小鼠烧伤后时序芯片数据分析及免疫标志物的初步筛选

目的:从基因转录水平探讨烧伤早期免疫系统功能变化情况,并筛选烧伤后免疫相关标志物,为临床诊疗提供新思路.方法:GEO数据库下载GSE7404数据集(小鼠,25%TBSA,3度),共获得32例基因表达谱数据.应用配对样本t检验和倍比法(fold-change,FC)筛选差异表达基因(P-value<0.01和|lg FC|>1).分别利用DAVID数据库和STRING数据库进行生物学过程功能富集分析及构建免疫相关蛋白互作网络.互作网络的模块及可视化分析应用Cytoscape软件进行,并用BINGO插件进行模块功能分析.结果:在烧伤后第1 d的基因表达谱的变化最显著,共1 825个差异基因被选出,其中上调基因658个,下调基因1 167个.功能富集分析显示刺激反应和免疫系统过程等生物学功能贯穿整个烧伤早期.蛋白互作网络分析表明LCK、CCR2、TLR2和My D88等免疫相关基因可能在烧伤早期免疫功能变化过程中起着重要的作用.结论:利用生物信息学方法,分析烧伤后时序基因芯片数据,可以有效地揭示烧伤后免疫系统潜在的分子机制,可以为早期诊断和治疗靶点的筛选提供新的思路.

负压封闭引流联合含氧液冲洗对下肢慢性静脉性溃疡患者创面的影响

目的评估VSD联合含氧液冲洗对下肢慢性静脉性溃疡（CVLU）患者创而肉芽组织生长及巨噬细胞活化的影响。方法2010年12月一2014年7月，将笔者单位收治的34例CVLU患者，按随机数字表法分为单纯VSD组（简称A组）11例、VSD＋生理盐水组（简称B组）11例、VSD＋含氧液组（简称C组）12例。入院后清创，术中留取创面中心肉芽组织标本，术后A组仅行VSD治疗（负压值为－30～－25kPa，下同），B组采用VSD联合生理盐水冲洗，C组采用VSD联合含氧生理盐水（含氧液）冲洗（氧流量1L／min）。冶疗7d，去除VSD装置。清创前及治疗7d行创面大体观察、治疗7d，计算创面肉芽组织覆盖率，并取创面中心肉芽组织标本以HE染色、Masson染色后行组织病理学观察。清创后VSD治疗前（以下简称治疗前）及治疗7d，用经皮氧分压测定仪检测创周皮肤局部氧分压。治疗7d，取创面肉芽组织用免疫组织化学染色法检测血管内皮生长因子（VEGF）表达。治疗前及治疗7d，取创面肉芽组织行免疫荧光染色观察CD68与诱导型一氧化氮合酶双阳性（I型巨噬细胞）、CD68与精氨酸酶1双阳性（Ⅱ型巨噬细胞）细胞许计数。对数据行Fisher确切概率法检验、单因素方差分析、协方差分析、配对t检验、LSD检验。结果（1）大体观察示，清创前3组患者创面均存在坏死组织，肉芽组织较少。治疗7d，3组患者创而均出现新生肉芽组织，且C组创而新生肉芽组织最多。（2）治疗7d，C组患者创面肉芽组织覆盖率高于A、B组（P〈0．05或P〈0．01）、（3）治疗7d，HE染色示C组患者创面新生毛细血管和Fb较A、B组更丰富；Masson染色示C组患并创面新生胶原较A、B组更丰富，且分布均匀。（4）治疗7d，C组患者创删皮肤局部氧分压为（40．7±4．1）nunHg（1mmHg=0．133kPa），高于A组的（35．0±3．1）mmHg和B组的（35．4±2．7）mmHg（P值均小于0．01），且3组均较治疗前升高（t值为10．38～22．52，P值均小于0．01）。（5）治疗7d，C组患者创面肉芽组织的VECF表达高于A、B组（P〈0．05或P〈0．01）。（6）治疗7d，A、B、C组患者创面肉芽组织I型巨噬细胞计数分别为每400倍视野下（14．3±2．3）、（11．5±3．0）、（10．7±2．3）个（F=25．14，P〈0．01），其叶Ic组低于A、B组（P〈0．05或P〈0．01），且3组均较治疗前降低（t值为14．76～23．73．P值均小于0．01）。治疗7d，A、B、C组患者创面肉芽组织Ⅱ型巨噬细胞计数分别为每400倍视野下（32．7±3．2）、（35．1±3．3）、（41．3±3．2）个（F=81．10，P〈0．01），其中C组高于A、B组（P值均小于O．01），且3组均较治疗前升高（t值为－69．34～－47．95，P值均小于0．01）。结论VSD联合禽氧液冲洗可有效提高CVLU患者创面局部氧分压，促进创面肉芽组织中臣噬细胞从以Ⅰ型为主转向以Ⅱ型为主，利于肉芽组织生长，从而改善创基条件。

负压封闭引流联合含氧液冲洗修复糖尿病患者慢性创面的效果观察

目的评估VSD联合含氧液冲洗治疗糖尿病患者慢性创面的效果。方法2010年9月-2013年6月，将南方医科大学南方医院收治的符合纳入标准的26例糖尿病下肢慢性溃疡患者，按随机数字表法分为单纯VSD组8例、VSD＋冲洗对照组9例、VSD＋含氧液冲洗组9例。入院后行大体观察、取刨面分泌物行细菌培养后清创，术中留取创面肉芽组织用ELISA法检测乳酸脱氢酶（LDH）和琥珀酸脱氢酶（SDH）活性。术后单纯VSD组仅行VSD治疗（负压为-30--25kPa，下同），VSD＋冲洗对照组行VSD联合生理盐水冲洗治疗，VSD＋含氧液冲洗组行VSD联合含氧液（纯氧流量为1 L／min）冲洗治疗。治疗过程中记录引流管堵塞率。治疗7d后，抽取组织渗出液采用血气分析仪检测组织液氧分压；撤除VSD装置，同前行细菌培养计算细菌清除率；计算肉芽组织覆盖率后蹦取创丽中心肉芽组织，HE染色行组织病理学观察，透射电镜观察肉芽组织线粒体密度与形态，同前检测LDH和SDH活性，CD3l染色计数微血管密度（MVD）。之后行Ⅱ期手术，记录Ⅱ期手术方式及移植皮片或皮瓣成活率。对数据进行单因素方差分析、LSD-t检验、秩和检验或行Fisher确切概率法分析。结果（1）大体观察显示，清创前3组患者创面均有坏死组织存在，无肉芽组织。治疗7d，3组患肯创面均出现新生肉芽组织。HE染色显示VSD＋含氧液冲洗组创面肉芽组织内有较多新生毛细血管，Fb密集分布；VSD＋冲洗对照组肉芽组织新生毛细皿管较VSD＋含氧液冲洗组少，Fb分布较稀疏；单纯VSD组肉芽组织新生毛细血管和Fb稀疏。（2）3组间引流管堵塞率、肉芽组织覆盖率、细菌清除率总体比较均有明显差异（F值为10．98～770．24，P值均小于0．01）。VSD＋冲洗对照组和VSD＋含氧液冲洗组引流管堵塞率分别为（2．0±0．4）％和（1．9±0．6）％，均明显低于单纯VSI）组的（16．0±1．3）％（t值分别为28．77和29．20，P值均小于0．01）。（3）治疗7d后，VSD＋含氧液冲洗组、VSD＋冲洗对照组、单纯VSD组创面局部组织液氧分压分别为（111±4）、（43±4）、（40±4）mmHg（1mmHg=0．133kPa，F=882．76，P〈0．01）。（4）VSD＋含氧液冲洗组肉芽组织线粒体密度明湿大于另外2组，且形状圆滑，外膜完整，无空泡化改变。（5）清创术中，3组患者创面肉芽组织LDH、SDH活性总体比较无明湿差异（F值分别为0．80、1．03，P值均大于0．05）。治疗7d，VSD＋含氧液冲洗组创面肉芽组织LDH活性为（103±15）U／L，低于VSD＋冲洗对照组的（136±16）U／L（t=4．49，P〈0．01），VSD＋冲洗对照组LDH活性低于单纯VSD组[（155±16）U／L，t=2．47，P〈0．05]；VSD＋含氧液冲洗组创面肉芽组织SDH活性为（2．93±0．27）U／L，高于VSD＋冲洗对照组的（1．77±0．22）U／L和单纯VSD组的（1．61±0．19）U／L，t值分别为10．21和11．65，P值均小于0．01。（6）治疗7d，VSD＋含氧液冲洗组创面组织CD31阳性表达比另外2组丰富。单纯VSD组、VSD＋冲洗对照组、VSD＋含氧液冲洗组MVD分别为每400倍视野下（109±5）、（124±5）、（141±6）个（F=68．78，P〈0．01）。（7）3组患者Ⅱ期手术以皮片和皮瓣移植为主。VSD＋含氧液冲洗组皮片和皮瓣成活率均高于单纯VSD组与VSD＋冲洗对照组（t值为3．32～8．26，P〈0．05或P〈0．01），且VSD＋冲洗对照组高于单纯VSD组（t值分别为2．67、3．18，P值均小于O．05）。结论VSD联合含氧液冲洗可有效减少VSD引流管堵塞率，清除创面坏死组织和细菌，纠正创面组织的缺血缺氧，为修复提供新鲜“创面床”，提高移植皮片或皮瓣成活率。

Lando（R）双层人工皮对猪皮肤全层缺损创面血管化的影响

目的 动态观察Lando^（R）双层人工皮（以下简称双层人工皮）应用于猪皮肤全层缺损创面血管化.方法 实验以8头一级藏猪为动物模型,体质量为30 ～ 35 kg,雌雄不限,在每头猪背部正中线两侧分别切取3个边长5 cm深达肌肉筋膜的正方形全层皮肤缺损创面,采用同体自身对照,右侧创面行双层人工皮移植术（实验组）,左侧创面以凡士林油纱覆盖（对照组）.分别于术后第3、7、14、21天按随机数字表随机处死猪,行创面大体观察,同时取材行苏木素-伊红（HE）染色、Masson三色染色后光镜下观察创面修复细胞、炎性反应、胶原纤维排列及支架降解情况,免疫组织化学法检测标本中CD31的表达并计数新生血管数目.结果 实验组创面较对照组干燥,感染发生率较低,肉芽组织生长较平整.光镜下见实验组较对照组组织充血水肿和炎性反应轻微,肉芽组织化速度快,于14d左右支架血管化已基本完成.随时间的延长,修复细胞逐渐减少,胶原纤维排列更为规整且粗大,支架有降解趋势.免疫组织化学结果显示,CD31表达阳性的新生血管数目两组于术后第3天无明显表达,于第7天开始升高,实验组于术后第14天达到高峰,对照组于第21天达到最高.实验组于术后第7、14天高于对照组,于21 d低于对照组,组间差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 双层人工皮在创面愈合过程中可快速诱导血管生成,有利于新生真皮组织的重塑,从而改善创面愈合条件,为后续联合移植自体超薄皮片奠定基础.

臀部反复复发化脓性汗腺炎慢性创面序贯治疗的临床疗效观察

目的观察病灶广泛切除—负压封闭引流(VSD)联合含氧液冲洗—组织移植序贯治疗臀部多次术后仍反复发作化脓性汗腺炎(HS)慢性创面的临床疗效。方法2012年1月—2017年3月,笔者单位烧伤科收治符合入选标准的Hurley Ⅲ级且经2~5次手术仍反复发作的臀部HS男性患者15例(年龄26~53岁),对其进行前瞻性自身前后对照研究。先行病灶广泛切除,术后给予持续VSD联合间断含氧液冲洗,负压为-16.7 kPa,纯氧流量为1.0 L/min。VSD联合含氧液冲洗治疗7 d后拆除负压装置,行自体大腿后侧中厚皮片和/或局部皮瓣移植以修复创面,其中6例患者创面行中厚皮片移植,4例行局部皮瓣移植,5例行中厚皮片+局部皮瓣移植。局部皮瓣供瓣区直接缝合或移植自体大腿后侧中厚皮,中厚皮供皮区移植自体头部刃厚皮修复。于病灶切除前及VSD联合含氧液冲洗治疗7 d后留取创面组织或创基肉芽组织,行组织细菌培养,并采用酶联免疫吸附测定法检测组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。观察术后皮片和皮瓣成活情况,记录住院时间,随访观察HS复发情况及并发症情况。对数据行配对样本t检验。结果本组患者病灶切除前创面组织细菌培养结果均为阳性,主要为葡萄球菌、链球菌、奇异变形杆菌和厌氧菌等;VSD联合含氧液冲洗治疗7 d后创面肉芽组织细菌培养结果均为阴性。本组患者VSD联合含氧液冲洗治疗7 d后创基肉芽组织TNF-α含量为(10.1±2.9)pg/L,较病灶切除前的(73.6±5.6)pg/L降低(t=33.47,P<0.01)。15例患者术后皮片和/或皮瓣移植均成活,创面愈合,住院17~31 d。随访1~5年,15例患者臀部手术部位HS均无复发;有1例患者术后因出现高位肛瘘致肛周愈合切口溃破,经治疗愈合。结论病灶广泛切除—VSD联合含氧液冲洗—组织移植的序贯治疗可较彻底清除臀部HS病灶、改善清创后创基受皮条件,从而有利于治愈临床历经多次手术但术后仍反复发作的臀部HS。