香蕉miR164-NAC调控模块的鉴定与分析

【目的】了解香蕉MIR164和NAC基因家族以及miR164-NAC调控模块在香蕉后熟和低温胁迫应答过程中扮演的角色,为其在香蕉品种改良和分子育种方面的研究提供理论基础。【方法】以‘巴西蕉’为试材,通过高通量测序结合生物信息学分析,利用miRBase、NCBI数据库以及Clustal、TBtools、MCScanX、iTOL等软件对香蕉miR164和NAC家族成员的染色体定位、结构、理化性质及系统发育关系等进行分析。通过降解组测序验证并结合转录组数据,明确了香蕉中多个miR164-NAC调控模块。分别设置后熟和低温实验,利用小分子RNA杂交和qRT-PCR分析miR164-NAC调控模块在香蕉后熟和冷害两种过程中的表达模式。【结果】在香蕉中共鉴定出6个miR164家族成员,其中4个位于编码基因内部、2个位于基因间区。系统进化分析发现,测序丰度较高的多条香蕉MIR164s基因前体均与番木瓜聚为一类,暗示香蕉MIR164基因家族的起源与双子叶植物更为接近。香蕉基因组共编码222个NACs成员,不均匀分布在所有11条染色体上。在香蕉NACs中共鉴定出134对同源基因,包括4对串联重复基因和130对区段复制重复基因,表明香蕉NACs基因进化的主要动力来源于区段复制事件。针对香蕉、拟南芥和水稻NACs蛋白比较系统发育的分析,将该家族划分为23个亚群,结合转录组数据证实香蕉NACs基因存在广泛的冗余性和表达特异性。理化分析结果表明,几乎所有香蕉NACs蛋白均为亲水性,且仅有不到15%属于稳定蛋白。验证了香蕉中miR164-NAC176/165调控模块,香蕉miR164的积累受乙烯诱导且随果实后熟逐渐增强,而该调控模块中受miR164负调控的MaNAC176/165基因在果实后熟过程中的表达量逐渐降低。冷害条件下,香蕉miR164同样被明显诱导,导致其靶向的MaNAC176和MaNAC165也出现不同程度的下调表达。【结论】MaNAC176和MaNAC165很可能是香蕉后熟的转录抑制子,而miR164通过负调控MaNAC176/165促进香蕉后熟。同时,这一模块也很可能是香蕉发生冷害的一个关键调控通路。确定了香蕉后熟和冷害响应的关键miR164-NAC候选模块,可为后续的克隆及功能分析奠定基础。

溪黄草常压回流提取物与减压回流提取物抗氧化性的比较

本文对比了常压回流提取法与减压提取法得到的溪黄草不同溶剂提取物总酚,黄酮,单宁提取率及抗氧化性强弱。实验结果表明:溪黄草提取物抗氧化性及总酚、黄酮、单宁提取率均受提取溶剂极性影响。在相同溶剂提取条件下,溪黄草提取物抗氧化性及总酚、黄酮、单宁提取率均受不同提取方法影响。常压回流提取物的抗氧化性高于减压回流提取物的抗氧化性。溪黄草中除总酚、黄酮、单宁外,还有其他物质会对抗氧化性有贡献。料液比的恒定及提取溶剂的选择是溪黄草有效成分提取的关键所在。高温不仅不会破坏溪黄草有效成分,还能增强有效成分的溶出。

不同提取方法对龙眼多糖性质的影响

以龙眼为原料,利用水提法、酶提法、碱提法、酸提法、超声法五种方法来提取龙眼多糖,研究不同提取方法下龙眼多糖的提取率、还原力、DPPH.清除率、单糖组成等的区别,比较五种提取工艺的优缺点。实验结果表明,五种提取方法相比较,酶提法得率最高,达到6.78%,碱提法得率最低,为1.84%。酶提法得到的龙眼多糖抗氧化性最好,超声法所得多糖的活性次之,而碱提多糖的抗氧化活性最差。

不同提取方法对龙须菜多糖性质的影响

本文以龙须菜为原料,比较了热水、超声、超声协同热水和柠檬酸提取4种方法所得多糖的性质。研究表明:柠檬酸提取所得多糖的得率最高,为17.81±0.34%,其多糖分子量和粘度较低,多糖分子量的均一性较高。抗氧化实验表明,柠檬酸提龙须菜多糖具有较高的抗氧化性,其氧自由基清除能力(ORAC)值可达298.735±6.57μmol Trolox/g,在多糖浓度为2.0 mg/m L时,DPPH自由基清除率可达65.79±0.3%,还原力为0.765±0.01,均显著高于其他方法所提多糖。柠檬酸提多糖能够有效地抑制α-淀粉酶的活性。相关性分析表明,龙须菜多糖的多糖含量及糖醛酸含量与抗氧化、α-淀粉酶抑制活性之间呈正相关,而硫酸基含量、分子量、PDI值和粘度与抗氧化、α-淀粉酶抑制活性之间呈负相关。因此,柠檬酸提取是一种有效的提取龙须菜多糖的方法。该法能有效地提高多糖得率,增加产物中糖醛酸含量,降低硫酸基含量、分子量及其粘度,并提高多糖分子量的相对均一性。

龙须菜多糖的提取及其免疫调节活性研究

本文采用水提法、酸提法和酶提法提取龙须菜多糖,比较了不同方法对提取率的影响,并测定了酸提法制备的龙须菜多糖的化学组成及免疫活性。结果发现:采用柠檬酸提取龙须菜多糖的提取率最高,为27.66±0.49%,为水提法的1.86倍;其产物多糖的总糖含量、蛋白质含量、糖醛酸含量以及硫酸基含量分别为62.24±1.09%、1.54±0.15%、6.25±0.72%和16.74±0.11%,未检出多酚类物质。此外,龙须菜多糖对RAW 264.7细胞具有显著的促增殖作用,并且能够显著地提高RAW 264.7细胞吞噬中性红的能力;且龙须菜多糖不仅能够提高光老化小鼠的胸腺指数和脾脏指数,还能降低小鼠血清白介素-10的含量,提高小鼠血清肿瘤坏死因子-α的含量,这些研究表明龙须菜多糖具有较强的提高小鼠免疫功能的能力,能够缓解光老化过程中的免疫抑制现象。

不同品种山楂活性成分及其抗氧化活性的研究

本文以产自山东地区的山里红和大金星这两个常见山楂品种作为研究对象,山楂冻干制成粉末后测定它们的总酚、总黄酮含量及抗氧化活性(DPPH、ORAC和PSC),并采用HPLC分析抗氧化活性成分的差异。结果显示不同品种山楂中的总酚和总黄酮含量各异,其中山里红果实的总酚(61.91 mg GA equiv./g DW)和总黄酮(55.96 mg catechin equiv./g DW)含量均显著高于大金星。山楂果实提取物均有较好的抗氧化活性,其中山里红品种表现出更好的抗氧化活性,其ORAC及PSC值分别是大金星的1.54和2倍。山楂果实提取液经HPLC法分析,鉴定出7种多酚类化学成分,最主要的酚类化合物为原花青素B2以及表儿茶素,且山里红果实多酚类化合物的含量显著高于大金星。综合比较发现山楂中的活性成分含量及种类各异,且山里红的抗氧化活性较强,是天然抗氧化剂的潜在原料。