开设综合性生理学实验课的实践与体会

生理学探索性、综合性实验有利于提高学生的系统综合和创新能力,为此,根据实验室现有条件,我们对传统实验教学进行改革,设计成为探索性综合性实验并在七年制学生中开展。该实验既与课本知识紧密结合,又与临床密切相关。实践证明,该实验使学生系统性掌握生理学知识的同时为他们临床分析解决问题奠定了基础。

核转录因子κB RNA适体重组腺病毒载体的构建

目的 :构建核转录因子 κB(NF- κB) RNA适体 (aptamer)重组腺病毒载体 p Adeasy- aptamer,制备重组腺病毒 Ad- ap-tam er并测定其活性。方法 :采用亚磷酸二酯法合成 aptamer c DNA的 6个寡核苷酸片段并拼接完整 ,克隆至 p GEM- 7Z载体中 ,经酶切鉴定和测序后把 aptam er c DNA定向插入穿梭质粒 p Shuttle- CMV的多克隆位点上 ,再将重组质粒 p Shuttle- CMV-aptamer与腺病毒载体 p Adeasy在大肠杆菌 BJ5 183中同源重组产生重组腺病毒载体 p Adeasy- aptam er。用脂质体转染p Adeasy- aptam er至 HEK2 93细胞 ,产生有感染能力的重组腺病毒 Ad- aptam er,RT- PCR检测重组腺病毒在感染细胞中的表达 ,并测定其对体外抑制炎症细胞系释放炎症介质 IL- 1β和 IL- 6的影响。 结果 :感染重组腺病毒的细胞具有 aptamer c DNA的表达 ,重组腺病毒能抑制感染细胞炎症介质的释放 ,具有预期的生物学活性。结论 :产生具有生物学活性的重组腺病毒 Ad-aptamer,为下一步基因治疗因 NF-

核转录因子-κB与疾病治疗

核转录因子-κB是一种广泛存在的核转录因子,实验证实NF-κB的过度活化与多种疾病相关。本大综述了近年研究获得的在疾病状态下抑制NF-κB过度活化从而缓解病症的几种方法。

人妊娠子宫平滑肌细胞的组织块培养及鉴定

目的建立简便有效的人妊娠子宫平滑肌细胞的原代培养方法。方法人妊娠子宫平滑肌组织经剪切后接种,原代培养子宫平滑肌细胞,并通过免疫细胞化学方法检测平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)进行细胞鉴定。结果培养的细胞呈典型的梭状肌细胞样生长,SMA免疫细胞化学染色为阳性。结论该方法简便经济,可获得状态良好的纯净的子宫平滑肌细胞。

开展生理学主讲教师责任制教学的研讨

主讲教师责任制教学 ,指由一位教师对某一门课程进行全程或基本全程教学的模式。第二军医大学生理学教研室实施中重视选择主讲教师 ,做到精心组织、精心设计课程和教学方法。实施主讲教师责任制密切了师生关系 ,增强了教师责任感 ,对提高课堂教学质量具有重要意义.

NF—kB与AIDS

AIDS对人类的危害越来越严重，核转录因子-kB（unclear factor-kappa B)是细胞内一种重要的转录因子，很多研究表明它在AIDS的发病过程中起重要的调控作用，它参与抗凋亡和促进HIV转录等过程，NF－kB和AIDS是近年的医学研究热点之一。本文将对NF－kB、AIDS以及两者的的关系做一综述。

小胶质细胞线粒体功能障碍在脓毒症脑病中的研究进展

脓毒症患者表现出长期认知功能障碍和局灶性神经功能缺损,统称为脓毒症相关脑病,其病理机制十分复杂。最近的研究表明,线粒体功能障碍包括线粒体DNA(mtDNA)损伤与代谢缺陷,这些均发生在小胶质细胞激活和其引发的神经炎症之前。因此,深入了解脓毒症脑病线粒体功能障碍与小胶质细胞活化之间的关系,对于揭示脓毒症的发病机制以及脓毒症脑病的早期诊断和治疗找到有效的方法具有重要意义。本文综述了mtDNA、线粒体代谢的变化在脓毒症脑病小胶质细胞活化中的作用及靶向小胶质细胞线粒体作为脓毒症脑病潜在治疗策略的研究进展。

前额叶皮质参与慢性疼痛恶性循环的研究进展

慢性疼痛常伴随焦虑、抑郁等负性情绪,导致疼痛强度进一步加重,慢性疼痛与负性情绪之间存在恶性循环。前额叶皮质(PFC)覆盖于额叶前部的大脑皮质区域,主要参与负性情绪的发生发展,在慢性疼痛中也具有重要作用。PFC活性的变化与慢性疼痛后产生的负性情绪密切相关,可能是慢性疼痛与负性情绪恶性循环中的关键核团。因此,未来深入研究PFC参与慢性疼痛恶性循环的机制,可以为临床伴有抑郁或焦虑等负性情绪的慢性疼痛患者的治疗提供帮助。

适体的临床应用

适体 (aptamer)因其与靶分子结合的高亲合力及强特异性 ,而具有广泛的应用价值。近年来对适体功能的研究多集中在分子和细胞水平 ,要将适体应用于临床治疗必须进一步对适体在动物体内及人体内的活性功能进行研究。

前列腺素E_2不同受体对足月妊娠子宫肌细胞分泌炎性细胞因子的不同调节作用（英文）

前列腺素E_2 (prostaglandin E_2, PGE_2)在妊娠维持和分娩启动中起着关键作用。愈来愈多的研究表明,人类妊娠的维持和分娩启动是一个炎症过程。本研究用原代培养的足月妊娠人子宫平滑肌细胞(human uterine smooth muscle cells, HUSMCs)作为研究对象,观察PGE_2四种受体亚型(EP_1、EP_2、EP_3和EP_4)对妊娠HUSMCs分泌炎性细胞因子的影响。用药物处理和/或转染各受体siRNA后,使用ELISA试剂盒检测HUSMCs培养液中炎性分泌因子的浓度。结果显示,PGE_2可剂量依赖性促进白细胞介素6 (interleukin 6, IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα, TNFα)分泌,而抑制趋化因子(c-x-c基序)配体8(CXCL8)释放,但对IL-1β和趋化因子(c-c基序)配体2 (CCL-2)的分泌没有影响。EP_1/EP_3激动剂17-苯基-trinor-PGE_2刺激IL-6和TNFα的分泌,抑制IL-1β和CXCL8的分泌。转染EP_3 siRNA能逆转17-苯基-trinor-PGE_2对IL-6和TNFα分泌的影响,但是17-苯基-trinor-PGE_2对IL-1β和CXCL8的作用仍然存在。敲低EP1可阻断17-苯基-trinor-PGE_2对IL-1β分泌的抑制效应,而17-苯基-trinor-PGE_2促进IL-6和TNFα分泌的作用仍然存在。EP_2和EP_4激动剂均可刺激IL-1β和TNFα分泌,这种效应可分别被EP2siRNA和EP4 siRNA所逆转。磷脂酶C (phospholipase C, PLC)和蛋白激酶C (protein kinase C, PKC)的抑制剂可阻断17-苯基-trinor-PGE_2对TNFα和CXCL8分泌的影响。PI3K抑制剂LY294002和P38抑制剂SB202190可分别阻断17-苯基-trinor-PGE_2诱导的IL-1β和IL-6分泌。腺苷酸环化酶和PKA的抑制剂均能逆转EP_2和EP_4激动剂促进IL-1β和TNFα分泌的作用,而PLC和PKC抑制剂则可阻断EP_2和EP_4诱导的TNFα分泌,但不能阻断IL-1β的分泌。以上结果表明,PGE_2不同受体对子宫肌细胞分泌炎性细胞因子具有不同作用,提示PGE_2可能通过不同受体的精细调节来调控妊娠期子宫肌层中的炎性微环境。

妊娠中期孕妇血清IL-1、IL-6、IL-8、TNF-a及CRH浓度预测早产的初探

【目的】探讨妊娠中期(孕24～28周)无症状孕妇血清IL-1、IL-6、IL-8、TNF-a及CRH浓度与早产的关系。【方法】选择2015年1月—2017年12月在上海市浦东新区妇幼保健院定期产检,孕24～28周无症状的孕妇,抽取其静脉血,采样冻存待测。随访其妊娠结局,根据妊娠结局选择早产组100例,包括自发性早产71例和未足月胎膜早破29例,并选择同期足月分娩者100例为对照组。采用ELISA法检测血清IL-1、IL-6、IL-8、TNF-a和CRH的浓度。两组产后胎膜送病理检查,判断有无绒毛膜羊膜炎。【结果】早产组孕24～28周血清IL-1、IL-6、IL-8浓度高于对照组(P<0. 05),血清TNF-a、CRH浓度无明显升高(P> 0. 05)。早产绒毛膜羊膜炎组血清IL-6、IL-8浓度高于早产非绒毛膜羊膜炎组和对照组,早产非绒毛膜羊膜炎组和对照组差异无统计学意义(P<0. 05);早产绒毛膜羊膜炎组的血清IL-1浓度与早产非绒毛膜羊膜炎组比较,差异无统计学意义,但明显高于对照组(P<0. 05)。3组间血清TNF-a和CRH的浓度差异无统计学意义(P>0. 05)。血清IL-1预测早产的ROC曲线下面积(AUC)为0. 843,最佳界值为10. 699 pg/m L; IL-6的AUC为0. 675,最佳界值为104. 411 pg/m L; IL-8的AUC为0. 55,最佳界值为65. 496 pg/m L。【结论】孕24～28周无症状孕妇的血清IL-1、IL-6、IL-8水平对预测早产有一定的价值。

干扰素基因刺激蛋白信号激活及其参与慢性疼痛机制的研究进展

干扰素基因刺激蛋白(stimulator of interferon genes,STING)作为先天免疫的组成部分,激活后可参与机体对异常双链DNA的防御。在中枢神经系统中,STING的异常激活与神经炎症间存在密切联系,进而影响慢性疼痛的发生与发展。文章对STING的病理生理作用,下游TANK结合蛋白1(TANK⁃binding kinase 1,TBK1)/干扰素调节因子3(interferon regulatory fac⁃tor 3,IRF3)、NF⁃κB信号通路激活过程与STING及其下游因子通过影响神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞参与慢性疼痛发生发展的可能机制进行综述,为以STING作为靶点缓解慢性疼痛的机制研究提供参考。