达明显降低。结论:构建的CXCR4特异性shRNA表达载体可有效的沉默CXCR4基因,为进一步研究CX-CR4表达对涎腺黏液表皮样癌增殖和转移的意义及治疗涎腺黏液表皮样癌奠定了基础。

石辛牙痛口含片治疗胃火牙痛智齿冠周炎Ⅲ期临床试验

目的:研究石辛牙痛口含片治疗胃火牙痛智齿冠周炎的疗效及安全性。方法:随机双盲双模拟平行对照多中心临床试验。纳入符合胃火牙痛智齿冠周炎患者432例。就诊当天行常规冠周袋冲洗。石辛组患者含化石辛牙痛口含片,口服牛黄解毒片赋形剂;牛黄组患者口服牛黄解毒片,含化石辛牙痛口含片赋形剂,疗程5 d。主症中疼痛按VAS法记分,其余主症、次症及舌象、舌苔、脉象均按等级计分。症状体征总积分减轻率≥90%判断为痊愈,70%～89%显效,30%～69%有效,≤29%无效。用药前后进行血、尿、粪常规及肝功、肾功、心电图检查,记录不良事件。用SAS 6.12软件统计分析。结果:符合方案数据集(PPS)石辛组309例、牛黄组101例。人口学特征、病情基线组间差别均无统计学意义(P>0.05)。治疗3 d和5d时2组症状体征总积分、主症积分、次症积分均下降(P=0.000),石辛组积分的下降值高于牛黄组(P<0.000 1)。第5天治愈率和显效率石辛组为45.6%和42.4%;牛黄组为8.9%和33.7%(P<0.000 1)。实验室检查未发现具有临床意义的异常结果。与研究药物有关的不良事件石辛组9例15次,牛黄组7例7次(P=0.084 8);各组均未发生导致病例脱落的不良事件和严重不良事件。结论:石辛牙痛口含片治疗胃火牙痛智齿冠周炎是安全、有效的。

石辛牙痛口含片治疗胃火牙痛(智齿冠周炎)Ⅱ期临床试验

目的:研究石辛牙痛口含片治疗胃火牙痛(智齿冠周炎)的疗效及安全性。方法:随机双盲双模拟平行对照多中心法。纳入符合胃火牙痛(智齿冠周炎)试验组(石辛)、对照组(牛黄)各120例。就诊当天行常规冠周袋冲洗。石辛组患者含化石辛牙痛口含片0.6 g×2,4/d,口服牛黄解毒片的赋形剂0.3 g×3,3/d;牛黄组患者口服牛黄解毒片0.3 g×3,3/d,含化石辛牙痛口含片的赋形剂,0.6 g×2,4/d。主症按0、2、4、6分级计分;次症按0、1、2、3分级计分。疗程5 d,用SAS 6.12软件统计分析。用药前后进行血、尿、粪常规及肝功、肾功、心电图检查,记录不良事件。结果:石辛组脱落(失访)3例,牛黄组脱落2例。受试者脱落率、人口学特征、病情基线组间差别均无统计学意义(P>0.05)。第3天和第5天时主症、次症积分以及病情总积分均明显下降(P=0.000),其减少值石辛组大于牛黄组(P<0.001);石辛组显效率大于牛黄组(P=0.000)。第5天时主症各项指标石辛组积分下降值大于牛黄组(P<0.05)。生命体征治疗前后均在正常范围,组间差异无统计学意义(P>0.05),实验室检查全部患者治疗前未出现明显异常变化。3例发生与研究药物有关不良事件,石辛组1例,为"中度",停药后好转,退出试验。牛黄组2例,为轻度,未影响试验。结论:石辛牙痛口含片治疗胃火牙痛(智齿冠周炎)疗效优于牛黄解毒片,安全性与牛黄解毒片相似。

多聚胺阳离子脂质体转染效率及细胞毒性的评价

目的评估四种多聚胺阳离子脂质体的转染效率及细胞毒性，筛选高效低毒的阳离子脂质体。方法多聚胺阳离子脂质TC-Chol、DC-Chol与中性磷脂DOPE分别以1：1、3：1摩尔比制备多聚胺阳离子脂质体，转染以增强型绿色荧光蛋白为报告基因的质粒PIRES2-EGFP入Hela细胞、Hep2细胞，倒置荧光显微镜下检测转染细胞的报告基因表达，筛选出高效的阳离子脂质体，通过MTT法检测转染细胞毒性，从而筛选相对高效低毒的阳离子脂质体。结果所制备的多聚胺阳离子脂质体在透射电镜下呈圆形、椭圆形囊泡样结构，少数呈管状、不规则状，粒径50-200nm，可将质粒PIRES2-EGFP有效转染入Hela细胞、Hep2细胞，其中多聚胺阳离子脂质TC-Chol与DOPE以3：1摩尔比制备的多聚胺阳离子脂质体是一种相对高效低毒的阳离子脂质体，转染效率39．5％～42．1％。结论多聚胺阳离子脂质TC-Chol、DC-Chol与中性磷脂DOPE以一定的摩尔比可制备高效低毒的多聚胺阳离子脂质体，其转染效率和细胞毒性与阳离子脂质的结构和中性磷脂DOPE的比例有关，在基因转染和基因治疗方面具有较广阔的应用前景。

基因表达谱芯片技术筛选涎腺腺样囊性癌转移相关基因

目的:应用基因芯片技术对口腔涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-2及其肺高转移细胞株ACC-M的基因表达谱进行对比分析。筛选差异表达基因,以期从基因水平上探讨肿瘤转移机制。方法:以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-2及其肺高转移细胞株ACC-M作为研究肿瘤转移分子机制的模型。提取mRNA,逆转录为cDNA,用Cy3和Cy5荧光染料标记,制备成cDNA探针,与表达谱芯片进行杂交扫描和分析;并应用RT-PCR技术对其中7个基因进行验证。结果:在1152个基因表达谱的筛选中,26个基因表达差异(2倍以上),其中19个基因表达水平上调,7个基因表达水平下调。RT-PCR技术对其中7个基因表达差异的验证结果与基因芯片结果一致。结论:基因芯片筛选发现其中2.3%的基因可能与涎腺腺样囊性癌细胞转移侵袭相关。

转化生长因子-β1 shRNA真核表达载体的构建

目的构建转化生长因子β1(TGF-β1)的短发夹状RNA(shRNA)表达系统,为人涎腺粘液表皮样癌的治疗提供新的方法。方法根据Genebank提供的TGF-β1 mRNA序列,设计短链寡核苷酸,化学合成后经退火形成双链 DNA片段,克隆到pWH1载体中,用酶切方法对重组体进行鉴定:最后将构建的TGF-β1特异性shRNA表达载体转染涎腺粘液表皮样癌细胞,通过RT-PCR、免疫组化观察其对细胞TGF-β1 mRNA和蛋白水平表达的影响。结果经酶切、连接后构建的质粒称之为pWH1-TGF-β1。酶切证实成功构建了TGF-β1 shRNA表达载体,RT-PCR和免疫组化结果显示其能够在mRNA和蛋白水平抑制细胞内TGF-β1的表达。结论成功构建的TGF-β1特异性shRNA表达载体具有阻断TGF-β1表达的功能,可能为涎腺粘液表皮样癌治疗提供有效的方法和手段。

TGF-β1 shRNA对人涎腺粘液表皮样癌Ms细胞增殖的影响

目的:用TGF-β1shRNA稳定转染涎腺粘液表皮样癌Ms细胞,观察shRNA的基因沉默效应及其对细胞增殖的影响。方法:用Liperfetamine2000将TGF-β1shRNA转染Ms细胞,以G418(600mg/L)筛选21d,挑出单克隆获得稳定转染细胞系。RT-PCR法和免疫组化方法检测细胞中TGF-β1mRNA和蛋白的表达。利用MTT、软琼脂克隆形成实验、流式细胞仪、透射电镜等检测转染前后Ms细胞的增殖和形态特点,以空载体转染和未转染细胞为对照。结果:获得稳定转染TGF-β1shRNA的细胞系。TGF-β1shRNA阻断了Ms细胞中TGF-β1mRNA和蛋白的表达。未转染组,转染空载体组和转染shRNA组,细胞倍增时间分别为39.3h,40.1h和45.3h,Gl期细胞所占比例分别为54.2%,56.8%和61.7%,增殖指数PI分别为0.46,0.43和0.38;软琼脂克隆形成率分别为34.7%,33.3%和15.8%;超微结构观察见转染细胞细胞器扩张和肿胀,核浆比例变小,核仁减小,数目减少,核分裂像减少。结论:应用shRNA沉默TGF-β1基因可抑制Ms细胞的增殖。

人胚颌下腺细胞原代及传代培养

目的 :研究人胚颌下腺细胞原代及传代培养的方法 ,为进一步研究颌下腺细胞的功能、起源、发生及发展奠定基础。方法 :在DMEM培养基中加入FBS、表皮生长因子 (EGF)及氢化可地松 (HC) ,观察细胞的生长特点。结果 :在含有 φ =2 %FBS、10ng/mlEGF、5 μg/ml胰岛素 (INS)及 5 μg/mlHC的DMEM培养基中上皮细胞生长最好 ,其它组上皮样细胞生长状态不佳。培养的细胞为圆形、三角形、多边形 ,细胞伸展良好。细胞传代后生长良好 ,形态并未发生改变。HE染色可见细胞为圆形 ,三角形 ,多边形 ,核蓝染 ,胞浆粉染。大多数细胞cytokeratin染色阳性 ,说明为上皮细胞 ,少数细胞CK18染色阳性 ,说明培养的细胞中含有一部分导管上皮细胞。结论 :含有 φ =2 %FBS、10ng/mlEGF、5 μg/mlINS及 5

基质金属蛋白酶-1在人涎腺腺样囊性癌细胞中的表达

目的:测定基质金属蛋白酶-1(MMP-1)在人涎腺腺样囊性癌不同转移力细胞系中的表达。方法:以人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞系及其高转移株ACC-M作为研究肿瘤转移分子机制的模型,采用免疫组化法和蛋白印迹(Western blot)法检测MMP-1的蛋白表达水平。结果:MMP-1在ACC-M细胞中的表达水平高于ACC-2细胞。结论:MMP-1在人涎腺腺样囊性癌的侵袭转移过程中可能发挥作用。

基因表达谱芯片技术筛选舌癌转移相关基因

目的应用基因表达谱芯片技术对口腔舌癌细胞系Tca8113及其脑转移细胞株Tb的基因表达谱进行对比分析并筛选差异表达基因,以期从基因水平上探讨舌癌转移机制。方法以舌癌细胞系Tca8113及其脑转移细胞株Tb作为研究肿瘤转移分子机制的模型,提取mRNA,逆转录为cDNA,用Cy3和Cy5荧光染料标记,制备成cDNA 探针,与基因表达谱芯片进行杂交扫描和分析;并应用RT-PCR技术对其中6个基因进行验证。结果在1152个基因表达谱的筛选中,37个基因表达有差异(2倍以上),其中15个基因表达水平上调,22个基因表达水平下调。 RT-PCR技术对其中6个基因表达差异的验证结果与基因芯片结果一致。结论舌癌细胞转移侵袭可能与多个基因相关。

雌激素受体在人舌癌细胞系中的表达

目的:测定雌激素受体(ER)在人舌癌细胞系Tca8113以及高转移株Tb上的表达。方法:用免疫细胞化学方法和RT-PCR方法检测雌激素受体在人舌癌细胞上的表达,并对其表达量进行相对定量分析。结果:经免疫细胞化学和RT-PCR方法可检测到ER在人舌癌细胞上有表达。ERα在Tb细胞系的表达强于Tca8113;而ERβ的表达在Tca8113和Tb中相同,并且ERα/ERβ比值在脑转移株Tb中升高。结论:雌激素有可能通过它的受体对人舌鳞癌细胞产生一定的影响。ERα/ERβ比值的改变在舌癌发生和转移过程中可能起一定作用。

17β-雌二醇对人涎腺黏液表皮样癌Mc3增殖周期的影响

目的 探讨 17β 雌二醇 (E2 )对体外培养的人涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞系增殖周期的影响。方法 以不同浓度、时间的E2 处理Mc3细胞 ,采用MTT法、流式细胞术、免疫组织化学染色法 ,检测E2 对人涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞系细胞群体倍增时间、细胞周期分布以及对CyclinD1、P2 7Kip1阳性表达的影响。结果 浓度分别为 10 -9、10 -8、10 -7mol/L的E2 作用于细胞第 5天时 ,MTT法测得E2 处理组细胞增殖促进率分别为 2 9%、5 4 %、5 9% ,CyclinD1的阳性表达率分别增加了 16 %、9%、2 4 % ,P2 7Kip1的阳性表达率分别减少了33%、30 %、5 5 %。流式细胞术检查结果显示 ,10 -7mol/L的E2 处理 12、18、2 4h后 ,细胞周期中S期细胞比相应对照组分别增加了 11 3%、6 6 %、4 6 7% ,细胞增殖指数分别增加了 6 0 %、3 6 %、2 0 5 5 %。结论 生理浓度的E2 可以促进CyclinD1的表达、降低P2 7Kip1的阳性表达 ,从而促进细胞周期G1/S期转换 ,增加S期细胞数量 ,加速DNA合成 ,刺激肿瘤发生。

窖蛋白1 mRNA在人舌癌细胞系中的表达

目的:检测窖蛋白1基因m RNA在舌癌不同转移力细胞系中的表达,初步探讨窖蛋白1在肿瘤发生发展中的作用。方法:以舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系及其脑转移株Tb作为研究肿瘤转移分子机制的模型,应用RT-PCR技术检测窖蛋白1m RNA的表达。结果:窖蛋白1m RNA在两种细胞中均有表达,其在Tb细胞中的表达水平高于Tca8113细胞。结论:窖蛋白1可能在舌癌转移过程中发挥作用。

体外观察反义脱氧寡核苷酸对变形链球菌蔗糖依赖性粘附的影响

目的：评估gtfB特异反义脱氧寡核苷酸对变形链球菌蔗糖依赖性粘附能力的影响。方法：合成针对gtfB709—726bp及3479—3497bp的反义脱氧寡核苷酸并进行硫化。将其分别自然转入变形链球菌细胞内，观察各组变形链球菌对唾液包被羟磷灰石的蔗糖依赖性粘附，结晶紫染色，无水乙醇脱色，酶标仪于620nm处读取吸光度值。结果：培养基中加入反义脱氧寡核苷酸的变形链球菌蔗糖依赖性粘附明显低于对照组（P〈0．01），PS-ODN1和PS-ODN2分别可减少31．4％和41．8％细菌粘附。结论：反义脱氧寡核苷酸可以抑制变形链球菌蔗糖依赖性粘附，有可能将其开发成龋病预防及病因研究中的新型试剂。

树脂加强型玻璃离子水门汀在托槽粘结中的应用

目的探讨两种树脂加强型玻璃离子水门汀对托槽粘结强度的影响。方法收集离体人前磨牙60个,随机分成6组。第1组和第2组(对照组):35%磷酸酸蚀30 s,冲洗、吹干,涂粘结剂,采用光固化复合树脂粘结托槽。第3、4、5、6组:10%聚丙烯酸酸蚀30 s,冲洗,保持潮湿,第3组和第4组采用化学固化型的Fuji Ortho树脂加强型玻璃离子水门汀粘结托槽,第5组和第6组采用光固化型的Fuji Ortho LC树脂加强型玻璃离子水门汀粘结托槽。第1、3、5组进行抗剪强度测定,第24、、6组进行抗张强度测定,测试后观察断面形态。结果光固化复合树脂的抗剪强度高于其他2组,抗张强度各组间差异无显著性。各种材料的抗剪强度均高于抗张强度。在断面形态观察中,第1组与第3组、第5组差异有显著性,其余差异无显著性。结论两种树脂加强型玻璃离子水门汀的抗剪强度低于复合树脂,但能满足临床的需要。

拨出下颌第二磨牙矫治11例医源性后牙反颌的疗效观察

目的通过拔除下颌第二前磨牙矫治11例因矫治不当导致后牙反袷的患者，观察该方法的临床效果及不足。方法选择因矫治而导致后牙反袷的患者11例（男4例，女7例）。所有患者均拔除下颌2颗第二前磨牙，采用全程式化直丝弓矫治器进行重新矫治。借助34-44的整体支抗及上颌支抗先后近移第一、第二磨牙，并适当缩小弓丝后段的牙弓宽度。测量治疗前、后下颌的牙弓宽度和第一磨牙近移量。结果11例患者的后牙反袷均得到矫正。尖牙宽度变化不明显，第一前磨牙和第一磨牙的宽度发生了显著减少（2．61mm、5．33mm；P〈0．05）。第一磨牙平均近移3．43mm，近移量与宽度变化具有明显的相关性。结论拔除第二前磨牙可显著减小磨牙宽度，能够矫治医源性的后牙反袷，但其适用范围应需进一步探讨。

自制多聚胺阳离子脂质体转染效率及细胞毒性的评价

目的评估制备的多聚胺阳离子脂质体转染哺乳动物细胞的转染效率及细胞毒性.方法多聚胺阳离子脂质TC-Chol与中性磷脂DOPE以3∶1摩尔比,制备多聚胺阳离子脂质体,通过转染以增强型绿色荧光蛋白为报告基因的质粒PIRES2-EGFP入HeLa细胞,Hep2细胞,倒置荧光显微镜下检测转染细胞的报告基因表达,通过MTT法,检测细胞存活分数,并以Lipofectamine2000为对照,评价制备阳离子脂质体转染效率及细胞毒性.结果多聚胺阳离子脂质体转染效率略低于Lipofectamine2000,但细胞毒性较低,为一种相对高效低毒的阳离子脂质体.结论多聚胺阳离子脂质体为一种相对高效低毒的阳离子脂质体,在基因转染和基因治疗方面具有较广阔的前景.

PBL在口腔正畸进修生临床教学中的初步应用

在2004—2005年度口腔正畸进修生教学中，尝试PBL教学模式，通过摸底考试、尽早进入临床实践、根据临床病例设计问题、定期小组讨论等形式引导进修生学习理论知识，将枯燥的理论学习与临床实践有机地结合起来，培养了进修生良好的学习方法和独立解决临床问题的能力，提高了正畸进修教学的质量。

基质金属蛋白酶-1 shRNA真核表达载体的构建

目的构建基质金属蛋白酶-1(MMP-1)特异的RNA干扰质粒载体。方法根据GenBank数据库提供的MMP-1基因核苷酸序列,选择设计能转录短发夹状RNA(Short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pWH1质粒载体连接,用酶切的方法进行鉴定;将构建成功的特异性表达载体(pWH1-MMP1)稳定转染至人腺样囊性癌ACC-M细胞系后,应用RT-PCR、免疫组织化学及Western Blot对细胞MMP1的表达进行检测。结果在成功转染pWH1-ACC-M表达载体的ACC-M细胞中,MMP1 mRNA和蛋白的表达明显降低。结论成功构建了MMP1特异性shRNA表达载体,可有效地沉默MMP1基因,为进一步研究MMP1表达与腺样囊性癌增殖和转移的相关性奠定了一定的实验基础。