表达增强绿色荧光蛋白重组水疱性口炎病毒印第安纳株的构建

通过负链RNA病毒反向遗传操作技术,成功救获了表达增强绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组印地安纳株水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus Indiana serotype)、救获的重组病毒保持了野生型VSV高滴度生长特性,细胞连续传代10次仍保持GFP的稳定表达及生物学特性不变。本研究为VSV作为新型重组活病毒载体疫苗和肿瘤治疗载体研制及基础病毒学相关研究提供了理想的技术平台。

水泡性口炎病毒印第安纳株反基因操作系统的建立

负链RNA病毒作为活病毒载体具有巨大的优势。本研究构建了水泡性口炎病毒印第安纳株(VSV-Ind)基因组全长cDNA克隆,建立了反向遗传操作系统并成功救获病毒。通过免疫荧光、电镜观察、RT-PCR及生长动力学研究,证实救获病毒保持典型的VSV印第安纳株特点,救获VSV的基因组内G蛋白前、后非编码区分别引入两个用于进一步构建重组病毒时外源基因插入的两个限制酶位点。本研究为新型重组活病毒疫苗载体和肿瘤治疗载体的研制及基础病毒学相关研究提供了重要的技术平台。

脉冲冲洗联合负压封闭引流术在开放性骨折中的应用研究

目的探讨脉冲冲洗联合负压封闭引流技术(vacuum sealing drainage,VSD)在四肢开放性骨折伴严重软组织损伤患者早期清创中的临床效果。方法回顾性分析2015年1月至2018年6月本院收治的四肢开放性骨折伴严重软组织损伤96例患者的资料。按照清创方式不同分为观察组(脉冲冲洗联合VSD组)49例及对照组47例。观察组伤口清创时采用脉冲冲洗伤口、清创后原位植皮、VSD覆盖创面。对照组采用传统方法冲洗伤口、清创后原位植皮、加压打包。观察两组患者植皮成活情况、检测术后1周血浆C反应蛋白(CRP)水平、创面细菌培养情况。结果观察组治疗有效率95.92%(47/49),对照组治疗有效率78.72%(37/47),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组术后1周CRP仅1例患者高于10.0 mg/L,对照组仍有6例患者高于10.0 mg/L,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。清创后创面培养阳性率观察组为4.08%,对照组为19.15%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论脉冲冲洗联合负压封闭引流技术在开放性骨折清创治疗中可显著提高清创效率、提高皮肤软组织成活率、降低伤口感染率,是一种安全、有效、理想的方法。

洗衣机过滤器外壳注塑模设计

通过对洗衣机过滤器外壳结构特点与模具设计方案的分析,介绍了洗衣机过滤器外壳注塑模的结构与工作过程,重点阐述了分型抽芯机构和机动旋转脱螺纹传动机构有关的理论与计算方法。生产实践证明,该模具设计合理,动作准确可靠,塑料件质量良好,生产效率高,完全能够满足用户的要求。

双Endobutton技术联合肩锁韧带重建治疗肩锁关节脱位

目的对比分析双Endobutton技术联合肩锁韧带重建与锁骨钩钢板治疗RockwoodⅢ型肩锁关节脱位的临床疗效。方法回顾性分析2016年4月至2019年2月收治的51例RockwoodⅢ型肩锁关节脱位患者资料,按治疗方法不同分为锁骨钩钢板组(30例)和双Endobutton钢板组(21例)。比较两组的手术时间、切开长度、术后6个月疼痛视觉模拟评分(VAS)、Karlsson分级及Constant-Murley评分。结果所有患者均获得随访,随访时间6~15个月。双Endobutton钢板组术后6个月患者患肩VAS评分平均为(1.2±0.6)分、锁骨钩钢板组为(2.3±1.4)分;双Endobutton钢板组Constant-Murley评分为(93.5±3.4)分、锁骨钩钢板组为(86.9±6.7)分,双Endobutton钢板组切口长度为(7.2±0.4)cm、锁骨钩钢板组为(7.8±0.7) cm,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。双Endobutton钢板组和锁骨钩钢板组手术时间分别为(50.1±4.2)min、(48.1±3.6)min,Karlsson分级优良率分别为95.2%(20/21)、83.3%(25/30),差异无统计学意义(P>0.05)。结论双Endobutton技术联合肩锁韧带重建法治疗RockwoodⅢ型肩锁关节脱位固定确实,具有切口更小、术后疼痛更少、患者功能恢复更好、无需二次手术等优点,疗效满意。

关节镜微骨折术治疗膝骨关节炎合并软骨损伤效果评估

目的:分析评估对膝骨关节炎合并软骨损伤患者采用关节镜微骨折术进行治疗的临床效果。方法:选取2017年2月~2019年1月收治的膝骨关节炎合并软骨损伤患者给予关节镜微骨折术治疗的30例为关节镜微骨折术组,同期膝骨关节炎合并软骨损伤患者给予常规手术治疗的30例为常规手术治疗组。观察比较关节镜微骨折术患者与常规手术患者的膝关节功能评分(Lysholm)与VAS疼痛评分。结果:两组患者治疗后Lysholm评分均高于治疗前,且关节镜微骨折术组患者高于常规手术治疗组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后VAS评分低于治疗前,且关节镜微骨折术组患者低于常规手术治疗组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:采用关节镜微骨折术对膝骨关节炎合并软骨损伤患者进行治疗效果更优,且患者膝关节功能恢复更快,患者疼痛感亦能得以有效减缓。

洗衣机排水阀注塑模设计

通过对洗衣机排水阀塑料件的分析,设计了洗衣机排水阀注塑模。着重介绍该注塑模的顺序脱模机构及工作过程,解决了模具开模时侧向长型芯与小型芯接触面的摩擦问题。该模具设计合理,动作准确可靠,塑料件质量良好,完全能够满足用户的要求。

洗衣机波轮轴承注塑模设计

通过对洗衣机波轮轴承的结构特点与模具设计方案的分析,介绍了洗衣机波轮轴承注塑模的结构与工作过程。注塑模主型芯结构采用组合式结构,不但解决了加工与表面磨削与抛光的难度,而且降低了加工费用;侧向分型抽芯机构采用局部分型,两哈夫块较薄,不但缩短了斜导柱长度,简化了模具结构,而且缩短了生产周期,有效降低模具成本。

高职学生塑料模具课程设计的训练举措与我见

为提高高职模具专业的教学质量与实训效果,讨论了塑料模具课程设计训练的重要性,并在探寻塑料模具课程设计训练的方法的过程中提出个人的一些观点与做法。

影响铝合金高速切削已加工表面粗糙度的关键因素

高速切削(HSC)以高的加工效率和高的加工质量为主要特征。工件已加工表面粗糙度为评价工件表面质量的重要指标。机床、刀具与工件材料是影响高速切削已加工表面粗糙度的外在关键因素,通过对铝合金高速切削条件下工件表面粗糙度形成过程及影响因素的深入分析研究、对降低工件已加工表面粗糙度方法和手段的探索,系统地分析了切削过程中表面粗糙度的控制因素。

洗衣机皮带轮注射模设计

通过对洗衣机皮带轮结构特点与模具设计方案的分析,介绍了洗衣机皮带轮注射模的结构与工作过程,重点阐述了分型抽芯机构有关的理论与计算方法。

汽车汽油过滤器注射模设计

通过对汽车汽油过滤器结构特点与模具设计方案的分析,介绍了汽车汽油过滤器注射模的结构与工作过程,重点阐述了浇注系统冷凝料自动脱出机构、侧向分型抽芯机构和二级脱模机构的结构。

表达绿色荧光蛋白重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建

新城疫病毒是理想的新型活病毒疫苗载体，具有巨大的优势和应用前景。采用生产实践中广泛应用、免疫效果良好的NDV LaSota弱毒疫苗株，建立了反向遗传操作系统。在此基础上，进一步构建了表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组NDV基因组cDNA克隆，成功救获了重组病毒rLaSota-EGFP，病毒F1代尿囊病毒液按1×10^4 EID50接种9—10日龄SPF鸡胚尿囊腔，接种后分别于24h、48h、72h及96h收获尿囊液，检测平均HA滴度分别为2^8、2^10.3、2^11.3和2^11，每mL尿囊液病毒量EID50分别为10^8.64、10^9.22、10^9.21和10^9.64，重组病毒与亲本株生长滴度在相近时间达到峰值，生长动力学特性与亲本株无明显差异。各代次重组病毒按1×10^6 EID50病毒量接种9—10日龄SPF鸡胚，96h内完全不致死鸡胚。救获重组病毒保持了LaSota弱毒疫苗亲本毒株对鸡胚良好的高滴度生长适应和低致病特性，并且鸡胚连续传9代次仍保持GFP的稳定表达及生物学特性不变。重组病毒rLaSota-EGFP的成功救获为开展新城疫病毒活载体疫苗研制提供了可行的技术平台。

表达传染性法氏囊病毒超强毒流行株VP2基因重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建

【目的】重组新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒(very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV)及新城疫重组二联活病毒载体疫苗的可行性。【方法】采用单股负链RNA病毒反向遗传操作技术,救获野生型NDV LaSota疫苗株rLaSota及表达vvIBDV Gx株VP2基因的重组疫苗株rLaSota-VP2,分别经滴鼻点眼途径免疫SPF雏鸡,免疫后21d分别以vvIBDVGx超强毒和新城疫强毒进行攻击。【结果】rLaSota及表达vvIBDV-VP2基因平均鸡胚致死时间均大于120h,脑内致病指数(ICPI)分别为0.4和0.36,静脉内致病指数(IVPI)均为0;接种后72～96h每毫升尿囊液EID50则分别达到109.0以上。rLaSota-VP2以106.0EID50一次免疫7日龄SPF鸡雏,免疫后3周对新城疫强毒致死攻击100%保护,对vvIBDV攻击免疫保护率达90%以上。【结论】重组病毒rLaSota-VP2保持了LaSota亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病性及遗传稳定性,免疫雏鸡对新城疫强毒和传染性法氏囊病毒超强毒株的致死均形成有效免疫保护。本研究为研制传染性法氏囊病-新城疫重组二联活载体疫苗奠定了基础。

重组杆状病毒表达牛β干扰素及其生物学活性研究

本研究构建了表达牛β干扰素的重组杆状病毒,感染sf9细胞后,分别采用免疫荧光和免疫印迹证实了重组BoIFN-β的表达存在于细胞内和培养上清中。采用表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒(VSV*GFP)检测分泌到细胞上清中重组BoIFN-β的抗病毒活性,可达到106.0AU/mL。同时重组BoIFN-β还可以激活鸡Mx启动子控制的萤光素酶报告基因的转录表达。综上,本研究采用杆状病毒表达系统,重组牛β干扰素以分泌形式高水平表达,且具有天然Ⅰ型干扰素的生物学活性。

超大深径比深小孔的工艺方法和电极研制

深径比超过1000的深小孔加工是世界难题,尤其是直径小于3mm的深小孔。在分析普通电火花深孔加工和专业电火花深小孔加工机床对超大深径比小孔加工仍存在排残屑、散热、稳定性差和导向困难等基础上,为克服上述问题而发明了一种其导向、稳定性与加工深度无关的自导向、自稳定的特殊电极,并给出了可靠的工艺实施方案方法,独特的工件倒置安装方式,表述了加工规律和试验结果。

基于Mx启动子和荧光素酶报告基因定量检测鸡Ⅰ型干扰素生物学活性的研究

为了探索并建立快速、敏感、准确的Ⅰ型干扰素生物学活性定量分析方法,本研究克隆了鸡Mx启动子(Mxp),并在其下游连接荧光素酶(Luciferase,luc)报告基因,构建鸡Ⅰ型干扰素活性检测质粒pMxp-luc。以pMxp-luc瞬时转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,24 h后用鸡IFN-α/β处理细胞,结果荧光素酶基因在Mx启动子的作用下获得转录表达;荧光素酶的表达量与干扰素的抗病毒活性有着良好的线性相关性,并在干扰素处理细胞6 h后就可以检测;对鸡IFN-α和IFN-β检测的敏感性分别约为抗病毒活性定量检测方法的10和100倍。该检测系统与传统抗病毒定量检测方法相比,具有快速简便、准确敏感、便于高通量检测等优势,在禽类乃至哺乳动物干扰素生物学基础和应用研究及产业化过程中具有重要应用价值。

锁定钢板与传统钢板治疗跟骨关节内骨折疗效对比分析

目的对比研究锁定钢板与传统钢板治疗跟骨关节内骨折的疗效。方法选取2014年1月至2018年12月该院收治的跟骨关节内骨折患者92例作为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组46例。观察组采用锁定钢板治疗,对照组采用传统钢板治疗,对比2组患者疗效、手术相关指标及治疗前后跟骨结节关节角和十字角情况。结果观察组患者疗效明显优于对照组,住院时间、骨折愈合时间均明显低于对照组。治疗后跟骨结节关节角和十字角情况均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与传统钢板治疗比较,对跟骨关节内骨折患者实施锁定钢板治疗疗效更加显著,能有效加快骨折愈合,缩短患者住院时间,值得临床推广应用。

机动旋转脱螺纹机构在风扇前壳注射模设计中的应用

在分析风扇前壳体塑件结构及螺纹脱模方法的基础上,阐述了采用链传动机构实现螺纹型环机动旋转脱模的设计过程及其工作原理。

腘窝部位神经定位测量及其意义

目的定位国人胫神经、腓总神经在腘窝的解剖位置,为临床诊断和治疗提供解剖资料。方法观察和测量16具(男11具、女5具)经防腐处理的尸体的30例腘窝(左15例、右15例)内胫神经、腓总神经走行及解剖关系。包括胫神经8项和腓总神经5项的相关指标。胫神经测量除腘窝顶平面的直径外,均在股骨髁间距最宽处平面测得;腓总神经测量沿腓总神经走行方向进行。结果胫神经的直径在腘窝内自上而下逐渐增粗,从顶部的(3.27±0.21)mm到髁部的(3.47±0.28)mm,半膜肌腱和股二头肌腱之间的距离为(48.72±4.73)mm,胫神经在这两个肌腱间的位置变异较大,距股二头肌内侧缘(22.88±1.87)mm,距半膜肌外侧缘(22.59±2.24)mm。腓总神经至腓骨头最突出点的距离左、右侧分别为(16.51±0.36)、(16.19±0.46)mm。腓总神经发出点至分支点距离左、右侧分别为(11.89±1.21)、(12.56±1.01)mm。43%的腓总神经在进入腓管前发出腓深和腓浅神经。结论 95%的尸体腘窝部的胫神经可以定位在股骨髁间距最宽平面中内49.7%处,腓总神经在绕腓骨颈处均穿行于腓管内。