人源性单克隆抗体AT_4对卵巢癌ao10/17细胞的细胞毒性作用

目的和方法：本研究应用MIT比色法分析人源性单克隆抗体（HMcAb）AT4对于人卵巢癌细胞ao10／17的体外细胞毒。结果：HMcAbAT4能激活人和家兔血清补体介导的ao10／17细胞的细胞溶解，介导人效应细胞对于靶肿瘤细胞的抗体依赖细胞毒，增强人LAK细胞对于ao10／17细胞的杀伤作用。结论：HMcAbAT4在体外可介导对于人卵巢癌细胞的抗体依赖效应细胞的细胞毒和补体依赖细胞溶解，因而可能成为卵巢癌免疫治疗研究特别有希望的试剂。

宫颈癌U_(14)细胞正丁醇提取物脂质体瘤苗的制备及其诱导体液免疫反应观察

目的观察宫颈癌U14细胞抗原性瘤苗诱导的体液免疫效应。方法正丁醇法提取小鼠宫颈癌U14细胞表面抗原(CBE),包裹入阴离子脂质体制成CBE-脂质体瘤苗,腹腔接种免疫Km小鼠,用间接ELISA法检测血清抗CBE特异性抗体的产生情况。结果经CBE-脂质体瘤苗免疫的小鼠血清中有显著的抗CBE抗体生成,抗体滴度在末次免疫后的第14天开始升高,第21天达到高峰,至少保持到第28天。结论脂质体包裹的抗原性瘤苗应用于小鼠体内能诱导出更明显的体液免疫反应。

野生型p53基因转染U14细胞增强肿瘤抗原的免疫原性

目的:探讨p53基因修饰的U14细胞瘤苗能否增强抗小鼠宫颈癌U14细胞的主动免疫反应。方法:随机将实验分3组:p53-U14细胞瘤苗组、U14细胞瘤苗组、空白对照组;运用阳离子脂质体介导的转染方法,将p53基因导入U14细胞,用含G418的选择性培养基对已转染细胞进行筛选,以获得稳定表达相应P53蛋白的U14细胞,用间接免疫细胞化学方法检测P53蛋白的表达情况。采用反复冻融法分别制备p53-U14细胞瘤苗和U14细胞瘤苗,在此基础上采用MTT法检测经各组细胞瘤苗免疫后的小鼠脾细胞对U14细胞的细胞毒作用。结果:效靶比为20:1时,p53-U14细胞瘤苗组、U14细胞瘤苗组和空白对照组刺激的脾细胞杀伤活性分别为64.91%、42.14%和21.66%;效靶比为40:1时,p53-U14细胞瘤苗组、U14细胞瘤苗组和空白对照组刺激的脾细胞杀伤活性分别为58.87%、42.91%、8.19%。结论:p53基因修饰的U14细胞确能提高肿瘤抗原的免疫原性。

体外免疫建立分泌卵巢癌反应性单克隆IgG人-鼠杂交瘤

用正丁醇提取的人卵巢癌细胞ａｏ１０／１７抗原，置于含免疫反应剂的无血清培基中免疫人脾细胞。经融合、筛选和克隆化，建立了９株分泌人源性单克隆ＩｇＧ抗体（ＨｍＡｂ）的人－鼠杂交瘤细胞系ＡＦ１～ＡＦ９。酶标抗体竞争抑制试验表明，其中ＨｍＡｂＡＦ５和ＡＦ８能识别卵巢癌抗原分子上的不同表位；杂交瘤细胞系所分泌的ＨｍＡｂ的效价高。

大鼠间充质干细胞在小鼠肝损伤中的作用

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在四氯化碳(CCl4)导致小鼠肝损伤中的作用,为临床进行细胞移植治疗肝脏疾病提供新策略。方法无菌条件下取雄性Wistar大鼠骨髓,分离培养及流式细胞仪检测MSC;采用CCl4制作雌性BALB/c小鼠肝损伤模型,肝损伤小鼠随机分为MSC移植组和肝损伤对照组。MSC移植组在CCl4损伤后立即经尾静脉注入大鼠MSC,6周后处死小鼠,检测小鼠肝损伤程度和大鼠MSC植入情况。结果流式细胞仪结果显示:第3代大鼠MSC CD45-/CD90+细胞为94.54%,CD45-/CD44+细胞为91.25%;肝组织学观察显示:MSC移植组肝损伤修复程度明显好于肝损伤对照组;PCR方法证实只有MSC移植组肝内有大鼠Y染色体阳性细胞存在。结论体外分离培养及扩增的大鼠MSC移植到CCl4肝损伤小鼠体内,可参与肝损伤修复,减轻CCl4导致的肝损伤。

^(99m)Tc标记单克隆抗体Au_(14-1)对荷宫颈癌小鼠的放射免疫显像研究

目的和方法：应用99mTc直接法标记抗小鼠宫颈癌（U14）单克隆抗体Au14-1，对荷瘤Km小鼠进行放射性分布和放射免疫显像的实验观察，探讨用99mTc－An14-1作宫颈癌导向诊断和导向治疗的可能性。结果：（1）99mTc－Au14-1注射后12h肿瘤灶已有放射性聚集，24h肿瘤组织的％ID／g值达8．79，呈明显特异性浓聚；（2）除肾脏外，各脏器的T／NT值在2．02~6．71之间，SPECT图像12h已见肿瘤显影，24h肿瘤影像更为清晰。结论：99TcTc－An14-1的体内分布与显像结果相一致，表明An14-1在体内具有良好的宫颈癌导向定位作用。

宫颈癌单克隆抗体AU_(14-1)介导效应细胞对靶细胞的细胞毒

目的:研究单克隆抗体AU14-1介导的细胞毒作用对小鼠宫颈癌(U14)细胞的杀伤效果。方法:以小鼠淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、脾淋巴细胞及巨噬细胞为效应细胞,应用MTT比色法测试在单克隆抗体AU14-1介导下对小鼠宫颈癌(U14)细胞的体外细胞毒作用。结果:3种效应细胞对于经单克隆抗体AU14-1处理的肿瘤细胞的杀伤率显著高于未经AU14-1处理的肿瘤细胞(P<0.01);以LAK的ADCC作用最强,巨噬细胞次之,脾淋巴细胞最弱(P<0.01)。结论:单克隆抗体AU14-1能通过抗体依赖细胞介导细胞毒(ADCC)发挥淋巴样细胞、巨噬细胞及LAK细胞对靶肿瘤细胞的杀伤作用;提示特异性宫颈癌单克隆抗体AU14-1介导的ADCC在治疗宫颈癌中可能是一种有潜在价值的方法。

稳定表达外源性p53基因U_(14)细胞系的建立及鉴定

目的建立稳定表达外源性p53基因的U14细胞系。方法将提取的含p53质粒DNA用脂质体介导的转染方法导入U14细胞,经含G418选择培养基筛选得到稳定转染的细胞系,用间接免疫细胞化学法鉴定外源性p53基因的表达情况。结果筛选得到的U14细胞系可检测到外源性p53蛋白的表达。结论建立了稳定表达外源性p53基因的U14细胞系,为进一步研究p53基因用于肿瘤免疫治疗奠定基础。

U14-CBE脂质体瘤苗诱导的细胞和体液免疫应答

目的探讨脂质体瘤苗诱导的免疫应答,以探明细胞表面抗原(crude butanol extraction,CBE)-脂质体瘤苗诱导抗癌免疫的效应机制。方法采用正丁醇法提取子宫颈癌U14-CBE,以卵磷脂(ePC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和胆固醇(Chol)制成大单层脂质体,将CBE包裹入脂质体,制成CBE-脂质体瘤苗。分别于第0、7、14天将CBE-脂质体瘤苗腹腔接种于免疫Km小鼠体内,在免疫后的第7、14、24天处死小鼠,取组织称湿重,并行组织学、组织化学观察脾脏中由该脂质体瘤苗诱导的T细胞和B细胞的反应。结果经U14-CBE脂质体和单纯CBE免疫的小鼠脾脏重量明显高于空白对照组和空白脂质体组(P<0.05),且CBE脂质体组脾重呈持续性增长,而单纯CBE组脾重于第14天达高峰,第24天又有所回落。组织学和组织化学染色显示脾脏中细动脉周围淋巴鞘(periarterial lymphatic sheath,PALS)和免疫母细胞数量增多、嗜派若宁大细胞增多以及淋巴小结增多、生发中心活性加强和浆细胞数量增多。结论 CBE-脂质体瘤苗既可引起显著的细胞免疫反应,也可引发体液免疫反应。

单克隆抗体诱发肿瘤抗原调变的初步研究

给同基因小鼠皮下接种TD。小鼠宫颈癌(U_(14))细胞;然后,给实验组动物腹腔注入不同剂量的抗U_(14)单克隆抗体(AU_(14-1))。结果发现,肿瘤细胞接种后的267天中,对照组动物全部未发生肿瘤,都存活;而在大剂量AU_(14-1)处理的实验组动物中,86—88%在接种部位发生了实体瘤,且死于全身性肿瘤疾患。表明AU_(14-1)对于U_(14)细胞的免疫促进作用。应用AU_(14-1)研究U_(14)细胞在体外对特异抗体的反应,结果证实,AU_(14-1)诱发U_(14)细胞抗原调变。间接膜免疫荧光表明,AU_(14-1)抗体和U_(14)抗原从这些细胞表面消失。本研究结果提示抗原词变可能是宫颈癌细胞逃逸单克隆抗体治疗的重要机制。

分泌人源性单克隆抗体永生化淋巴细胞系的构建

目的：构建分泌人源性单克隆抗体（ ＭｃＡｂ） 的永生化Ｂ 淋巴细胞系。方法：用正丁醇法提取的人卵巢癌细胞系ａｏ１０１７ 抗原在含免疫活化剂的无血清培基中免疫人淋巴细胞；将制备ａｏ １０１７ 细胞ＤＮＡ 转染经体外免疫的淋巴细胞。采用ＥＬＩＳＡ 筛选和有限稀释法克隆化。结果：建成４ 株分泌抗卵巢癌ＭｃＡｂ 的转染体细胞ＡＴ１ 、ＡＴ２ 、ＡＴ３ 和ＡＴ４ ；ＭｃＡｂ 相加试验表明，它们识别卵巢癌抗原分子的同一表位。ＡＴ４ 已在体外培养４６０ 多天，冻存复苏后仍保持抗体产生能力。夹心ＥＬＩＳＡ 发现，人源性ＭｃＡｂ ＡＴ４ 能与卵巢癌细胞表面可溶性抗原发生免疫反应。结论：体外免疫和ＤＮＡ 转染的结合，可建成分泌人源性ＭｃＡｂ 的永生化Ｂ 淋巴细胞系，为人源性ＭｃＡｂ

MTT法检测AU_(14-1)介导LAK细胞的细胞毒效应

目的 应用MTT比色法研究抗小鼠宫颈癌单克隆抗体 (McAb)AU14 1介导淋巴因子激活的杀伤细胞 (lym phokineactivatedkillercells,LAK)对靶肿瘤细胞的体外细胞毒作用。 方法 通过检测不同数量小鼠宫颈癌U14 细胞与加入四甲基偶氮唑盐 { [3 (4,5 dimethylthiazol 2 yl) 2 ,5 diphenylterazoliumbromide],MTT}后形成甲颗粒所产生的不同吸光度 (A)值 ,建立测定的线性关系。进而应用MTT比色法研究McAbAU14 1介导LAK细胞的体外细胞毒作用。结果 当U14 细胞在 10～ 10 5个 /孔以内时 ,活细胞数与A值呈直线相关 ;LAK细胞对于经AU14 1处理的肿瘤细胞的杀伤率显著高于未经AU14 1处理的肿瘤细胞 (P <0 .0 1)。结论 McAbAU14 1可加强LAK细胞对靶细胞的溶解作用。提示特异性宫颈癌单克隆抗体AU14 1介导的细胞毒在治疗宫颈癌中可能是一种有潜在价值的方法。

宫颈癌抗独特型单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备宫颈癌抗独特型单克隆抗体并鉴定其抗原模拟特性。方法和结果:以识别小鼠和人宫颈癌相关抗原分子共同表位的单克隆抗体AU14-1(AB1)为免疫原在含免疫反应剂的无血清培养液中致敏小鼠脾细胞, 并将其与SP2/0融合,经筛选和克隆化,建成一株能分泌抗独特型单克隆抗体(AB2)的杂交瘤细胞系。AB2的抗原模拟特性经ELISA、结合和竞争抑制试验以及免疫组化染色,表明为AB2Β具有宫颈癌细胞膜表面抗原的“内影像”。结论:获得一株具有宫颈癌抗原内影像的抗独特型单克隆抗体。

宫颈癌U_(14)细胞正丁醇提取物脂质体瘤苗的体内抑瘤效应

目的观察小鼠宫颈癌U14细胞抗原脂质体瘤苗的体内抑瘤效应。方法正丁醇法提取U14细胞表面抗原(CBE),包裹入阴离子脂质体制成CBE-脂质体瘤苗,腹腔接种免疫Km小鼠,然后每只腹腔接种104 U14细胞或105 U14细胞,观察瘤苗对后续U14细胞负荷攻击的免疫保护作用。同时用104 U14细胞预先攻击Km小鼠,再用CBE脂质体瘤苗免疫观察瘤苗的抑瘤能力。结果低剂量(104 U14细胞)CBE脂质体瘤苗免疫组荷瘤小鼠平均生存时间为(25.50±2.08)天,明显长于空白对照组[(18.00±0.00)天]、单纯脂质体组[(18.33±0.52)天]和单纯CBE组[(19.33±1.75)天],有统计学差异(P<0.01)。高剂量(105 U14细胞)荷瘤小鼠组与对照组生存时间比较无差异。腹腔给予104 U14细胞,再给予瘤苗免疫后各组小鼠生存时间无差异。结论 CBE脂质体瘤苗对小鼠后续腹腔攻击的相关肿瘤细胞,可产生抑制作用,但效果与肿瘤细胞负荷量有关。

AU14－1单克隆抗体与宫颈癌免疫学研究

本文概述了抗宫颈癌单克隆抗体ＡＵ１４－１的制备技术，杂交瘤和转染体细胞的无血清长期培养；抗体及其交联物的杭瘤作用和逃逸机制；宫颈癌抗原的免疫组化和血清学分析；人和小鼠宫颈癌的共同抗原决定簇和“进化抗原”。

抗小鼠宫颈癌单克隆抗体的补体依赖细胞毒性作用

采用微量细胞毒性试验研究抗小鼠宫颈癌U_(14)单克隆抗体的补体依赖细胞毒性作用。对于免疫的肿瘤U_(14)细胞,细胞毒性作用非常显著;单克隆抗体的细胞毒性作用依赖于家兔血清补体;当用豚鼠血清补体时,靶肿瘤细胞不会发生溶解。但在体内实验,单克隆抗体与补体的联合应用对于大量宫颈癌细胞的治疗无效。

单克隆抗体AU_（14－1）测定人血清宫颈癌抗原

本研究应用抗小鼠宫颈癌单克隆抗体ＡＵ_１４－１所建立的夹心ＥＬＩＳＡ法，测定了人血清宫颈癌抗原．以４０例正常妇女血清的Ａ４９０均值加３个标准差之和（０．２０Ａ４９０Ｕ）作为阳性阈值，对２５例宫颈癌、５２例宫颈炎和１２例其他妇科疾患病人血清进行检测，结果宫颈癌为２５／２５阳性，宫颈炎２／５２阳性（其中１例阳性者为重度宫颈糜烂），其他妇科疾患均为阴性．此外，１例卵巢癌腹水亦为阴性．经统计学分析，ＡＵ１４－１确定的宫颈癌抗原存在于宫颈鳞癌和腺癌病人血清中，其阳性率均为１００％，敏感性１００％，特异性９６．２％．与目前研究的宫颈癌血清标志物ＳＣＣ和ＣＡ—１２５比较，ＡＵ１４－１—ＥＬＩＳＡ对人血清官颈癌抗原的检测，具有较高的敏感性和特异性以及较好的临床应用前景，并进一步证明了肿瘤“进化抗原”的理论．

抑癌基因与宫颈癌的研究

目前，已通过多种方法克隆鉴定出一些抑癌基因，其表达产物涉及细胞的生长、分化、ＤＮＡ的合成及生长信息传递等生物过程。它们与原癌基因相辅相成，以维持细胞的正常生长。虽然还不十分确切知道这些抑癌基因与宫颈癌发生、发展直接相关，但已有研究表明，抑癌基因Ｐ５３...

宫颈癌单克隆抗体AU_(14-1)介导巨噬细胞对靶细胞的细胞毒作用

目的应用MTT比色法研究单克隆抗体AU14-1介导的巨噬细胞对小鼠宫颈癌(U14)细胞的杀伤效果. 方法通过检测不同数量小鼠宫颈癌U14细胞与加入四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl terazolium bromide], MTT)后形成甲臜颗粒所产生的不同吸光度(A)值,建立测定的线性关系.进而以小鼠巨噬细胞为效应细胞,应用MTT比色法测试在单克隆抗体AU14-1介导下对小鼠宫颈癌(U14)细胞的体外细胞毒作用. 结果效应细胞对于经单克隆抗体AU14-1处理的肿瘤细胞的杀伤率显著高于未经AU14-1处理的肿瘤细胞(P＜0.01). 结论当U14细胞在10～105个/孔时,活细胞数与A值呈直线相关;单克隆抗体AU14-1能通过抗体依赖细胞介导细胞毒(ADCC)发挥巨噬细胞对靶肿瘤细胞的杀伤作用,提示特异性宫颈癌单克隆抗体AU14-1介导的ADCC在治疗宫颈癌中可能是一种有潜在价值的方法.