大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体的构建及其在蛋白酶基因表达中的应用

利用基因重组技术,以枯草杆菌表达载体pWB980为骨架,插入大肠杆菌的克隆载体pUC18中的抗性基因和复制子,构建穿梭质粒pY980coli。将海洋细菌蛋白酶基因hspa插入pY980coli载体P43启动子下游,导入枯草杆菌WB600中,可实现活性表达。

宏基因组二代测序技术在肺泡灌洗液病原检测中的应用

目的:为了探讨宏基因组二代测序技术(mNGS)对于下呼吸道标本的病原诊断效率。方法:选取65例被诊断为肺部感染的病例,行支气管肺泡灌洗,取2份标本,1份做mNGS,另外一份同时做细菌培养,真菌培养,抗酸染色和六胺银染色。通过分析mNGS和传统培养与涂片染色的检出病原分布,检出阳性率,对比两者的检出效率。通过分析mNGS阳性组和mNGS阴性组的实验室检查,并发症,预后,平均住院时间等临床资料,来分析mNGS检测对于临床诊疗的作用。结果:mNGS的总体检出阳性率为72.30%(47/65),同时进行的培养总体阳性率为38.46%(25/65),两者具有显著差异P<0.05;耶氏肺孢子菌和结核分枝杆菌的mNGS检出率分别为10.77%(7/65)和6.15%(4/65),六胺银染色检出阳性率为1.54%(1/65),抗酸染色检测阳性率为6.15%(4/65),mNGS可提升耶氏肺孢子菌的检出率,而对结核分枝杆菌的检出无明显优势,此外mNGS检测到35例混合感染,而培养方法只检测到7例细菌和真菌的混合感染。对比分析mNGS阳性组和mNGS阴性组的临床资料发现mNGS阳性组和mNGS阴性组的CRP水平、抗生素调整率、平均机械通气时间、平均住院时间分别为:83.55±73.33和33.55±23.51、61.70%和33.33%、5.95±8.04天和13.94±15.26天、18.41±13.29天和30.17±21.49天,它们具有显著性差异(P<0.05)。结论:呼吸道肺泡灌洗液的mNGS对于下呼吸道感染患者的病原检测具有很好的作用,能够显著提高病原检出率,并且能够检测混合感染,提高特殊病原体的检出效率,对于及时调整抗生素的使用和缩短住院时间,改善预后有十分重要的作用,因而对于重症患者应尽早进行mNGS的检测。