天灸疗法对支气管哮喘患儿TGF-β/Smads信号通路影响

目的:探讨天灸疗法防治小儿支气管哮喘的作用机制。方法:通过对支气管哮喘缓解期患儿进行天灸疗法治疗,采用流式细胞仪检测天灸组和西药组治疗前后TGF-β1、Smads3蛋白表达水平。结果:天灸疗法能够显著降低支气管哮喘患儿TGF-β1、Smads3的表达,与治疗前相比具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:天灸疗法可能通过对支气管哮喘患儿TGF-β/Smads信号通路的调节从而降低哮喘的反复发作率和改善哮喘患儿远期预后。

一种红细胞膜脂肪酸甲酯化的改良方法

[目的]建立一种红细胞膜脂肪酸甲酯化的改良方法。[方法]收集健康体检人员的血液,分别采用传统方法和改良方法对其红细胞膜脂肪酸进行甲酯化处理,用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)进行分析。[结果]两种方法都检测出相同种类的15种脂肪酸。改良方法检测的饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸的绝对含量明显高于传统方法,对单不饱和脂肪酸绝对含量的测定,2者差异无统计学意义。两种方法测得的脂肪酸相对含量差异无统计学意义;重现性试验,各脂肪酸的CV均小于20%。改良方法所测得脂肪酸回收率为87.8%～110.7%。[结论]改良方法红细胞膜脂肪酸抽提较传统方法简单,保证了长链脂肪酸的鉴定,实验精密度和准确度较高,适用于临床上大样本量血液脂肪酸的检测。

高效液相色谱法测定人血浆中伏立康唑的浓度

目的:建立测定人血浆中伏立康唑浓度的方法。方法:血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,以酮康唑为内标,采用高效液相色谱法测定。色谱柱为Dionex U-3000 Dimonsil C18,流动相为三乙胺-冰醋酸-水混合溶液(1∶1∶98,V/V/V,p H约为4.0)-乙腈(40∶60,V/V),流速为1.0 m L/min,检测波长为255 nm,柱温为40℃,进样量为20μL。结果:伏立康唑血药浓度在0.2~20.0μg/m L范围内线性关系良好,定量下限为0.2μg/m L,最低检测限为0.03μg/m L;日内、日间RSD均小于10%;方法回收率为92.06%~106.26%(RSD<5%,n=5),提取回收率为75.62%~90.59%(RSD<5%,n=5)。采用该法测得10例患儿体内伏立康唑的血药浓度为0.22~4.90μg/m L(n=10)。结论:该方法简单、快速、专属性强,可用于伏立康唑治疗药物监测。

27例citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症尿筛查分析

目的探讨citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency,NICCD)患儿尿液成分改变特点。方法应用气相色谱质谱法对27例NICCD患儿尿液半乳糖和酪氨酸及其两者代谢产物进行定性、定量分析。结果 27例中13例患儿有半乳糖合并酪氨酸代谢异常,8例患儿只表现为半乳糖代谢异常,1例患儿仅表现为丝苏氨酸比例倒置,5例患儿尿筛查未发现异常。结论①应用气相色谱质谱法分析NICCD患儿尿液成分有助了解患儿机体代谢情况,对疾病的诊断和治疗有重要的意义。②NICCD患儿常伴有半乳糖及酪氨酸代谢异常。

AFP值监测在Citrin缺陷症诊断中的意义与价值

目的探讨AFP值监测对Citrin缺陷症诊断的意义,提高对Citrin缺陷症的认识。方法分析2007～2010年我院基因确诊的Citrin缺陷症14例病儿血清AFP值情况。同时留取新生儿病房患儿血清进行黄疸指数及AFP测定,回顾患儿临床资料分组,分析病理性黄疸与AFP值的关系。结果①Citrin缺陷症患儿中血清AFP明显增高的占71.4%;②有病理性黄疸的患儿血清AFP值较高;而黄疸新生儿中血清AFP值较高的患儿,黄疸恢复较慢。结论病理性黄疸患儿血清AFP值异常增高,应警惕Citrin缺陷症可能。

n-3多不饱和脂肪酸与代谢综合征的研究进展

代谢综合征是一组严重影响人类健康的症候群,与2型糖尿病、冠心病和其他动脉粥样硬化性血管病密切相关。n-3多不饱和脂肪酸由于其独特的生理和生化作用,能够改善代谢综合征的多种代谢异常情况,从而改善和提高人们的生活质量。

深圳地区哮喘患儿HLA-DRB1、DQB1基因表达与天灸疗法疗效相关性研究

目的:探讨深圳地区哮喘患儿HLA-DRB1、DQB1基因表达与天灸疗法疗效是否具有相关性。方法:使用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法,对20例哮喘患儿和5例正常对照者进行HLA-DRB1、HLA-DQB1等位基因分型及分布,以天灸疗法对哮喘患儿进行治疗,分析天灸疗法的疗效与哮喘患儿HLADRB1、DQB1基因表达是否具有相关性。结果:深圳地区哮喘患儿HLA-DRB1*0901和DQB1*0301等位基因频率出现最高,而对哮喘患儿天灸前后外周血总Ig E测定结果显示,天灸疗法能显著降低哮喘患儿外周血总Ig E,其疗效与HLA-Ⅱ类基因等位基因分型无明显相关性。结论:HLA-DRB1*0901和DQB1*0301可能是深圳地区哮喘患儿的易感基因,而天灸疗法的疗效与等位基因无明显相关性。

急性期川崎病γ干扰素组蛋白乙酰化改变及意义初探

目的探讨急性期川崎病（KD）患儿IFN-γ组蛋白乙酰化改变及其在KD免疫发病机制中的作用。方法以2015年2月至2016年6月深圳市儿童医院诊断并住院治疗的KD患儿为KD组,经IVIG治疗后为KD-IVIG组,KD组依冠状动脉有无损伤分为冠状动脉损伤（KD-CAL＋）亚组和无冠状动脉损伤（KD-CAL-）亚组,于IVIG治疗前、后取血备检;同期体检的健康儿童为对照组。采用染色质免疫共沉淀法检测外周血CD4^＋T细胞IFN-γ组蛋白H3乙酰化水平及组蛋白乙酰化酶p300和去乙酰化酶HDAC1/2结合水平;流式细胞术检测外周血CD4^＋IFN-γ＋细胞（Th1）比例及IFN-γ、p STAT4、p STAT5和T-bet蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测CD4^＋T细胞IFN-γ、IL-2Rα/β、IL-12Rβ1/2、IL-18Rα/β和ITLR4m RNA表达;ELISA检测外周血浆中IL-12、IL-2和IL-18浓度。结果 ①KD患儿38例（男20例）,年龄1-5.2岁;KD-CAL＋亚组16例,KD-CAL-亚组22例。对照组32例（男17例）,年龄1.2-4.9岁。KD组和对照组年龄、性别差异无统计学意义。②急性期KD患儿Th1细胞比例、IFN-γm RNA和蛋白表达及其组蛋白乙酰化水平显著高于对照组（P〈0.05）,且KDCAL＋亚组高于KD-CAL-亚组（P〈0.05）,经IVIG治疗后明显恢复（P〈0.05）。③急性期KD患儿CD4^＋T细胞IFN-γ组蛋白乙酰化酶p300结合水平显著增加（P〈0.05）,HDAC1/2结合水平明显降低（P〈0.05）,p300/HDAC1/2明显高于对照组且与IFN-γ组蛋白H3乙酰化水平呈正相关（r=0.52;P〈0.05）,经IVIG治疗后均有所恢复（P〈0.05）。其中KD-CAL＋亚组p300结合水平及p300/HDAC1/2比值均高于KD-CAL-亚组（P〈0.05）,而HDAC1/2结合水平则低于后者（P〈0.05）。④急性期KD患儿血浆IL-2、IL-12和IL-18浓度显著增高（P〈0.05）,CD4^＋T细胞表面受体IL-2Rα/β、IL-12Rβ1/2、IL-18Rα/β和TLR4及其下游信号分子p STAT5、p STAT4、T-bet和My D88表达明显上调（P〈0.05）,且KD-CAL＋亚组前述各项均高于KDCAL-亚组（P〈0.05）,经IVIG治疗后均有不同程度恢复（P〈0.05）。结论 IFN-γ组蛋白过度乙酰化可能是导致急性期KD患儿免疫功能紊乱的重要因素之一。

IFN-α/STAT1/STAT3信号在急性期川崎病PB/Breg细胞分化失衡机制中的作用及意义

目的探讨急性期川崎病(KD)患儿α-干扰素(IFN-α)/信号传导及转录活化因子1(STAT1)/信号传导及转录活化因子3(STAT3)信号改变及其在浆母细胞(PB)/调节性B细胞(Breg)分化失衡机制中的作用。方法选取2019年3月至2020年10月深圳市儿童医院接收诊治的38例KD患儿为研究对象,分别于静脉输注丙种球蛋白(IVIG)前(KD组)、后(KD^(IVIG)组)直接取血备检,并根据心脏超声结果将KD组患儿分为合并冠状动脉损伤组(CAL亚组)和无冠状动脉损伤组(NCAL亚组),28例同年龄健康儿童作为对照组(Ctrl组)。采用流式细胞术检测外周血CD19^(+)CD24-CD38^(hi)PB、CD19^(+)CD24^(+)CD38^(hi)Breg细胞比例及CD19^(+)B细胞白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)、细胞分化抗原40(CD40)、磷酸化的STAT1(pSTAT1)、磷酸化的STAT3(pSTAT3)表达水平;实时荧光定量PCR检测CD19^(+)B细胞B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(Blimp-1)、干扰素调节因子4(IRF-4)、α/β-干扰素受体亚基1(IFNAR1)、α/β-干扰素受体亚基2(IFNAR2)、肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)、细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)、细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)mRNA表达;ELISA检测外周血浆IFN-α浓度。采用Pearson相关性分析SOCS1与pSTAT1、SOCS3与pSTAT3表达水平之间的相关性。结果(1)与Ctrl组相比,KD组外周血PB细胞比例及转录因子Blimp-1、IRF4表达水平显著增高,Breg细胞比例及IL-10表达水平明显降低,其中CAL亚组前三项指标高于NCAL亚组、后二项指标低于NCAL亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经IVIG治疗后,KD^(IVIG)组PB细胞比例及Blimp-1、IRF4表达水平低于KD组,Breg细胞比例及IL-10表达水平高于KD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)KD组血浆IFN-α浓度、CD19^(+)B细胞表面受体CD40、IFNAR1、IFNAR2及下游信号相关分子TRAF3、pSTAT1、IL-6、TNF-α表达水平明显高于Ctrl组,pSTAT3表达水平低于Ctrl组,其中CAL亚组前八项指标高于NCAL亚组、pSTAT3表达水平低于NCAL亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经IVIG治疗后,KD^(IVIG)组血浆IFN-α浓度及CD19^(+)B细胞CD40、IFNAR1、IFNAR2、TRAF3、pSTAT1、IL-6、TNF-α表达水平低于KD组,pSTAT3表达水平高于KD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与Ctrl组相比,KD组外周血B细胞SOCS1、SOCS3表达水平显著增高,其中CAL亚组SOCS3表达高于NCAL亚组、SOCS1表达低于NCAL亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经IVIG治疗后,KD^(IVIG)组外周血B细胞SOCS1、SOCS3表达水平低于KD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,KD组SOCS1与pSTAT1表达、SOCS3与pSTAT3表达均呈负相关(r=0.67、0.52,P<0.05)。结论IFN-α/STAT1/STAT3信号异常可能是急性期KD患儿PB/Breg细胞分化失衡的重要原因。

原发性肉碱缺乏症临床和基因突变特点及1例产前诊断研究

目的探讨原发性肉碱缺乏症的临床特点、基因突变及产前基因诊断。方法回顾分析8例原发性肉碱缺乏症患儿的临床资料、基因突变分析结果,以及1例患儿母亲再次妊娠羊水细胞产前基因诊断结果。结果6例男性、2例女性患儿,发病年龄5个月~3岁,以呕吐、腹泻、抽搐、意识障碍等就诊。血浆游离肉碱均降低(0.67~4.184μmol/L),血红蛋白均偏低(67~110 g/L)。6例患儿存在不同程度肝功能和心肌酶异常,6例血氨升高,2例血糖降低。心脏彩超示心肌病4例。心电图异常2例。SLC22A5基因共检出6种突变,分别为c.760 C>T(p.Arg 254 X)、c.1400 C>G(p.Ser 467 Cys)c.844 dupC(p.R 282 PfsX 10)、IVS 2+1 G>T、c.3 G>T(p.Met 1 Ile)、c.338 G>A(p.Cys 113 Tyr)。1例患儿染色体微阵列分析显示5 q 23.3 q 31.3区域存在大片段杂合性缺失。1例患儿母亲再次妊娠18周时的羊水细胞检出c.760 C>T杂合突变,提示胎儿为携带者,出生后外周血SLC22A5基因存在一个c.760 C>T杂合突变位点,血浆游离肉碱浓度无异常。除1例患儿猝死外,其余7例经左卡尼汀治疗有效,随访中。结论原发性肉碱缺乏症患儿起病急,心肌、肝脏损伤尤为突出,左卡尼汀治疗效果肯定。SLC22A5基因分析可作为确诊和产前诊断的依据。

急性期川崎病IL-4基因组蛋白甲基化的改变及意义

目的探讨急性期川崎病(KD)患儿IL-4基因组蛋白甲基化改变及其在KD Th2细胞异常机制中的作用。方法 KD患儿急性期及IVIG治疗4~5 d后取血备检,同年龄健康儿童为对照组。采用流式细胞术检测外周血Th2比例及CD4^+ T细胞IL-4、pSTAT6和GATA3蛋白水平;染色质免疫共沉淀分析外周血CD4^+ T细胞IL-4基因CNS1、HSⅡ、HSVa组蛋白甲基化H3K4me3及GATA3、MLL1结合水平;荧光定量PCR分析CD4^+ T细胞IL-4、IL-5、IL-13、IL-4Rα、IL-2Rγ、SOCS5 mRNA水平;双抗体夹心ELISA检测血浆细胞因子IL-4、IL-5和IL-13蛋白浓度。结果 KD组42例,对照组36例。①KD患儿急性期Th2细胞比例,功能相关分子(IL-4、IL-5和IL-13)mRNA表达,血浆蛋白水平,IL-4基因CNS1、HSⅡ、HSVa位点组蛋白甲基化H3K4me3修饰水平均明显增加(P<0.05),且冠状动脉损伤组(CAL)前述指标均高于无冠状动脉损伤组(NCAL)(P<0.05),经IVIG治疗后明显降低(P<0.05);②KD患儿急性期外周血CD4^+ T细胞转录因子GATA-3、组蛋白甲基化酶MLL1与IL-4基因CNS1、HSⅡ、HSVa结合水平显著增高(P<0.05),且MLL1与IL-4基因CNS1、HSⅡ、HSVa结合水平与IL-4 mRNA表达显著正相关(r分别为0.42、0.33和0.39,P均<0.05),经IVIG治疗后均表现不同水平的恢复(P<0.05)。其中CAL组MLL1、GATA-3与IL-4基因CNS1、HSⅡ、HSVa结合水平明显高于NCAL组(P<0.05);③KD患儿急性期血浆IL-4浓度和CD4^+ T细胞IL-4Rα、IL-2Rγ、pSTAT6、GATA-3、SOCS5表达显著增高(P<0.05),其中CAL组血浆IL-4浓度和CD4+T细胞IL-4Rα、IL-2Rγ、pSTAT6、GATA3表达均高于NCAL组、SOCS5表达低于NCAL组(P<0.05),经IVIG治疗后均表现不同水平的下调(P<0.05)。结论 IL-4基因组蛋白甲基化修饰异常可能是导致KD患儿急性期Th2细胞异常的始动因素之一。

Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症SLC25A13基因分析

目的 Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)是一种由SLC25A13基因突变引起的常染色体隐性遗传病,临床可表现为肝内胆汁淤积性黄疸、低出生体重、生长迟缓和低蛋白血症等。本研究通过DNA测序技术探讨中国NICCD患儿SLC25A13基因突变类型。方法针对SLC25A13基因的18个外显子及其侧翼区碱基序列设计引物,应用PCR技术扩增目的片度。PCR扩增、纯化后直接测序,确定其突变类型。IVS16ins3kb突变则采用巢式PCR和RT-PCR进行检测。结果发现7种SLC25A13基因突变类型,包括851del4、1638ins23、IVS16ins3kb、IVS6+5G>A、c.775C>T(p.Q259X)、c.1505C>T(p.P502L)和c.1311C>T(p.C437C);并确认一种复合突变类型[1638ins23+IVS16ins3kb]。其中c.775C>T(p.Q259X)、c.1505C>T(p.P502L)和c.1311C>T(p.C437C)为新发现的基因突变类型。在20例NICCD患儿中,6例为851del4纯合突变,7例为杂合突变,另有7例为单一突变类型的杂合子。突变类型以851del4为主,占所有突变类型的64%;其次为1638ins23、IVS16ins3kb和IVS6+5G>A(分别占15%、12%和6%)。结论 851del4突变在NICCD患儿中最为常见。

瓜氨酸血症患儿ASS1、ASL和SLC25A13基因的突变分析

目的探讨4例瓜氨酸血症患者相关致病基因突变类型。方法提取4例患儿血基因组DNA标本，针对可引起瓜氨酸血症候选基因ASS1、ASL、SLC25A13，应用PCR技术扩增包括外显子及其侧翼区在内的DNA序列。扩增产物直接测序，确定基因突变类型。结果1例患儿为精氨酸琥珀酸合成酶缺乏症，为ASSl基因C．236C〉T（P．$79F）与C．431C〉G（P．P144R）双重杂合突变；两例患儿为精氨酰琥珀酸尿症，分别为ASL基因C．434A〉G（P．D145G）与C．1366C〉T（P．R456W），C．331C〉T（P．R111W）与IVS8＋2insT双重杂合突变；另一例1岁患儿发现携带有SLC25A13基因85ldel4杂合突变，诊断为成年型瓜氨酸血症Ⅱ型。结论通过相关致病基因分析，准确地确定了4例患儿的疾病类型。

四例戊二酸血症I型患儿临床资料分析与基因突变研究

目的回顾分析4例戊二酸血症I型患儿临床资料特点，并探讨其基因突变类型。方法对戊二酸血症I型患儿进行头颅计算机断层扫描（computer tomography，CT）、磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI）影像学检查。应用串联质谱和气相色谱质谱分析患儿血氨基酸、肉碱和尿有机酸含量的改变。提取外周血基因组DNA，针对戊二酰辅酶A脱氢酶（glutaryl—CoA dehydrogenase，GCDH）基因设计特异性PCR引物，PCR扩增产物直接测序，确定GCDH基因突变类型。结果4例男性患儿表现为大头畸形，头围分别为50cm（14个月），47cm（9个月），46cm（5个月），51cm（14个月），均高于同龄儿的正常值。头颅影像学检查发现这4例患儿表现为大脑外侧裂及侧脑室扩大，额颞萎缩，蛛网膜下腔增宽，小脑蚓部异常等。4例患儿血戊二酰肉碱含量分别为：5．8μmol／L，7．5μmol／L，8．3μmol／L，7．9μmol／L（正常参考值为0～0．2μmol／L），同时发现尿中戊二酸含量大量增高。通过GCDH基因突变分析，证实4例患儿存在基因突变，其中C．146—149del4、IVS6-4一Ex7＋4de18、C．508A〉G（P．K170E）、c．797T〉C（P．M266T）和C．420del10为新发现的GCDH基因突变类型。结论戊二酸血症I型患儿以头围异常增大，神经系统损伤为主要临床表现，血串联质谱和尿气相色谱质谱分析对疾病的诊断起重要的提示作用，但确诊还需行基因突变分析。

应用高分辨率熔解曲线分析快速筛查和诊断citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症

目的探讨高分辨率熔解曲线（high-resolutionmelting，HRM）分析技术用于citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症（neonatalintrahepaticcholestasiscausedbycitrindeficiency，NICCD）筛查和诊断的可行性。方法根据中国人群SL（225A13基因的热点突变类型（851del4、1638ins23、IVS6＋5G〉A和IVS16ins3kb）设计特异性HRM扩增引物，挑选经测序证实的50名正常对照和20例NICCD患儿，建立和完善HRM检测条件。用优化后的HRM检测方法对171例临床疑似的NICCD患者进行HRM筛查。若受检样本的熔解曲线与阳性质控样品相吻合，则进行DNA测序分析。结果优化后的HRM方法能准确地对50名正常对照及20例NICCD患儿进行基因分型，其灵敏度和特异性均为100％（70／70）。重复实验表明，相同基因型的不同样品HRM熔解曲线完全吻合，重复性好。在171例疑似患儿中，有7例患儿熔解曲线与阳性质控样品基因型相符，其HRM基因分型为：1例851del4纯合突变，1例IVS6＋5G〉A杂合突变，3例851del4杂合突变，1例[IVS6＋5G〉A]＋[851del4]，1例[1638ins23＋IVS16ins3kb]＋[1638ins23]。DNA测序证实了HRM基因分型，准确率为100%。结论HRM技术具有高通量、操作简便、结果准确、重复性好等优点，可对临床疑似的NICCD患儿进行基因筛查和诊断。

伴紫癜、抽搐和甲硫氨酸血症的citrin缺陷病患儿临床表型与基因突变分析

目的分析1例伴紫癜、抽搐和甲硫氨酸血症为主要表现的citrin缺陷病患儿的临床特征，并探讨其SLC25A13基因突变类型。方法对患儿进行体格与一般实验室项目检查；应用串联质谱分析血氨基酸和肉碱浓度，气相色谱质谱法检测尿有机酸及半乳糖含量；应用高分辨率熔解曲线分析技术筛查SLC25A13基因18个外显子突变情况。结果患儿面部针尖样出血点和血小板计数减少（血小板计数：正常参考值为支持免疫性血小板减少性紫癜的诊断。常规实验室检查结果显示患儿凝血功能、心肌酶、肝功能、肝酶异常。串联质谱与气相色谱质谱结果提示患儿有甲硫氨酸血症（甲硫氨酸水平：正常参考值为但不表现有半乳糖血症、瓜氨酸血症和酪氨酸血症。SLC25A13基因突变分析发现患儿携带有IVSl6ins3kb突变，并且检测到第6外显子高分辨率熔解曲线异常，DNA测序证实患儿的SLC25A13基因第6外显子发生C．495delA突变，该突变在i00名正常对照中未检测到，为未报道过的新致病突变。家系突变分析显示患儿携带的c．495delA突变来源于父亲，IVS16ins3kb突变来源于母亲。结论citrin缺陷病具有临床异质性、生化代谢改变多样等特点。患儿临床症状的迁延不愈甚至有加重表现可能与C．495delA突变有关。

急性期川崎病患儿CD4^＋CD25^highFOXP3^＋调节性T细胞亚群改变及意义

目的 探讨急性期川崎病患儿CD4^＋CD25^highFOXP3^＋调节性T细胞亚群改变及其在川崎病免疫发病机制中的作用.方法 急性期川崎病患儿36例,同年龄健康对照组32名,川崎病患儿治疗前、后取血备检.采用流式细胞术检测外周血CD4^＋CD25^highFOXP3^＋、可诱导性T细胞共刺激分子（ICOS）^＋调节性T细胞、ICOS-调节性T细胞比例及IL-10、TGF-β、IL-35p35、IL-35EBI3、TGF-βRⅡ、ICOS、CD28蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测CD4^＋T细胞Smad3/4、TGF-β诱导的早期反应基因1（TIEG1）、痒同源物E3泛素蛋白连接酶（hch）等mRNA表达;ELISA检测血浆中TGF-β浓度.采用t检验进行统计分析.结果 ①急性期川崎病患儿调节性T细胞比例[（3.2±1.8）％]明显低于对照组[（7.3±2.9）％,t=6.9,P＜0.05],其中ICOS^＋调节性T细胞和ICOS^-调节性T细胞比例[（2.3±1.0）％,（0.9±0.3）％]均明显低于健康对照组[（4.7±1.4）％,（2.6±0.9）％,t=11.7,9.8;P均＜0.05],且ICOS＋调节性T细胞/ICOS^-调节性T细胞比值（2.6±0.7）高于对照组[（1.8±0.5）,t=9.4,P＜ 0.05],治疗后均明显恢复[（5.9±2.3）％,（3.9±1.6）％,（2.0±0.8）％,（1.9±0.5）％;t=5.5,5.0,8.2,4.9;P均＜0.05];②急性期川崎病患儿ICOS＋调节性T细胞FOXP3、IL-10、TGF-β、IL-35p35和IL-35EBI3表达水平明显低于对照组（t=5.5,4.8,8.0,6.6,9.6;P均＜0.05）,而ICOS-调节性T细胞FOXP3、mTGF-β表达亦低于对照组（t=7.5,10.0;P均＜0.05）,治疗后上述分子表达显著上调（t=3.7,3.7,8.5,6.1,7.7,5.3,7.0;P均＜0.05）;③急性期川崎病患儿血浆TGF-β浓度及CD4＋T细胞TGF-βRⅡ、Smad3、Smad4、TIEG1、Itch表达水平明显低于对照组,调节性T细胞表面ICOS、CD28表达亦低于健康对照组,治疗后均明显恢复.结论 TGF-β、ICOS、CD28信号异常可能是导致急性期川崎病患儿CD4^＋CD25^highFOXP3^＋调节性T细胞及其亚群比例失调的重要因素.

原发性肉碱缺乏症患者临床特点和SLC22A5基因突变分析

目的探讨12例原发性肉碱缺乏症患者临床表现与生化代谢特点，并分析其SLC22A5基因突变类型。方法对12例患者病历资料进行回顾性分析；SLC22A5基因突变分析则采用PCR扩增产物直接测序法和多重连接探针扩增技术。结果在12例患者中，3例有明显感染因素，6例患者临床表现有抽搐，5例患者表现有肝脏肿大，8例患者表现有高氨血症，9例表现有不同程度的心肌损害。12例患者通过DNA直接测序法检测出双等位基因致病突变，其基因突变类型有9种，包括：IVS2＋1G〉T、c.3G〉T（p.Met1Ile）、c.760C〉T（p.Arg254X）、c.1400C〉G（p.Ser467Cys）、c.844dupc（p.Arg282fs）、c.338G〉A（p.Cys113Tyr）、c.51C〉G（p.Phe17Leu）、c.659A〉T（p.Glu220Val）和c.1365dupC（p.Thr456fs）。在检测到的9种基因突变类型中，c.659A〉T（p.Glu220Val）和c.1365dupC（p.Thr456fs）为新发突变。1名病例为成年女性原发性肉碱缺乏症患者，其刚出生的新生儿筛查结果呈阳性。在检测到的基因突变类型中，c.760C〉T（p.Arg254X）和c.1400C〉G（p.Ser467Cys）等位基因频率最高，分别为37.5%（9/24）和29.2%（7/24）。12例原发性肉碱缺乏症患者多重连接探针扩增技术检测结果未见异常。结论原发性肉碱缺乏症患者临床表现复杂多样。SLC22A5基因突变类型以点突变为主，其中c.1400C〉G（p.Ser467Cys）等位基因频率较高，也可能为中国原发性肉碱缺乏症患者热点突变类型。

41例5α-还原酶2型缺陷症患儿临床特点及SRD5A2基因突变分析

目的探讨41例5α-还原酶2型缺陷症患儿临床表型特点及SRD5A2基因突变类型。方法收集分析患儿临床资料,包括体格检查、病史、实验室检查、B超等;并提取患儿外周血基因组DNA,采用PCR扩增产物直接测序法或靶目的基因序列捕获二代测序法检测SRD5A2基因突变类型。结果41例患儿年龄从4个月至11岁不等,汉族。所有患儿染色体核型为46,XY,SRY基因检测结果阳性。病例临床主要表现为小阴茎和尿道下裂,其中单纯表现为小阴茎的有26例,占总病例人数63%;其余15例为尿道下裂合并小阴茎,占总病例人数37%。在39例患儿中检测到双等位基因突变,2例患儿只检测到1个等位基因突变。在41例患儿中,共检测出16种基因突变类型,其中c.725A>G(p.Tyr242Cys)、c.694C>G(p.His232Asp)和c.548-9T>G这3种突变类型为未报道过的新突变。在16种突变类型中,以c.680G>A(p.Arg227Gln)为主,占所有突变类型60%(48/80)。结论5α-还原酶2型缺陷症患儿临床表现以小阴茎或尿道下裂合并小阴茎为主;c.680G>A(p.Arg227Gln)突变是中国5α-还原酶2型缺陷症患儿SRD5A2基因的热点突变类型。

急性期川崎病患儿粒细胞样髓源抑制细胞改变及意义初探

目的探讨急性期川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿粒细胞样髓源抑制细胞(granulocyte-like myeloid-derived suppressor cells,G-MDSC)改变及其在KD免疫发病机制中的作用。方法急性期KD患儿42例,分别于静脉输注丙种球蛋白(intravenous immune globulin,IVIG)治疗前、后直接取血备检,正常同龄儿童32例为对照组。流式细胞术检测外周血HLA-DR-CD11b+CD33+CD14-CD15+G-MDSC比例、活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度以及精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)、细胞程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T lymphocyte associated protein 4,CTLA4)、糖蛋白130(glycoprotein 130,gp130)、磷酸化信号转导和转录激活因子3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,pSTAT3)的蛋白质表达水平;实时荧光定量PCR检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、干扰素调节因子8(interferon regulatory factor 8,IRF-8)、IL-6受体α(IL-6 receptorαsubunit,IL-6Rα)、粒细胞集落刺激因子受体(granulocyte colony-stimulating factor receptor,G-CSFR)、CCAAT/增强子强合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)、细胞因子信号抑制物1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)、SOCS3 mRNA表达;染色质免疫共沉淀法检测SOCS1、SOCS3基因启动子组蛋白H3乙酰化水平;ELISA检测血浆IL-6、粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)及培养上清中IL-10、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度。结果(1)与对照组比较,急性期KD患儿外周血G-MDSC比例、胞内ROS浓度以及Arg-1、PD-L1、CTLA4表达水平明显增高(P<0.05),LPS刺激的G-MDSC培养上清中IL-10、TGF-β浓度亦高于对照组(P<0.05),但合并冠状动脉损伤组(CAL)患儿前述7项指标均低于未合并冠状动脉损伤组(NCAL),差异有统计学意义(P<0.05),经IVIG治疗呈不同程度恢复(P<0.05);各组间iNOS表达及培养上清中NO浓度差异无统计学意义(P>0.05)。(2)急性期KD患儿血浆IL-6、G-CSF浓度及G-MDSC中IL-6Rα、gp130、G-CSFR、pSTAT3、C/EBPβ表达显著增高,抑制性转录因子IRF-8表达水平明显低于对照组(P<0.05),其中CAL组血浆IL-6、G-CSF浓度及IL-6Rα、gp130、G-CSFR、IRF-8表达高于NCAL组(P<0.05),而pSTAT3、C/EBPβ表达低于NCAL组(P<0.05),经IVIG治疗后明显恢复(P<0.05)。(3)与对照组比较,急性期KD患儿外周血G-MDSC胞内SOCS1、SOCS3表达水平及其启动子组蛋白H3乙酰化水平明显降低(P<0.05),但CAL组前述4项指标均高于NCAL组(P<0.05),经IVIG治疗后明显恢复(P<0.05)。相关分析显示,急性期KD患儿G-MDSC胞内SOCS1、SOCS3表达与pSTAT3的蛋白质水平呈负相关(r=-0.46和-0.32,P<0.05)。结论SOCS1和SOCS3基因组蛋白乙酰化修饰水平异常所致G-MDSC数量及功能缺陷可能与KD患儿免疫功能紊乱及血管损伤有关。