血清低密度脂蛋白特异性循环免疫复合物的测定及其临床意义

为了建立血清低密度脂蛋白 (LDL)循环免疫复合物 (LDL CIC)的测定方法。利用酶联免疫吸附试验技术 ,以羊抗人IgG作包板以识别CIC中的抗体部分 ,以兔抗人LDL作酶标物识别CIC中的抗原部分。研究显示颈动脉粥样硬化病人血中的LDL CIC明显高于对照组 ,LDL CIC水平与血中LDL以及其他修饰型LDL含量无关。结果表明 ,该方法简便、稳定 ,LDL

AIDS患者肠内营养支持治疗后喂养不耐受发生情况及其影响因素

目的分析AIDS患者肠内营养支持治疗后喂养不耐受发生情况及其影响因素。方法回顾性分析174例行肠内营养支持治疗的AIDS患者的临床资料,依据肠内营养支持治疗后发生喂养不耐受情况,将其分为耐受组与不耐受组。比较两组患者的一般资料、临床治疗情况、实验室检查结果、肠内营养支持治疗相关资料。采用多因素Logistic回归模型分析AIDS患者肠内营养支持治疗后发生喂养不耐受的影响因素。结果共76例患者发生喂养不耐受,发生率为43.7%。两组患者在平均动脉压、急性生理与慢性健康评估Ⅱ(APACH EⅡ)评分、机械通气治疗情况、高效联合抗反转录病毒治疗(HAART)情况,以及肠内营养支持治疗前应用激素情况、应用血管活性药物情况、抗生素使用数量、CD4^(+)T淋巴细胞计数方面比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,APACH EⅡ评分>15分、机械通气治疗、HAART均是AIDS患者肠内营养支持治疗后发生喂养不耐受的危险因素,而平均动脉压>80 mmHg、肠内营养支持治疗前CD4^(+)T淋巴细胞计数>200个/μL是保护因素(均P<0.05)。结论AIDS患者肠内营养支持治疗后发生喂养不耐受的风险较高,其中APACH EⅡ评分>15分、接受机械通气治疗、接受HAART的AIDS患者发生喂养不耐受的风险增加,平均动脉压>80 mmHg、肠内营养支持治疗前CD4^(+)T淋巴细胞计数>200个/μL的AIDS患者发生喂养不耐受的风险降低。

儿童单纯肥胖症血清脂蛋白(a)含量的研究

儿童单纯肥胖症血清脂蛋白（ａ）含量的研究首都医科大学宣武医院神经内科实验室温玫王拥军袭淑琴高蔚然肥胖症是当今最为严重的营养问题［１］，已经证实肥胖是心脑血管病的危险因素［２］。有关肥胖症脂类代谢的变化已进行了许多研究，脂蛋白（ａ）［ｌｉｐｏｐｒｏｔｅ...

中药总蒽醌粗提物对低密度脂蛋白氧化的抑制作用

目的 从单味中药大黄、虎杖、何首乌中提取总蒽醌类化合物 ,观察其对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用。方法 以95%乙醇提取并加用碱提取酸沉淀法提取蒽醌类成分 ,观察其对 Cu2 + 诱导的 LDL氧化的抑制作用 ,以硫代巴比妥酸反应物质法(TBARS)测定丙二醛 (MDA)含量 ,计算药物对氧化的抑制率以及抑制率为 50 %时所需药物浓度 (IR5 0 )。结果 总蒽醌类提取物使氧化动力曲线迟滞相延长 ,峰值降低 ,抑制过氧化脂质生成并有浓度依赖性 ,各种药物的 IR5 0 分别为 8.1 8μg/ ml(大黄 )、1 5.58μg/ ml(虎杖 )、3.0 6× 1 0 9μg/ ml(何首乌 )。结论 三种药物蒽醌类提取物均有抑制 LDL氧化作用 ,但抑制作用强度不同。

改进竞争性RT-PCR法在定量PER1基因表达中的应用

目的研究使用不同样品稀释液及变性高效液相色谱(DHPLC)梯度条件对定量检测PER1基因表达的影响。方法竞争性RT-PCR与DHPLC结合定量检测基因表达。结果样品稀释液中含有载体可极大提高实验的重复性、准确性;不同DHPLC梯度条件对定量结果无明显影响。结论建立定量PER1基因mRNA表达水平的竞争性RT-PCR系统有助于精确检测微量标本中节律基因表达的变化,探寻生物节律与疾病状态间的关系。

阿尔茨海默病患者皮质额叶基因表达谱研究

目的:通过研究阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)患者皮质额叶中发生差异表达的基因,揭示AD发生、发展的分子基础。方法:利用基因芯片分析3例AD患者皮质额叶中基因表达谱,通过与4例正常对照间的比对,寻找存在表达差异的基因。结果:所检测的5000个基因中,共有49个基因存在着差异表达。在患者中13个基因表达水平升高,36个基因表达水平降低。上述基因与多种生理过程,如氧化应激、胆固醇平衡、钙信号转导、炎症反应等密切相关。结论:AD的发生、发展涉及多种基因表达水平和多个生理过程的改变。

脊髓小脑共济失调1、2、3型的临床表现和基因分型

目的探讨北方地区人群中脊髓小脑共济失调(SCA)3种亚型的发生率以及各型临床表现的特征,并进行基因分型。方法应用PCR方法和琼脂糖凝胶电泳对92例不明原因共济失调先证患者测定其SCA1、SCA2和SCA3基因片段长度。结果在92例患者中共检测出SCA患者21例,占被检测人数的22.8%。其中SCA3型最多,共16例,占17.4%;其次为SCA2型4例,占4.3%;SCA1型只检测出1例,占1.1%。各型间的发病年龄无明显差异。临床表现相互重叠,肌张力障碍、眼动障碍和锥体束征主要见于SCA3。发现1例以帕金森为表现的SCA2型患者。结论通过这次研究,发现SCA1、SCA2、SCA3型在不明原因的共济失调中的发生率为22.8%,其中又以SCA3型为主,确定诊断的最直接最有效的手段是基因诊断。

中国人血中脂类指标的随龄变化

选择513例健康人作为研究对象，根据年龄分为9组，测定其血中脂类指标．结果发现血中胆固醇（CH）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL）在出生时含量较低，以后随增龄而升高；高密度脂蛋白（HDL）在出生时较低，以后逐渐升高．到20岁之前达高峰，以后又逐渐下降，脂蛋白（a）[Lp（a）]自出生后在一生中变化不大，无明显波动；氧化型低密度脂蛋白（ox－LDL）在出生时极低，以后随增龄而升高，到70岁之前达高峰，70岁之后又有下降的趋势．相关分析也发现血CH、TG、LDL、和xo－LDL与年龄之间里明显的正相关，HDL与年纷呈负相关关系，Lp（a）与年龄之间无相关关系．以上结果提示，随着增龄，脂类代谢的变化为动脉粥样梗化的发生提供了更多的物质基础．

利用荧光定量聚合酶链反应检测小鼠纹状体中Per1基因的表达规律

目的建立定量检测Per1 mRNA表达水平的系统,并检测小鼠纹状体中该基因的表达规律。方法提取小鼠纹状体总RNA,用Per1基因特异性引物进行聚合酶链反应(PCR),以荧光染料SYBR green I法进行实时检测。结果确定了Per1基因荧光定量的扩增和检测参数。证明在此条件下无非特异扩增,并且扩增效率在90%以上。利用此检测体系发现小鼠纹状体内Per1基因的表达呈节律性波动。结论所建立的方法能够定量测定Per1 mRNA表达水平,具有灵敏度高,线性范围广的特点。纹状体中Per1基因表达的节律性波动提示黑质纹状体系统间的相互调节可能具有昼夜节律性差异。

脑梗死患者一氧化氮合酶基因多态性及其对一氧化氮的影响

目的观察脑梗死患者内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性及一氧化氮(NO)变化情况。方法采用前瞻性病例对照研究,脑梗死组193例,均为发病2周内经头颅CT或MRI证实存在颈内动脉分布区梗死灶者,对照组103例为正常体检者。对两组eNOS基因4号内含子多态性进行测定,并采用Griess重氮化反应法和酶标法分别检测血清NO含量、NOS活性。结果脑梗死组eNOS基因4号内含子a等位基因(eNOS4a)携带者48例,对照组为12例,携带频率有显著性差异(χ2=8.86,P=0.003);经Logistic回归分析,eNOS4a携带是脑梗死的独立危险因素(P=0.032);脑梗死组NO产物浓度中位数为6.04(3.83～11.49)μmol/L,低于对照组6.89(4.64～12.43)μmol/L(P=0.022)。eNOS4a携带者NO产物浓度中位数为5.07(3.18～7.62)μmol/L,低于非携带者6.86(4.39～11.76)μmol/L(P=0.001)。脑梗死组NOS活性为(2.97±1.47)U/ml,对照组(3.16±1.46)U/ml,无显著性差异(P=0.517)。eNOS4a携带者NOS活性(2.77±1.13)U/ml,与非携带者(3.12±1.54)U/ml无显著性差异(P=0.100)。结论eNOS4a携带可能通过减少NO生成而在脑梗死发生过程中发挥作用。

基因芯片检测灵芝提取物对白细胞中免疫相关基因表达的影响

目的:灵芝对于免疫系统的调节还缺乏严格的临床证据,其关键是缺乏客观、系统评价灵芝对免疫系统调节效果的手段。基于此,采用基因芯片分析检测了灵芝对免疫相关基因表达水平的影响,从而揭示与灵芝功能密切相关的基因和途径。方法:实验于2002-12/2003-05在首都医科大学宣武医院神经分子生物实验室完成。①实验干预:血液材料来源于身体健康的宣武医院医护人员和学生12人,均对检测项目知情同意。平均年龄(31±4)岁,男女各6人。将其分为年龄、性别大致匹配的2组:安慰剂组和灵芝组,每组6人。灵芝组和安慰剂组对象分别服用灵芝胶囊和淀粉胶囊安慰剂,每人每天服用2次,每次2粒(相当于药用灵芝400mg),连续30d。灵芝胶囊主要成分为软壁灵芝孢子粉、灵芝提取物。②实验评估:服药前1天和服药30d后采用自动分析仪计算全血不同种类白细胞计数和不同种类白细胞所占比例。分离白细胞抽提总RNA,利用博星公司的cDNA芯片Biostar-H-IC-I检测了服用灵芝胶囊后白细胞中441个免疫相关基因的表达变化。结果:①所检测的441个免疫相关基因中,共有11个基因存在着差异表达。其中10个基因表达水平升高,1个基因表达水平降低。发生差异表达的11个基因中有2个参与信号转导过程,包括STAT4和LYN。服用灵芝胶囊后两个基因的表达量都显著增加。在发生差异表达的11个基因中有7个基因属于淋巴细胞表面抗原。②服用灵芝胶囊和安慰剂后白细胞总数和不同种类白细胞的百分比均未发生明显变化(P>0.05)。结论:①灵芝对免疫系统的调节功能主要通过调节淋巴细胞的活性而实现,而不是通过改变白细胞数量和分类计数。②STAT4和LYN参与的信号转导途径很有可能是灵芝胶囊作用的主要靶点。

α-突触核蛋白对MES23.5多巴胺能神经细胞的促增殖作用

目的:分析外源性野生型α-突触核蛋白对多巴胺能神经细胞增殖的影响及其分子机制。方法:实验于2005-04/11在北京老年病研究所神经生物室完成。向MES23.5多巴胺能神经细胞的培养基中加入重组人野生型α-突触核蛋白,孵育48h后用细胞免疫荧光标记法和Westernblot分析法检测α-突触核蛋白在细胞内的分布,用MTS法绘制生长曲线观察细胞增殖率,用基因芯片分技术观察α-突触核蛋白处理细胞的基因表达谱变化。结果:重组人野生型α-突触核蛋白可以进入MES23.5多巴胺能神经细胞,并促进其增殖。在α-突触核蛋白处理的细胞,有22个基因的表达发生明显变化,有3个基因与内吞相关,5个与转录有关,3个与蛋白质合成有关,3个与细胞生长和增殖有关,4个与分化有关,1个与增殖及分化均有关,2个与小泡生成和神经递质释放有关,1个与生理周期有关。结论:外源性α-突触核蛋白可能通过内吞作用进入MES23.5多巴胺能神经细胞,从而促进其增殖;α-突触核蛋白的促细胞增殖作用可能与其影响某些基因表达有关。

人类外周血hPer1基因节律性表达的研究

目的生物节律广泛存在于人类生活和工作中,为研究正常人节律基因表达特点,定量检测正常年轻人外周血中节律基因Per1(humanPeriod1,hPer1)的表达。方法实验对象为7名大学生(H1-H7),年龄24￣30岁,男性3名,女性4名。其中H7于实验前1天晚上值夜班。分别在09:00,15:00,21:00,03:00,09:00点抽取肘静脉血6mL,抽提全血总RNA。应用竞争性RT-PCR方法定量检测实验对象外周血中每人每个时间点hPer1基因的表达。结果人类外周血中hPer1基因的表达有显著节律性。表达高峰在09:00而低峰在21:00,两者之间的差异达2.29±0.9倍(P<0.01),第2天09:00hPer1基因表达水平又回到最高峰。结论hPer1基因的表达在外周血中存在节律性。

血单个核白细胞中CD36抗原基因表达的测定方法及其意义

为建立外周血单个核白细胞ＣＤ３６抗原基因表达的测定方法，本文采用反转录聚合酶链反应技术定量测定ＣＤ３６抗原基因的表达，用β－肌动蛋白作为内标物，用凝胶扫描技术进行定量。结果发现，反转录聚合酶链反应后电泳发现ＣＤ３６抗原ｃＤＮＡ片段为３９０碱基对，β－肌动蛋白ｃＤＮＡ片段为５４０碱基对，以ＣＤ３６抗原／β－肌动蛋白表示ＣＤ３６抗原基因表达量是一个稳定的方法，颈动脉粥样硬化病人ＣＤ３６抗原基因表达增加。结果提示，反转录聚合酶链反应是测定ＣＤ３６抗原基因表达的理想方法，可以用于动脉粥样硬化的研究。

氧化修饰低密度脂蛋白与颈动脉粥样硬化程度的关系

目的 观察氧化修饰低密度脂蛋白 (Ox-LDL )与颈动脉粥样硬化 (CAS)程度的关系。方法 通过复式超声确诊 CAS患者 78例 ,并根据 CAS程度将患者分为轻、重两组。对照组 32例。采用硫代巴比妥酸反应物法测定 Ox-LDL含量。结果 CAS组 Ox-L DL含量为 (1.46± 0 .46 ) nmol/ml。 CAS轻组 Ox-LDL含量为 (1.30± 0 .37) nmol/ml。 CAS重组 Ox-L DL含量为 (1.88± 0 .6 0 ) nmol/ml。对照组 Ox-LDL含量为 (0 .39± 0 .2 5 ) nmol/ml。 CAS组 Ox-LDL含量显著高于对照组 (P<0 .0 1)。 CAS重组 Ox-LDL含量显著高于 CAS轻组 (P<0 .0 1)。结论 Ox-LDL 水平可反映 CAS的程度。

颈动脉粥样硬化病人血清免疫修饰低密度脂蛋白的测定及意义

目的观察颈动脉粥样硬化（CAS）病人血清免疫修饰低密度脂蛋白（LDL—IC）含量的变化，说明LDL－IC与动脉粥样硬化（AS）的关系。方法通过复式超声确诊CAS病人78例，用酶联免疫吸附试验测定血清LDL－IC含量。结果CAS组血清LDL-IC含量为47．70士23．04AU；对照组为27．52土11．58AU。两组之间LDL－IC含量存在显著性差异（P<0.001）。结论LDL－IC与AS有密切关系。LDL－IC可反映体内各种化学修饰低密度脂蛋白的总情况。

糖化和糖氧化低密度脂蛋白与糖尿病合并颈动脉粥样硬化的关系

目的 观察糖化低密度脂蛋白 (Gly LDL)和糖氧化低密度脂蛋白 (Gly ox LDL)与非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)合并颈动脉粥样硬化 (AS)的关系。方法 Gly LDL采用微柱亲和层析法。Gly ox LDL采用微柱亲和层析加荧光分光光度法观察。NIDDM合并颈AS者 (病例 1组 ) 30例 ,无糖尿病的颈AS者 (病例 2组 ) 4 8例。对照组 32例。结果 两病例亚组Gly LDL和Gly ox LDL含量显著高于对照组 (P均 <0 .0 5 )。病例 1组Gly LDL和Gly ox LDL含量显著高于病例 2组 (P <0 .0 5 )。结论 Gly LDL和Gly ox LDL在颈AS中起重要作用 ,尤其在糖尿病病人颈AS形成中起重要作用。