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斑马鱼SDC4基因的克隆与遗传进化分析
1
作者
崔佳
温炟
+1 位作者
陈广信
吴长新
《长治医学院学报》
2022年第3期161-165,171,共6页
目的:克隆斑马鱼多配体聚糖(SDC)4基因并分析其遗传进化关系,为探究斑马鱼SDC4基因的功能奠定分子生物学基础。方法:将分子克隆得到的斑马鱼SDC4基因全长cDNA利用Gibson组装方法构建至pCS2+载体并对其进行序列分析;利用qRT-PCR检测受精...
目的:克隆斑马鱼多配体聚糖(SDC)4基因并分析其遗传进化关系,为探究斑马鱼SDC4基因的功能奠定分子生物学基础。方法:将分子克隆得到的斑马鱼SDC4基因全长cDNA利用Gibson组装方法构建至pCS2+载体并对其进行序列分析;利用qRT-PCR检测受精后1 d和3 d的AB、Tübingen(TU)野生型斑马鱼SDC4 mRNA表达量和胚胎发育前10 d的TU野生型斑马鱼SDC4 mRNA的表达差异;根据NCBI和ensemble网络信息,对斑马鱼SDC4、人SDC4和小鼠SDC4基因在染色体上的基因连锁信息作出分析,并利用MegAlign软件对斑马鱼SDC4、人SDC4和小鼠SDC4蛋白进行氨基酸序列比对分析其同源性,再应用MEGAX软件对不同物种SDC4蛋白构建系统发生树。结果:测序结果显示克隆得到的斑马鱼SDC4基因与ensemble公布的序列一致;AB、TU野生型斑马鱼在受精后前3 d的SDC4 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),TU野生型斑马鱼SDC4 mRNA表达在胚胎发育前期呈现一定程度的母系遗传控制;染色体连锁基因座位图发现斑马鱼SDC4与人SDC4、小鼠SDC4的连锁基因不完全相同,蛋白序列比对分析斑马鱼SDC4蛋白与人SDC4、小鼠SDC4蛋白同源性分别为38.3%、44.2%,根据不同物种的SDC4氨基酸序列构建的系统发生树反映了生物进化的关系。结论:成功克隆了斑马鱼SDC4基因并对其进行了遗传进化分析,补充了斑马鱼SDC4的分子生物学信息。
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关键词
斑马鱼
SDC4
MRNA表达
染色体连锁基因
氨基酸序列比对
系统进化树
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职称材料
敲低ASAP1降低结核分枝杆菌感染小鼠RAW264.7细胞的迁移能力
2
作者
崔佳
温炟
+1 位作者
王玉环
吴长新
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期1064-1068,共5页
目的观察含SH3结构域-ADP-核糖基化因子(Arf)GTP酶激活蛋白-锚蛋白重复序列和PH结构域1(ASAP1)介导小鼠RAW264.7巨噬细胞对结核分枝杆菌感染过程的影响以及ASAP1对巨噬细胞迁移能力的影响。方法建立ASAP1敲低的RAW264.7细胞系,感染结核...
目的观察含SH3结构域-ADP-核糖基化因子(Arf)GTP酶激活蛋白-锚蛋白重复序列和PH结构域1(ASAP1)介导小鼠RAW264.7巨噬细胞对结核分枝杆菌感染过程的影响以及ASAP1对巨噬细胞迁移能力的影响。方法建立ASAP1敲低的RAW264.7细胞系,感染结核分枝杆菌H37Ra后,利用荧光共聚焦显微镜和平板计数方法对胞内细菌的载量进行检测,采用TranswellTM法检测ASAP1敲低细胞的迁移能力。结果与对照组细胞相比,ASAP1敲低的RAW264.7细胞感染H37Ra后胞内细菌载量增多,且细胞迁移能力降低。结论敲低ASAP1降低RAW264.7细胞的迁移能力。
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关键词
含SH3结构域-Arf
GTP酶激活蛋白-锚蛋白重复序列和PH结构域1(ASAP1)
敲低
RAW264.7细胞
结核分枝杆菌
细胞迁移
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职称材料
表达荧光蛋白卡介苗菌株的构建与应用及其qPCR定量方法的建立
3
作者
崔佳
温炟
+2 位作者
孙燚
杨国凤
吴长新
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2021年第9期997-1000,1007,共5页
目的构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)菌株,并建立快速定量BCG细菌数的qPCR方法。方法电转化构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的BCG菌株,比较其与野生菌株的生长曲线。将此荧光蛋白标记的BCG感染...
目的构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)菌株,并建立快速定量BCG细菌数的qPCR方法。方法电转化构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的BCG菌株,比较其与野生菌株的生长曲线。将此荧光蛋白标记的BCG感染人源单核巨噬细胞系THP1细胞,用共聚焦显微镜观察感染吞噬效果。基于BCG 16SrRNA序列设计特异性引物,应用qPCR定量检测BCG细菌基因组DNA,根据细菌平板计数菌落数与qPCR循环数绘制标准曲线,建立qPCR定量BCG细菌数的方法。结果构建的荧光蛋白标记BCG菌株荧光信号强,生长曲线与野生菌株基本一致,共聚焦显微镜观察细菌感染细胞后呈现良好荧光效果。建立的qPCR检测方法能定量检测BCG细菌数量,重复试验中组内和组间的变异系数均小于3%。结论构建的卡介苗菌株稳定表达荧光蛋白。建立的qPCR方法重复性好,可用于对BCG菌株的快速计数。
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关键词
卡介苗
荧光蛋白
qPCR
定量细菌数
原文传递
题名
斑马鱼SDC4基因的克隆与遗传进化分析
1
作者
崔佳
温炟
陈广信
吴长新
机构
长治医学院微生物学教研室
山西大学生物医学研究院
出处
《长治医学院学报》
2022年第3期161-165,171,共6页
基金
山西省基础研究计划(自由探索类)项目(20210302124230)
山西省高等学校科技创新计划项目(2021L340)
长治医学院博士科研启动基金(BS202121)。
文摘
目的:克隆斑马鱼多配体聚糖(SDC)4基因并分析其遗传进化关系,为探究斑马鱼SDC4基因的功能奠定分子生物学基础。方法:将分子克隆得到的斑马鱼SDC4基因全长cDNA利用Gibson组装方法构建至pCS2+载体并对其进行序列分析;利用qRT-PCR检测受精后1 d和3 d的AB、Tübingen(TU)野生型斑马鱼SDC4 mRNA表达量和胚胎发育前10 d的TU野生型斑马鱼SDC4 mRNA的表达差异;根据NCBI和ensemble网络信息,对斑马鱼SDC4、人SDC4和小鼠SDC4基因在染色体上的基因连锁信息作出分析,并利用MegAlign软件对斑马鱼SDC4、人SDC4和小鼠SDC4蛋白进行氨基酸序列比对分析其同源性,再应用MEGAX软件对不同物种SDC4蛋白构建系统发生树。结果:测序结果显示克隆得到的斑马鱼SDC4基因与ensemble公布的序列一致;AB、TU野生型斑马鱼在受精后前3 d的SDC4 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),TU野生型斑马鱼SDC4 mRNA表达在胚胎发育前期呈现一定程度的母系遗传控制;染色体连锁基因座位图发现斑马鱼SDC4与人SDC4、小鼠SDC4的连锁基因不完全相同,蛋白序列比对分析斑马鱼SDC4蛋白与人SDC4、小鼠SDC4蛋白同源性分别为38.3%、44.2%,根据不同物种的SDC4氨基酸序列构建的系统发生树反映了生物进化的关系。结论:成功克隆了斑马鱼SDC4基因并对其进行了遗传进化分析,补充了斑马鱼SDC4的分子生物学信息。
关键词
斑马鱼
SDC4
MRNA表达
染色体连锁基因
氨基酸序列比对
系统进化树
Keywords
zebrafish
SDC4
mRNA expression
chromosome linkage genes
amino acid sequence alignment
phylogenetic tree
分类号
Q959.4 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
敲低ASAP1降低结核分枝杆菌感染小鼠RAW264.7细胞的迁移能力
2
作者
崔佳
温炟
王玉环
吴长新
机构
山西大学生物医学研究院
长治医学院微生物学教研室
山西省高等创新研究院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期1064-1068,共5页
基金
国家科学技术部重大研发项目(2017YFD0500303)
长治医学院春晖计划(QDZ201906)。
文摘
目的观察含SH3结构域-ADP-核糖基化因子(Arf)GTP酶激活蛋白-锚蛋白重复序列和PH结构域1(ASAP1)介导小鼠RAW264.7巨噬细胞对结核分枝杆菌感染过程的影响以及ASAP1对巨噬细胞迁移能力的影响。方法建立ASAP1敲低的RAW264.7细胞系,感染结核分枝杆菌H37Ra后,利用荧光共聚焦显微镜和平板计数方法对胞内细菌的载量进行检测,采用TranswellTM法检测ASAP1敲低细胞的迁移能力。结果与对照组细胞相比,ASAP1敲低的RAW264.7细胞感染H37Ra后胞内细菌载量增多,且细胞迁移能力降低。结论敲低ASAP1降低RAW264.7细胞的迁移能力。
关键词
含SH3结构域-Arf
GTP酶激活蛋白-锚蛋白重复序列和PH结构域1(ASAP1)
敲低
RAW264.7细胞
结核分枝杆菌
细胞迁移
Keywords
ArfGAP with SH3 domain,ankyrin repeat and PH domain 1(ASAP1)
knockdown
RAW264.7
Mycobacterium tuberculosis
cell migration
分类号
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
表达荧光蛋白卡介苗菌株的构建与应用及其qPCR定量方法的建立
3
作者
崔佳
温炟
孙燚
杨国凤
吴长新
机构
山西大学生物医学研究院化学生物学与分子工程教育部重点实验室
长治医学院微生物学教研室
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2021年第9期997-1000,1007,共5页
基金
国家科学技术部重大研发项目子课题“禽畜重要胞内菌基因调控及其与宿主互作的分子机制研究”项目(No.2017YFD0500303)
长治医学院春晖计划项目(No.QDZ201906)。
文摘
目的构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)菌株,并建立快速定量BCG细菌数的qPCR方法。方法电转化构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的BCG菌株,比较其与野生菌株的生长曲线。将此荧光蛋白标记的BCG感染人源单核巨噬细胞系THP1细胞,用共聚焦显微镜观察感染吞噬效果。基于BCG 16SrRNA序列设计特异性引物,应用qPCR定量检测BCG细菌基因组DNA,根据细菌平板计数菌落数与qPCR循环数绘制标准曲线,建立qPCR定量BCG细菌数的方法。结果构建的荧光蛋白标记BCG菌株荧光信号强,生长曲线与野生菌株基本一致,共聚焦显微镜观察细菌感染细胞后呈现良好荧光效果。建立的qPCR检测方法能定量检测BCG细菌数量,重复试验中组内和组间的变异系数均小于3%。结论构建的卡介苗菌株稳定表达荧光蛋白。建立的qPCR方法重复性好,可用于对BCG菌株的快速计数。
关键词
卡介苗
荧光蛋白
qPCR
定量细菌数
Keywords
BCG
fluorescent protein
qPCR
quantification of the number of bacteria
分类号
R186.2 [医药卫生—流行病学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
斑马鱼SDC4基因的克隆与遗传进化分析
崔佳
温炟
陈广信
吴长新
《长治医学院学报》
2022
0
下载PDF
职称材料
2
敲低ASAP1降低结核分枝杆菌感染小鼠RAW264.7细胞的迁移能力
崔佳
温炟
王玉环
吴长新
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
下载PDF
职称材料
3
表达荧光蛋白卡介苗菌株的构建与应用及其qPCR定量方法的建立
崔佳
温炟
孙燚
杨国凤
吴长新
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2021
0
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